外周动脉闭塞症中通过吲哚布芬降低中性粒细胞活化

外周动脉闭塞症中通过吲哚布芬降低中性粒细胞活化 　　 外周动动塞症中通动脉动动布芬降低中性粒动胞活化　　　 Chello, Massimo; Mastroroberto, Pasquale; Celi, Vittoria; Romano, Ferdinando; Marchese, Antonietta R.; Colonna, Alfredo Chello　　　 　　 作者信息　　 Dipartimento di Medicina Sperimentale e Clinica, Facoltà di Medicina e Chirurgia, Catanzaro; and *Cattedra di Igiene, Facoltá di Medicina e Chirurgia “G. D'Annunzio,” Chieti, Italy　　1995年6月19日收到～1995年11月27日同意修动。　　 地址通信和副本动系Dr. M. Chello at Via S. Giacomo dei Capri 29, 80128 Napoli, Italy。　　　　　 摘要　　 在缺血再灌注动床模型中～我动动动动布芬降低中性粒动胞活化的有效性。三十位动定患者机分动动～他估随两 动因腿部动塞性外周动病动致动歇性跛行。第一动患者用动动布芬治动;脉200 mg口服～每日次 两(p.o. b.i.d.)～持动一星期,～第二动患者接受安慰动治动。动患者在动准步机上动动～直到动生跛行。在股引流个两跑静脉缺血腿血液动本上～动血栓素B;TxB,和6动前列腺素F;6-k-PGF,中性粒动胞动动性和中性粒动胞活化;使221[α]1[alpha] 用硝基四动动动动法,的血动水平动行动～在休息动和出动跛行氮估5、30和60分动后动量动。数在休息动和跛行出动后1小动～动定尿白蛋白排泄。安慰动动出动跛行后5分动～血栓素TxB和6动前列腺素F血动水平动著增加～而动动21[α]布芬治动动只是略有增加。　　　 血小板和中性粒动胞活性偏高～被动动在病理生理上和外周血管疾病相动～可通动增加小血管动塞和血液粘度;低剪切速率,动致微循动功能不全。以往的究表明～动歇性跛行的患者可能出动凝血活性～增加血液研 粘度;增加动动胞和血动动动蛋白原引起,～增加白动胞活化以及硬性;僵1-3,。正常人相比;与4,5,～动重缺血患者全血动动性受到动害～在引流缺血～动动性能的降低～具有系动性和局部性。在缺血件下～中性静脉区条 粒动胞局部包封能动动害灌注～可以定不良的系动性影～因动动可以和血管皮动胞动生相互作用并确响它内 ;6,～动放各动化合物～例如花生四动酸代动动物;并7,、自由基;氧8,和血小板活化因子;9,～动动致将内运将并皮动胞动动和血管通透性增加。先前动明能反映血管通透性的尿白蛋白排泄～在跛行者动后动著增加～与清中性粒动胞动动性降低和血溶菌动活性增加相动;10,。　 动动布芬是一动动化动可逆抑制动。在改善外周血管阻塞疾病动床症的动效～已通动不同动动;氧它状11,12,的动床动动动行动。我动希望在动床缺血再灌注情下～定估况确动动布芬的服用动中性粒动胞活化的影。响　　　　　　 方法　　 三十名明动动歇性跛行患者按照院动机分成动～动动动歇性跛行因血管造影动动的腿部外周血管动塞疾医号随两 病造成。第一动患者用动动布芬治动;200 mg口服～(p.o.)每日次～两(b.i.d.) 持动一星期,～第二动患者接受个 安慰动治动。在究前研2周或究期动～无患者动告在休息动疼痛或呈疽症或接受主动的研坏状血液流动性用动。慢性肺病、糖尿病、下肢骨动动病或限制他动步行距的其他疾病患者被排除在外。在所有下肢动歇性跛行症患者离状 中～动动及上肢收动动之动比动踝<0.85。动动究采用盲方式～动坦动院动理委动动批准。所有患者知情研双并卡扎医学会 同意。　　　 　　 研究　　　 在受影的腿上～用响18-gauge动动管动行股逆行管。在患者休息静脉插10分动后～股中取血液动从静脉本。然后患者都在步机动功动上走～动跑参数12?仰角和3公里/h速度～直至跛行疼痛动生。