【word】 门脉高压犬血清一氧化氮水平与血流动力学研究

【word】 门脉高压犬血清一氧化氮水平与血流动力学研究 门脉高压犬血清一氧化氮水平与血流动力 学研究 陕西医学杂志2011年8月第4O卷第8期945 门脉高压犬血清一氧化氮水平与血流动力学研究 西安交通大学医学院第二附属医院干部病房(西安710003)时代音刘晓丹 摘要目的:建立犬肝前性门脉高压症模型,探讨一氧化氮(NO)与门脉高压关系;: 通过行缩窄门静脉主干1/e加丝线慢性栓塞术,建立犬肝前性门脉高压模型,应用彩色多普勒超 声造模前后肝门静脉直径,每分血流量,用硝酸还原酶法测定血清一氧化氮浓度;结果:门脉 高压犬血清一氧化氮水平均显着升高,门脉高压犬模型建立前后彩色多普勒超声发生改变, PvD较前升高;PVV较前减慢,说明血清一氧化氮水平在门脉高压诊断中有一定的应用价值. 主题词门静脉压血流动力学一氧化氮/血液动物,实验犬 【中图分类号】R575.2【文献标识码】A【文章编号】1000—7377(2011)08—0945—03 肝硬化是我国常见的消化系统疾病,它可导致门 静脉高压.门静脉高压症是以门静脉系统血流动力学 异常变化为特点,一氧化氮(NO)在门静脉高压及高动 力血液循环中起着重要作用,超声检查作为一种非侵 人性检查方法,可以比较准确反应门静脉血流变化情 况,从而为门静脉高压症诊断提供依据.本文通过建立 犬门静脉高压模型,研究一氧化氮与门脉高压及血流 动力学之间关系,为临床诊断和治疗肝硬化提供参考 依据. 对象与方法 1研究对象健康成年杂种犬12只’,雌雄各半, 体重15.23?1.05Kg,由西安交通大学医学院实验动 物中心提供,正常喂养一周.通过行缩窄门静脉主干 1/2加丝线慢性栓塞术建立犬肝前性门脉高压症模 型. 2方法实验犬术前晚禁食.采用2硫喷妥 钠lml/kg体重静脉注射麻醉.右肋缘下斜切口进腹, 操作如下:?游离门静脉主干,在胃冠状静脉注入平面 以上,用丝线暂时阻断,采用”插管(管内事先装有1O 号丝线一根)水冲法”分别于门静脉主干一左侧干一左 外支及门静脉主干一右侧干一右前或右后支各放置长 度约12,16cm及9,12cm的丝线一根.放线同时,逐 渐退出插管,最后用0号无损伤缝合线将门静脉破口 缝合并固定丝线尾端.?缝扎门静脉主干使门静脉直 径缩窄1/2,除去阻断用丝线.?离断肝圆,肝镰状,左 三角及肝胃韧带.手术当日补液1O0O,1500ml.术后 给予青霉素4O万U,庆大霉素4万u,肌注,2次/d, 共3d.术后喂养2周.抽取模型犬周围血及门静脉血 进行NO.一/NO.一测定,分别于建立犬门脉高压症模 型手术前一天和术后2周各进行一次.于建立犬门脉 高压症模型手术当时和术后2周测PVP,选肠系膜上 静脉较小分支插管至门静脉主干,接静脉压力换能器 测量,单位(kPa). 3血流动力学指标检测用探头4V2,频率2.5 , 4.0MHz,脉冲多普勒频率3.5MHz超声探测实验 犬门静脉,肝动脉,脾静脉,肠系膜上静脉直径,最大血 流速度和每分血流量.实验犬采用2%硫喷妥钠0. 5ml/Kg体重静脉注射麻醉.取左侧卧位,探头先置于 右肋缘下斜切面,观察肝脏形态,大小,肝实质回声和 门静脉,肝动脉走行,管腔变化及血流频谱.探头再置 于上腹部行横断面扫查,观察肠系膜上静脉走行,管腔 变化及血流频谱.最后,实验犬取右侧卧位,探头置于 左侧腹部相当于脾脏体表投影处,观察脾脏形态,大 小,脾脏实质回声和脾静脉走行,管腔变化及血流频 谱.测量血流频谱时,门静脉测定取样容积置于门静脉 主干内(术后2周测定时,取样容积置于门静脉主干缩 窄处下方约5mm处门静脉主干内);脾静脉测定置取 样容积于脾门处脾静脉腔内;肠系膜上静脉测定置取 样容积于其汇人门静脉前约]0mm处.取样线与血流 方向夹角<60.,取样框大小4.0ram,速度测量范围一 0.4,O.4cm/s.每分流量按公式:(D2/4)x7c×0.57× Vmax×60计算.D为所测血管管腔直径(ram)~Vmax 为最大血流速度(m/s).检查中辅以录像,摄片及 SONY记录仪做连续性记录.门静脉,肝动脉,脾静 脉,肠系膜上静脉直径,最大血流速度和每分血流量, 分别于建立犬门脉高压症模型手术前一天和术后2周 各进行一次. 