【word】 中药水煎剂对粪肠球菌感染根管的体外抑菌试验

【word】 中药水煎剂对粪肠球菌感染根管的体外抑菌试验 中药水煎剂对粪肠球菌感染根管的体外抑 菌试验 第9卷第21期?总第125期 2011年11月?上半月刊◎呷薏 3讨论 本实验根据卫生部《保健食品功能学评价程序与检 验方法规范》,缺氧对机体是一种劣性刺激,影响机体的 氧化供能.最终导致机体的心脑等重要器官缺氧.引起 氧供应不足而死亡[3】.小鼠在密闭容器中受缺氧因素损 害,主要反应在心和脑缺氧.用常压耐缺氧实验,亚硝 酸钠中毒存活实验和急性脑缺血性缺氧实验评价该人工 养殖鳄鱼肉提取物缺氧耐作用,结果显示,该人工养殖 鳄鱼肉提取物能显着延长常压缺氧,亚硝酸钠中毒存活 时间,对延长脑缺血性缺氧存活时间更显着. 参考文献 【1】吴素玲.鳄鱼精滋补液营养成分【J】.食品与发酵工业,2000,(2):84. 【2】唐裸,秦明珠.鳄鱼的药用研究和开发前景[J】.中国医药指南,2007,5(11): 346. [3]涂宏海,王彩云.生血胶囊耐缺氧效应的研究[J】.中成药,2005,27(7):803. (本文校对:张文娟收稿日期:2011—09—03) 中药水煎剂对粪肠球菌感染根管的体外抑菌试验※ 王贵花徐运强王荣霞 摘要:目的评价中药水煎剂对粪肠球菌的体外抑菌效果.方法选取7O颗新鲜拔除的人单根管牙,截取6mm高的柱状牙根.将牙根随 机分为阴性对照组,甲醛甲酚组(FC),黄连水煎剂组,大黄水煎剂组,连翘水煎剂组,五味子水煎剂组,阳性对照组,每组10颗牙根.常规 根管预备后灭菌制备感染粪肠球菌根管模型,阴性对照组不感染细菌,放置0.9%氯化钠注射液,阳性对照组感染细菌,放置0.9%氯化纳注射 液,其余每组根管均感染细菌,分别放置上述不同药剂,培养3d,7d后分别测量细菌的透光度.结果大黄3d,黄连7d,Fc7d无差别;五味 子3d,阴性对照7d无差别;黄连3d,阴性对照3d无差别.结论相同浓度的中药水煎剂对粪肠球菌有不同程度的抑菌活性,黄连水煎剂的 作用最强,其次是五味子,大黄,连翘作用最差. 关键词:中药水煎剂;粪肠球菌;体外抑菌 doh10.3969~.issn.1672.2779.2011.21.088文章编号:1672.2779(2011).21.O137—02 TheExperimentofTraditlonaIChineseDecoctionl’sEfflecttolnhibitEntero coccusFaecalis0UtsideBody WangGu~uaXu嘶叼 WangRongxia(Shij~huan8secondHospita~Shifiazhuang,050051,china) Abstraet:0biectiveThepurposetoevaluatetlleeffectiveofthetra~donaIChinesedecoction’Sfunctiontoinhibitenterococcusfaecalisoutside bodMethodchoose70骶 shmonoraldicularextractedofffrompatients,Interceptafangof6mmheight.Dividerandomlythefanginto7groups which81”Ofermilinecontrolgroup,formaldehydecresolformocresolgroup(FC),coptisrootdecoctiongroup,forsythiadecoctiongroup,coptisroot decoctiondecoetiongroup,masculinecontrolgroup,everygrouphas10fangs.Afterpreparingthecommonrootcanalandconductgermicidaltreatmentto it,andmakeinfectedenterococcusfaecalisrootcalla1models.Put0.9%SOdiamchiorideinjectionintofermilinenon.infectiousbacteriacontro1group,put 0.9%sodiumchiorideinjectionintomasculineirifectiousbacteriacontrolgroup.Everyothergroupoftoo1Callalsareinfectedbacterials.Putdifferent