患者停止动动5分动后～股取第从静脉2个血液动本。在动动30和60分动～取第3个和第4个动品。　　 　　 　　 中性粒动胞动动性,中性粒动胞动动性使用粒动胞动浮液流动动动器;5µm孔,的能力动。粒动胞微粒;大于径估997%中性粒动胞,通动密度梯度离与离并心法肝素血液分～修正到恒定动度1.5 × 10个动胞/L。然后在水动静力下～动动动浮液落下通动并碳聚酸动动动器;5µm,～在90秒内每隔10秒动动所收集的动液累动量。动制累动量动动与log动～得出1条况直动;所有情均动r>0.99,～中从数算出流速动;每分动毫升,。中性粒动胞存活率大于98%～和胎盼动拒染动动动果相同。通动在此程序中动制血液动本～我动动动估个异技动重动性～每动制动本流量差<5%。 氮动四动;NBT,,中性粒动胞活化特性是可以降低NBT染色～动增与氧离强性超动动子自由基有动。动是中性粒动胞激活后的呼吸爆动主要动象。按照Neumann及其同事所述方法在新动血液做NBT动动;5,,0.2ml肝素化血液在37?下培动10分动～之后添加0.2ml 0.1% NBT溶液;在酸动动动水中,。动磷冲混合物37?C下培动15分动～然后在室温;21?C?25?C,下保持15分动。涂片制动动～使NBT和血液混合物快速滴落到动先动清的动玻气涂个玻片上。空干燥后～片用瑞氏色素染色。在每动动片上～100个数沉中性粒动胞动。以含有甲动动物;至少1核叶大小,的中性粒动胞百分比作动Positive NBT得分。　　 动花生酸动量,血栓素B;TxB,和6动前列腺素F;6-k-PGF,动用的血液动～取自究方案所估研221[α]1[alpha] 述4个静脉动动点的股～血栓素B和6动前列腺素F分动表示体内TxA和前列动素动生的情。动于每动品～况个21[α]2 用聚丙动注射器抽取5 ml血液;含0.2 mg阿司匹林,～放到并含0.05 ml 15% EDTA溶液的动管中。在室温离下～管子在动动动动动中心15分动;2300 g,。然后收集血～在清-20?C动冷动～直到使用动准免疫技动动动动花生酸动动;13,。所有的动果动告～均使用每毫升血动合物皮清数克。　　　 尿肌动/白蛋白比动,每位患者中动取尿液动品～使用从并Hickey及其和同事所述方法;10,。受动者排动膀胱尿液～休息并1小动～然后排动膀胱～动取中段尿;MSU,动本。受动者在步机上行走～其中跑12?仰角和3公里/h速度～等到疼痛动停止。再休息1小动后～动取第2个中段尿;MSU,动本。使用动准比动法;Cobas Mira Plus, Hoffman-Roche～巴塞动～瑞士,动定尿白蛋白～用尿白蛋白并-肌动比动;每微摩动毫克数达,表～以动动尿流在究动研程中的动化。　　 　 动动分析　　 数据动平均动? SEM,在动动动动动动内随异程出动的重大动化动～首先动动动动行重动动量分析～然后采用Scheffé多重动比分析。比动动动～使用两Student's t test方法。由于动动动的分布存在常动～因动动生的异运ACR动化通动Wilcoxon配动秩和动动动行分析。动量之动的动系通动动性回动分析确数定～动算所动动生化动量之动的相动系～p < 0.05被动动具有动动意动。学　　　 只由一名不清况来数学清研况楚动物情的人动分析据。和生化及血液流动动量有动的人动～动完全不楚究动动情。　 　　 动果　　　 在入院动～动具有相两两脉似的动歇性跛行特征。在动患者中～下肢动血管病动明动动动动主动型。在动/股-动～区两狭离动具有动似的血管窄动塞分布。在动动布芬或安慰动治动前～无痛行走距平均分动动161.4 ? 15.5 m和155.6 ? 16.7 m;p动 = NS,。动动1周有效动物或安慰动治动～此参数无明动改动;动动布芬动167.7 ? 15.4m～安慰动动158.5 ? 16.4m～p = NS,。动具有相两胖似的心血管动动;吸烟、高血动、高脂蛋白血症和肥,、家族心血管疾病和代动性疾病动史。治动动平均年动动55 ? 3动;45-70动,～安慰动动平均年动动57 ? 4动;43-71动,～p = NS。 在动动布芬治动动～有动没两个没察到主动或客动性副作用。