【doc】鸡结膜结合淋巴组织(CALT)对新城疫疫苗点眼免疫应答
鸡结膜结合淋巴组织(CALT)对新城疫疫
苗点眼免疫应答
畜牧兽医,1997,28(3),竺:竺
ActaVeterinariaetZootechicaSiica 鸡结膜结合淋巴组织(CALT)
对新城疫疫苗点眼免疫应答
—监堕王彩虹一sr;lr-;
(中国农业大学动物医学院,北京100094),
A
摘要180只1日龄公雏平均分成A,B,C三组A组于L日龄手术切除下眼睑结膜AB
两组于10日龄和20日龄用鸡新城疫1系(ND1)弱毒疫苗点眼首免和二免,C组为对照组.定期
收集泪液,血清,CALT和哈德氏腺,比较观察其抗体HI效价消长规律与免疫组织细胞变化特点
结果,C组非免鸡泪渡HI效价比血清HI效价稍低,10至34日龄均呈直线下降,3l至48日龄维持
在极低的水平上(1.2~2Log.).B组点眼免疫璃,血清母源抗体Hl效价下降速率减缓,并产生高
滴度抗体HI效价.但泪液抗体HI效价比血清抗体m效价高1~SLog,并维持在8,12Log.尤
其在血清抗体HI教价达到峰值之前,差异极显着(P<o.01)出现上升和达到峰值的时问分别比
血清早6d和14d.A组CALT缺失鸡点眼免疫后,泪渡母源抗体HI效价迅速下降,产生的泪液HI
效价比正常免疫璃低l~2Log,其哈氏腺的免疫细胞也比B组少.实验结果说明点眼免疫可产生
良好的局部和垒身免疫反应,CALT是眼区重要的免疫应答组织之一,协同哈簿氏腺完成独特的
堑熊壅,巷生
动物体内存在粘膜免疫系统],粘膜结合淋巴组织(Mucosal—associatedLymphoidTis—
sue,MALT)是粘膜免疫应答的组织基础'B_.近年来人们对结膜结合淋巴组织(Conjunctiva—
associatedLymphoidTissue,CALT)进行了研究.Axehod,A.T.等(1979)和Franklin,R.M.
等(1984)对兔和猪的眼结膜研究表明,具有与肠和支气管结合淋巴组织(Gut—andBronchus—
asssociatedLymphoidTissue,GALT&BALT)形态结构相似的CALT[.].Fix,A.S.,
谢世
华,祁保民等.,于1989年以来,应用组织学,组织化学和电镜技术研究证明,禽类也存在
CALT,属于粘膜免疫系统一部分,是抗原撮取部位本试验是在上述研究基础上,比较观察雏
鸡CALT对泪液和血清中抗体消长规律与哈德氏腺中免疫细胞消长规律的影响,探讨CALT
对点眼免疫应答的功能.
1材料与方法
1?1材料1日龄海花品种公雏180只新城疫?系弱毒疫苗(民星江西生物制品厂,批号2,
1994年生产)新城疫
抗原(中国兽医药品监察所,效价:640)846麻醉剂(兽医大学军兽
t国家自然科学基金资助项目
?*硬士研究生.
…日19951130.
(j》
畜牧兽医28卷
医所,批号:940413).离心机(LD一2A北京医用离心机厂制造).微量振荡器(WZ一2A北京海淀
电子医疗仪器厂).八道移液器(5,50u1.瑞士制造).生物显微镜(OlympusBH一2). 1.2方法180只公雏平均分成A,B,C三组,A组于1日龄手术切除CALT口,B组正常免
疫鸡,c组非免疫鸡.A,B两组用新城疫I系弱毒疫苗于10日龄首免,20日龄二免分别于
10,14,2O,27,34,41,48日龄收集三组鸡泪液和血清,每组每次取3O只雏鸡样品,按微量法的
程序做红细胞凝集抑制试验(HI试验).同时每次每组取5只雏鸡的CALT和哈德氏腺,用
l0中性福尔马林固定,做常规的H.E染色和酸性非特异性酯酶(ANAE)染色.观察免疫组
织细胞A,B,c三组的泪液,血清和每组的泪液与血清之间均用多元统计
检验相互之间
差异的显着性.组内不同日龄血清或泪液之间的差异性用t检验检测. 2实验结果
2.1泪液和血清抗体的HI效价检测统计结果如下表
衰泪液和血清抗体m效价衰(衰中敷位为Log,的对敷)
TableThevaluesofteatsandserItltlters(1ogarithmofLog)
注:T代表泪蔽,S代表血清,T和S后面的数字表示日龄.