medcineaboved,cultivate3d,7d,thenmeasurethebacterials’transmittancy.Resulttherhubarbhasnodifferencesafter3day,coptisrootafter7day,Fc after7days,shizandraberryafter3days,fermilinecontrolafter7days;coptisrootandfermilinecontrolbothhavenodifferencesafter3days.Conelution ThetraditionalChinesedecoctionofthesameviscosityhasdifferentbacteriostaticactivitytoenterococcusfaecalis.Theeffectofthecoptisrootdecoction isthefirst,thecoptisrootdecoctioniSthesecond.tllerhubarbandforsythiaaret heworst. Keywords:TraditionalChinesedeeoction;Enterococcusfaecalis;Inhibiting thebacterialoutsidebOdv 近年的研究显示粪肠球菌是导致根管治疗失败的重 要原因,由于粪肠球菌耐药机制复杂,所以由粪肠球菌 引起的感染治疗难度加大.我们模拟粪肠球菌在口腔内 的生存环境建立根管感染模型,检测黄连,大黄,五味 子,连翘四种中药水煎剂对粪肠球菌的抑菌活性,希望 能找到合适的中药用以替代抗生素治疗根管内粪肠球菌 的感染. t资料与方法 1.1中药水煎剂的制备黄连,大黄,五味子,连翘四 种中药(购自河北省药材公司)各50g,分别加水温火 煎至200ml成为浓度为50%的药液,过滤备用. 1.2菌株及菌悬液的制备收集石家庄市二院细菌室分 离到的粪肠球菌临床菌株共5株,分别来自痰,尿,便, ※基金项目:河北省卫生厅项目[No:20110184] 作者单位:河北省石家庄市第二医院检验科(石家庄050051) 分泌物等标本,经上海复星佰珞微生物鉴定及药敏分析 仪(FB450R1)鉴定为粪肠球菌.经过鉴定的粪肠球菌 使用牛心脑浸液(BHI肉汤)混合增菌后备用(BHI肉 汤购自北京路桥).菌种使用前先复苏,再用BHI肉汤 配成0.5麦氏浊度的菌液备用(透光度为80%T). 因BHI肉汤本身是淡黄色,调整菌液浊度时应将本身的 颜色除去. 1.3样本预备收集新鲜单根管牙70颗,经口腔科处理 成6mm的柱状牙根后,将牙根置于含有25mlBHI肉汤 的试管中,1.1kg/cm,121?高温,高压灭菌15min. 1.4建立根管感染模型用注射器把配制好的标准菌 液分别注入70颗牙的根管中,再把牙根放到盛有标准菌 液的试管中,置于5%CO2培养箱37~C培养24h后.取 出牙根,用0.9%氯化钠冲洗根管,无菌滤纸干燥根管, 再用蜡把牙根固定于培养皿底部.为了创造厌氧环境, 根管口一定要完全封闭.整个过程严格无菌操作. ◎饱CHINES哼MEDIC屦INEM为ODERNDISTANCED远UCAT 程镦IONOFC第9卷第21期?总第125期20I1年11月? 上半月刊 1.5杀菌效果观察将70颗牙根分成7组,每组10颗. ?阴性对照组,只加0.9%氯化钠;?甲醛甲酚(FC)组; ?黄连水煎剂组;?五味子水煎剂组;?大黄水煎剂组; ?连翘水煎剂组;?阳性对照组,加菌液和0.9%氯化钠. 用注射器把各种消毒液分别注入?,?组牙的根管内, 将放置牙根的各组培养皿置于5%CO培养箱(37?) 内培养.在3d和7d时分别取出5颗牙根,无菌操作, 使用25#H型锉(日本MANI)去除根管内消毒剂,以 0.9%氯化钠注射液冲洗,无菌滤纸干燥后,用慢速G钻 均匀磨取根管内层牙本质粉末,电子天平称取4mg粉末, 置于含有20mlBHI肉汤的无菌试管内,在相同的培养条 件下培养72h后取出,用数字显示比浊仪(100%T)(上 海复星佰珞)测量肉汤的透光度并分别记录两次的数据. 之后分别接种上清液于血琼脂平板上,5%CO2培养箱 (37?)内培养24h后看结果.血培养结果显示阴性对 照管无细菌生长,证实根管灭菌完全;阳性对照管只有 粪肠球菌生长,说明试验无污染. 1.6统计学方法所有比浊所得透光度数据均采用 SPSS18.0统计软件进行分析,计量资料用(趸?)进行 统计学描述,多组计量资料的组间比较采用秩和检验, 差别有统计学意义者,进一步做两两比较,P<0.05为差 别有统计学意义. 