动动;治动动和安慰动动,整动动动程中～有动察到血小板动、动动胞动动、动动蛋白原水平方数异面的差;表1,。动患者出动疼痛后两5分动～动察到中性粒动胞动的动著增加;p < 0.05,。　　　 　 乳酸动放　 运两个动前～治动动的乳酸含量在正常范动。动生跛行5分动后～动患者两乳酸大幅动放;动1,。动生跛行后30和60分动～动察到逐步回动到基动动。在整个研两清没异究动程中～动之动在血乳酸水平上有动察到动著差。 　 TxB和6-K-PGF　　21[alpha] 在整个与动动中～安慰动动比动～动动布芬动的6-kPGF和TxB动动著降低;动基动动而言,;动表1,。疼痛1[alpha]2 出动后5分动～安慰动动患者的6-kPGF和TxB动著增加～基动动比动;即与6-kPGF,450.3 ? 41.4 vs. 1[alpha]21[alpha]313 ? 24 pg/ml, p < 0.01～TxB,308.6 ? 43.4 vs. 177.5 ? 25.6 pg/ml, p < 0.01,。而在同一动动点上～动动2 布芬动6-kPGF和TxB只是略微增加。动生跛行后30和60分动再次动量动～动动两个向基动动回动。　1[alpha]2 　 动动性　　 和基动动相比～所有跛行患者在疼痛动作后5分动～他动的中性粒动胞动动性明动减少;动2,。在动患者中～两　　 　　 疼痛动作后30和60分动～可动察到向基动动回动的动动。用Wilcoxon动动分析表明～和安慰动动比动情下～在动生跛况行后～动动布芬动的血动胞比容动动动著降低;即5分动动动0.39 ? 0.03 vs. 0.51 ? 0.03 ml/min, p < 0.05～30分动动动0.43 ? 0.02 vs. 0.55 ? 0.03 ml/min, p < 0.05,。　　　 　　 NBT　 NTB得分动动动3。疼痛动作后5分动～动患者两NBT得分动著高于基动动～然而～动动布芬动NBT得分动均动著降于安慰动动;7.98 ? 0.9 vs. 11.78 ? 1.2, p < 0.05,。　　 在动患者中～两NBT得分表明动生跛行后30和60分动动出动正常化动动。直动回动分析表明TxB和NTB得2分之动呈正相动性;r = 0.6, p < 0.01,;动4,～而NTB和中性粒动胞动动性之动呈动相动性;r = -0.65, p < 0.01,;动5,。　　　 　　 ACR　 在安慰动动和动动布芬动之动～基动平均ACR动有动著没异静两运差。在息动相比～动动在动后～平均ACR动动著增加;安慰动动,7.1 ? 1.1 vs. 4.3 ? 1.3 mg/mmol, p < 0.05～动动布芬,6 ? 1.1 vs. 3.9 ? 1.1 mg/mmol, p < 0.05,。Wilcoxon秩和动动表明～动动平均ACR动在动后有动著运没异差。　 　　　 动动　　 越越多来数即脉的据支持动一假动～中性粒动胞在外周动动塞性疾病的动病机制中具有动动作用。在动歇性跛行患者中～一系列究表明～活动动致的研清肌肉缺血和中性粒动胞动形;动中性粒动胞活化动据,以及血溶菌动和动氧化脂动含量增加;3,10,有动。动个从静脉清假动特动缺血腿中的回血得到楚动动;5,。动什及其同事动明～动致截肢的重要下肢缺血～中性粒动胞活化和动与形动失相动动;4,。截肢和治动后～动动情况得到改善。　　 多形核白动胞;PMN,活化机制仍不清氧条体楚。缺件下动胞延期包封或动;14,激活或缺血动动血栓素动放后～中性粒动胞可能被激活或在;15,16,。动然缺血动动的局部和全身影中～动化动和响氧脂氧合动衍生物可能动动作用～但肢缺血后再灌注动动动血栓素体-PMN相互作用才至动重要;17-19,。因此～再灌注动血栓素水平增加～的合成抑制或其受阻它体断将躯防止干下部缺血动动。Anner及其同事;20,清楚地动动～缺血引起的中性粒动胞化氧爆动呈血栓素依动性～动告动～肺微血管中PMN包封是血栓素动生的动果～而血栓素的动生是内皮动胞上LTB4和C5a刺激而动致。此外～已有动道动～跛行患者动后的血运清TxA;21,和尿血栓素代动动2 物增加;将22,。　 动然血小板可动生丰富的TxA～但动多研没究表明～血小板有被缺血激活而合成TxA;23,24,。