4一氧化氮检测方法用比色法测定血浆的 No,试剂购白军事医学科学院.测定原理:NOz一/ NO.一与磺酸及萘乙烯二胺盐反应生成粉红色偶氮化 合物,以比色法测定NO2-/NO.一浓度间接反映血清 No水平. 5统计学方法实验数据用均数?差表示, 各组数据采用t检验进行统计分析,阳性率采用X.检 946陕西医学杂志2011年8月第4O卷第8期 验进行统计分析进行处理.有关变量采用直线回归相 关分析,P<0.05为差异显着.所有实验数据输入 SPSS.软件进行统计处理. 结果 退,体重平均下降1.5kg.出现呕吐5(12)例,腹泻6 (12)例,黑便2(12)例,少量腹水8(12)例.所有实验犬 术前均无腹壁浅静脉曲张,术后2周均出现1,4条, 直径为0.3,O.6cm,出现率为100. 1门静脉高压症模型犬一般情况制备门脉高2门脉高压症模型犬血 液生化检查结果见表 压症模型后,实验犬精神,活动,饮食均较术前有所减l. 表1门静脉高压模型犬建模前后血常规及肝功变化 注:P>O.05 3门脉高压症模型犬血清NO水平测定结果 具体数据见表2. 表2门脉高压模型犬建模前后 血清NO2/NO3水平变化(umol/L) 注:P<O.05 4门脉高压症模型犬PVP以及犬PVP与血清 No水平相关性分析实验犬术前PVP为1.34?0. 23kPa,术后2周PVP为2.97?0.28kPa,术后升高有 显着性差异(P<O.001).门脉高压症模型犬PVP与 周围血NO一/NO.一水平呈显着正相关,相关系数为 O.783(尸<0.01).门脉高压症模型犬PVP与门静脉 血NO.一/NO.水平呈显着正相关,相关系数为0.806 (P<0.01). 5建模术前及术后2周彩色多普勒超声检查结 果见表3. 表3门脉高压模型犬建模前后 彩色多普勒超声检查结果 6f-j脉高压症模型犬彩色多普勒超声检查结果 与血N0水平相关性分析门脉高压症模型犬PVD 与周围血N0/NO.,水平呈显着正相关,相关系数为 0.890(P<o.01).门脉高压症模型犬PVD与门静脉 血N02一/N03一水平呈显着正相关,相关系数为0.886 (P<0.01). 门脉高压症模型犬PVV与周围血NO/NO.一 水平呈显着正相关,相关系数为0.870(P<O.01).门 脉高压症模型犬PVV与门静脉血NO.一/NO.一水平 呈显着正相关,相关系数为0.890(P<O.01).f-j脉高 压症模型犬PVF与周围血NO一/NO.一水平无相关关 系,相关系数为0.530(P>O.05).门脉高压症模型犬 PVF与门静脉血NO.一/NO.水平呈正相关,相关系 数为0.645(P<0.05). 讨论 本实验发现门脉高压犬模型建立后NO明显升 高,NO与门静脉直径及门静脉血流量呈显着正相关, 提示它与门脉高压的密切关系.Vallance等认为,N0 对门脉高压所致的高动力循环起关键作用,血管内皮 细胞释放的No引起外周血管扩张,血流量增加,低血 压,外周阻力下降,从而导致高动力循环[】]继而激活肾 素一血管紧张素一心房肽系统.由于高排低阻的高动力 学改变,使肝硬化患者有效的血容量下降,肾灌注不 足,导致尿量及尿钠排出量减少,进一步加重腹水等并 发症的发生.内毒素进人体循环增多之间形成恶性循 环,这是造成肝功能进一步失代偿及产生多种严重并 发症的重要原因之一.因此,肝硬化患者血浆中NO水 平测定,可作为判断病情严重程度的一个有价值的指 标. No为一种无色气体,半衰期仅数秒,微溶于水, 具有脂溶性,易穿透生物膜.在体内由NO合成酶 (NOS)催化底物左旋精氨酸产生,NO的合成部位甚 少,几乎遍及所有细胞.NO在细胞与细胞间信息传 递,血管舒张,免疫及细胞毒性中起重要作用,它作为 人体内的一种生物信使,在多种临床疾病及病理生理 过程中的作用日益受到重视.肝硬化时,NO可参与调 节肝窦微循环,通过自主分泌来抑制贮脂细胞收 缩,在代偿性肝硬化中有调节系统血液动力学的作用, 与食道静脉的产生和破裂有关.肝硬化门静脉高压患 者存在着以内脏动脉血管阻力下降,门静脉血流增多, 伴随门脉压力升高为表现的高动力性内脏循环以及心 输出量增多,周围血管阻力降低为主的高动力性体循 环.