2结果 中药水煎剂在相同浓度和环境条件下,大黄3d,黄 连7d,FC7d组间无差别;阴性对照7d,五味子3d组 间无差别;黄连3d,FC3d组间无差别,其余各组间差 别有统计学意义.四种中药中效果最好的是黄连,它和 FC的透光度最接近,其次是五味子和大黄,连翘的效果 最差.结果也显示,所有组间3d的透光度都大于7d的 透光度.中药对粪肠球菌的抑菌活性比较见1. 表1四种中药对粪肠球菌的抑菌活性Et较 3讨论 在中药治疗根管中耐药菌的研究中使用较多的方法 是体外抑菌试验,包括扩散法,稀释法,比色法等[1]- 有用大鼠实验的[,主要用来测定药物对细菌所产生的 内毒素的作用,但大鼠的牙根比人的复杂,根管预备不 易成功,且周期较长;还有模拟口腔中细菌生物膜[3], 把受试菌制成菌膜,与中药制剂作用后,通过显色反应 检测抑菌作用.我们使用离体牙根管制备根管感染模型 [】测定中药的抑菌效果,将粪肠球菌植入人离体牙根管 内,然后把相同浓度的药剂注入根管内,以求最大限度 的接近口腔环境和药物使用途径.通过取3d和7d的培 养液进行比浊,测定培养液的透光度来确定中药的杀菌 效果. 我们首先采用李仲兴等的琼脂稀释法[】测定了黄 连,五昧子,连翘,大黄,乌梅,黄芩六种中药各自对 粪肠球菌的MIC及MBC.为了进一步测定中药在根管 内的抗菌活性,在预实验的基础上,我们选取其中效价 较高的黄连,五味子,连翘,大黄四种中药用于粪肠球 菌感染根管模型的抑菌试验.在用粪肠球菌感染牙根时, 由于先使用注射器把菌注入根管,再把牙泡到菌液中, 能使牙根充分感染细菌,在菌量控制上较为一致;试验 使用肠球菌专用的BHI肉汤,给其生长提供最适宜的营 养;选用的菌株都来自病人分泌物,具有多样性,复杂 性的特,使中药对粪肠球菌的抑菌活性更具代表性, 进一步反映出药物临床效果;使用比浊法,根据BHI肉 汤的透光度确定中药水煎剂的抗菌活性,使几种药的杀 菌效果易于比较.其模拟口腔环境比较准确,能直观反 映实际情况.由于有牙本质粉末沉于管底,所以比浊时 一 定要防止沉淀晃起影响透光度.实验结果显示所有组 3d的透光度都大于7d的透光度.也就是说,在7d的时 候,肉汤发生了浑浊或颜色改变.我们通过对上层液的 转种,证实BHI肉汤无杂菌污染.比较黄连和FC,结 果无论3d还是7d两者透光度近似.因为已知FC的药 效在7d时要比3d好,说明透光度的降低和药效无关. 由于中药成分复杂,有的成分不溶或难溶于水,有的对 光和热不稳定[.,药液长时间处于37”C的环境中,本身 的化学成分发生了改变,导致肉汤颜色和浑浊度发生了 一 些变化;而且肉汤本身在37~C环境下经过7d以后, 颜色和浑浊度也发生了变化.比浊后取上层液转种至血 平板,无杂菌污染,试验结果可信.张海鸥等报道【8】, 五倍子提取物在一天时即能杀灭牙本质深层的粪肠球 菌.本实验没有对1天的肉汤浊度测量和记录,所以无 法确定被检的四种中药在1d时是否有效. 本试验结果和琼脂稀释法结果一致,证明黄连,五 味子,大黄,连翘对粪肠球菌有不同程度的抑菌活性, 能够为临床应用中药制剂进行根管治疗提供实验依据. 参考文献 [11马建风,刘华钢,朱丹冲药体外抑菌研究的方法学进展[J].药物评价研究, 2010,33(1):42-45. [2]刘红英,李文颜,郝太国,等.桂皮醛等对大鼠根尖周炎根管中内毒素水平 影响的定量研究[J].华西口腔医学杂志.2007,25(3):233—236. [3】黄莉莉,夏文薇,马瑞,等.复方中药制剂对粪肠球菌抗菌作用的体外研究[J】. 牙体牙髓牙周病学杂志.2010,20(7):378?381. [4】张海鸥,张安生,祝磊,等.五倍子提取物对感染牙本质小管内粪肠球菌杀 灭效果的体外研究[J]_牙体牙髓牙周病学杂志.2009,19(3):144?147. [5】李仲兴,王秀华,孟晓洁,等.五倍子提取物对224株肠球菌的体外抗菌活 性观察[J]l中国中医药信息杂志.2004,11(12):1064—1066. [6】王育红,李风学,张志清,等.24种中药水煎剂与免煎颗粒剂对临床菌株的 体外抑菌作用[江苏中医药.2006,27(4):52—54. [7】马建风,刘华钢,朱丹.中药体外抑菌研究的方法学进展[J].药物评价研究, 2010,33(1):42-45. [8】张海鸥,张安生,祝磊,等.五倍子提取物对感染牙本质小管内粪肠球菌杀 灭效果的体外研究[J】.牙体牙髓牙周病学杂志.2009,19(3):144—147. (本文校对:张文娟收稿日期:2011-09.02)