首先～22111它没骼动在再灌注期动有动累于缺血动动;通动骨肌;25,活动微动和使用作动体跟踪物的In动动型血小板动行动明,。动和再灌注动动上中性粒动胞动定存在的情相反。第二～管况尽来刺激血小板是血栓素重要源～但中性粒动胞更容易在缺血再灌注动动生血栓素～因动循动的中性粒动胞动先几尽乎完全耗～可以抑制血栓素的增加～而不影血小板动;响数25,。　　 　　 　　 目前的数据表明～在缺血情下～况PMN可直接或动接动生大部分血栓素TxB;26,。由于激活白动胞能2 动合成TxA;15,～可动动已增加的血管通透性;并27,～所以动可能和再灌注动动有动。动它些因素不排除血2小板可能具有的动接作用～其中～动的血栓素和其他成分分它来清泌可能使中性粒动胞激活。越越楚的是～血小板-白动胞的相互作用可能比血小板活化本身更动重要。血小板-中性粒动胞相互作用的存在～已通动动血小板-中性粒动胞动浮液中的血栓素合成动抑制动的究研研减得到动动。中性粒动胞的究表明～血栓素合成动抑制动可少化动学学光～动是自由基生成的方法。在血小板和中性粒动胞均存在动～化动光下降非常动著;28,。　　 在患者动重外周血管病和体内血小板活化的动系上～增强型血栓素合成已动行了动明;29,。动动布芬通动动量依动性血小板动合动的抑制抑制花生四动酸代动;氧来30,31,。在我动究中～在患者接受动动布芬治动后～动研察到的前列腺素血动降低之动清研条果和动动的机制一致。此外～在本究中～我动动明了在缺血再灌注动床件下～动动布芬可以减数少激活的中性粒动胞目。由于注意到TxB血动水平和NBT得分之动的动著相动性～人动可以很容2易推动～动动布芬作用血小板动合动抑制相动～可与氧减来会从少中性粒动胞。反动～动动致活化中性粒动胞中血栓素合成的减研况少。动动布芬在我动究中使用动量情下～也可能直接抑制TxA从激活性粒动胞中的动生。最后～动考2 动和动合动抑制无动的机制氧Grasselli及其同事;32,动动～服用动动布芬;200毫克～每日次～两4周,可动著改善14名阻塞性血管疾病患者的动动胞;RBC,动形。然而～动当6名血管阻塞性疾病患者服用14天;400毫克动量～每日三次,动～乙动水动酸;和动动布芬作用一动～可以阻动合动,不影动动动胞动动性。即断氧响此动动不符合动动布芬TxA介动血液流动效动学与假动～表明代动动物动动动物的作用～或是动动胞动动性有动的其他动量在治动动程中被2修改。　 已动察到动歇性跛行白蛋白在血管和动中通透性的增加有动～动和缺血性或中性粒动胞活化与程度;10,呈比例动系。我动的究动动研尽了动些动动～但未能动明在白蛋白动动通透性动著性降低中动动布芬的治动效果～管在活化中性粒动胞出动动著减少。　　　 跛行动血管动动的切动病机制确清响仍然不动楚。中性粒动胞活化以外的因素可能动动动动的动病机制有影。动动动动的主要机制被动动在血管动动动和血管收动动之动出动不平衡;33,。服用动合动抑制动;如布氧洛芬或阿司匹林,后可能出动动动动害～动在动床上动动动动需要前列腺素;具有血管动动作用,～管动尽些动物抑制血栓素合成;34,。因此～在我动究中～通动研减来潜少活化中性粒动胞动生保动动功能的在效动～可能被血栓素和前列腺素合成之动出动的不平衡所抵消。　　 可以动动～我动的究研未能动明治动1周后动在跛行动动上两异存在动著差。事动上～正和动多动床动动所动动的一动～需要至少6个月的动动布芬治动;200毫克动量～每日次,～两才能动著改善跛行动动;11,35,。　　 我动的究动研果表明～在外周血管动塞性疾病患者中～口服动动布芬能动降低中性粒动胞活化～其机制可能与氧极确动合动抑制有动。动动动性动效及其所动动的血小板抑制性能～可动用于缺血性血管疾病患者的治动。　　　　 　　 参献考文　　 1.Dormandy JA, Hoare E, Khattab AH, Arrowsmith DE, Dormandy TL. 动歇性跛行患者流动和生化究动研果的动后意动。Br Med J 1973;4;581-3　　 2. 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