这种血流动力学紊乱的原因之一是某些内源性扩 陕西医学杂志2011年8月第4O卷第8期947 血管物质的累积,NO就是其中一种能在局部发挥强 大扩血管作用的物质.研究表明:多种细胞都可在细菌 脂多糖(LPS)毒素及多种细胞因子诱导活化,产生大 量具有细胞毒性作用的内源性NO,参与各种肝病的 病理过程.肝损伤时NO由iNOS基因表达的增多而 介导生成.NO一方面具有特异性杀伤病毒,细菌等病 原体,并通过与超氧化物结合,形成无毒代谢产物 NO一/NO.一,从而避免氧自由基损害肝细胞,有助于 肝脏渡过应激期,对肝细胞起保护作用,另一方面可通 过内毒素及相关因子,如白细胞介素一1(IL一1),干扰素 (INF)等刺激肝细胞,Kupffer细胞,肝窦内皮细胞大 量生成内源性No,从而导致多种病理生理效应,如抑 制肝细胞蛋白质合成,参与多种原因所致的肝细胞损 害等. 早在1991年VallanceE]就提出内源性No合成 和释放过多,是引起肝硬化高动力循环的主要介质这 一 假说,并逐步得到证实.应用特异性No抑制剂进行 试验研究,证明NO参与了门脉高压动物的内脏系统 血流动力的调节L3.4_.特异性No拮抗剂可以引起内脏 和系统血管的收缩.这种缩血管效应在门脉高压动物 显着大于正常对照组,说明NO产生过多在门脉高压 扩血管过程中至少部分起了作用[3”].在门脉高压时血 管对缩血管物质反应性降低,这种低反应性可造成内 脏和系统血管的扩张,但NO抑制剂能够纠正这种低 反应性. 由于NO与肝脏疾病的研究时间较短,且NO具 有有益有害的双重作用,这种双重性增加了研究难度, 鉴于不同细胞生成的NO合酶有差异,对其抑制剂的 敏感性亦各不相同,需要能选择性地抑制内脏循环或 肝组织中过多的No,避免药物的副作用.因此,将 No与肝病关系的研究深入下去,可望阐明肝病的发 病机理,提供有效,理想的治疗. 参考文献 [1]黄颖秋,莫剑忠,张德中.血管活性物质与肝硬化血流动 力学改变.国外医学.内科学分册,1997,24:55. [2]Garcia—PaganJCFernandezM,BernadichC,eta1.Effects ofnitricoxideInhibitiononthedevelopmentoftheportal hypertensivesyndromefollowingportalveinstenosisin therat.AmJPhysio,1994,6(1):267. r3]WadstromT,HanninenML.OtherHelicobacterinthe digestivetract.CurrOpinGastroenterol,1999;15(1): 53—56. [4]WardJM,FoxJG,AnverMR,eta1.Chronicactive hepatitisandassociatedlivertumorsinmicecausedbya persistentbacterialinfectiowithanovelHelicobacter species.JNatlCancerInst,1994;88(6):1222—1227. (收稿:2011-03—11) (上接第941页) 的一般状态和肠道病变.DAI是评价实验模型一般状 态的一个客观指标,组织学评分是评价实验模型肠道 组织病理学改变的客观指标,通过对肠道组织切片HE 染色后观察粘膜内的组织学变化来评价疾病活动程 度.移植后5周小鼠结肠炎症状缓解,DAI积分有所回 落,体重也有明显增加,实验中观察到CM—Dil标记的 移植人源细胞在肠组织内的定植,表明移植的人脐带 MSC可能参与修复受损肠道粘膜过程,PCR结果也证 实了这一结论. 人脐带血MSC来源广泛,采集方便,我们的前期 研究显示在人脐带中MSC细胞的收获量较脐带血,骨 髓来源者更高,并且在有限扩增后其生物学特性保持 不变,鉴于其种种优势,其必将在其他组织损伤疾病中 可能同样发挥重要作用. 参考文献 [1]蒋洁,张雪梅,张建湘.脐带间充质干细胞研究进展 EJ].广东医学,2010,31(14):1885 r2]MatthayMA,GoolaertsA,HowardJp,eta1. 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