Note:Tstandsfortears,Sstands[orsera,numbersafterthealphabetesstand[ordaysafter.hatc
hing
2.2各组雏鸡泪液和血清抗体HI效价消长趋势
2.2.1A组抗体消长趋势如图1:10日龄的泪液和血清母源抗体HI效价接近,均在8个谪度
左右,差异不显着(P>O,05).
10日龄初免后的泪液和血清抗体HI效价均下降,分别于14日龄和20日龄降至最
低值,
继而开始回升,泪液抗体HI效价在20日时升到峰值(10.2Log:),20日龄二免后开始缓慢下
降血清抗体HI效价于34日龄升到峰值(8.0Log:).血清抗体回升和峰值出现时间比泪液分
别晚6d和14d20~34日龄期间,泪液抗体HI效价滴度比血清高1.5~4Log,其差异极显着
(P<O01).
34日龄后,泪液抗体HI效价比血清抗体HI效价高,但趋向接近,48日龄时,两者差异缩
小,由P<0.Ol变为0.01<P<0.05. 2.2.2B组抗体消长趋势如图2:10日龄时泪液和血清母源抗体HI效价接近,均在8个滴度
左右,无显着差异(P>o.05).10日龄初免后的泪液和血清抗体HI效价滴度均下降.分别于
14日龄和20日龄降至最低值,继而开始回升,泪液抗体在20日龄时升到峰值(12Log:),20日
龄二免后开始缓慢下降.血清抗体HI效价于34日龄升到峰值(8.8Log:).血清抗体回升和出
3期孙斌等:鸡结膜结合淋巴组磬{(CALT)对新城疫疫苗点眼免疫应答 现峰值的时间比泪液分别晚6d和14d.血清抗体峰值之前的2o至34日龄期间,泪液抗体HI
效价比血清抗体HI效价滴度高1~5Log.,差异极显着(P<0.01). 3413龄后,泪液抗体HI效价仍比血清抗体HI效价滴度高0.7,1.4Log,但趋向接近.
48日龄时,两者差异缩小,由P<0.01变为0.01<P<0.05. 2.2.3c组抗体消长趋势如图3:10日龄时泪液和血清母源抗体Hl效价滴度均在7.0Log.
以上.34日龄以前两者的效价滴度均呈下降趋势,最低值分别为1.2和2.0Log,并在极低水
平上维持到48日龄.整个实验过程中,泪液母源抗体HI效价始终稍低于血清母源抗体效价.
2.3各组雏鸡泪液和血清抗体HI效价消长趋势的比较
2.3.1A,B,c三组泪液抗体HI效价比较如图4:10日龄时,A,B,c三组泪液母源抗体HI
效价差异不显着(P>o.05),3.013龄后,三组同时下降,但是到3.4日龄时,A,B两组降到最低
值,而c组继续下降,直至34日龄才降到最低值.在下降速度上,A组比B,c两组快,差异显
着(P<0.01),B组比c组稍慢,差异不显着(P>0.05). 14日龄后,A,B两组泪液抗体HI效价开始上升,20日龄均达峰值,并维持到2713龄,但
B组比A组的HI效价滴度约高2Log,差异显着(P<o.O1).随后两组的抗体效价略微下降,
并趋向接近,直至48日龄,均维持在10Log以上.c组34日龄后,泪液抗体维持在极低的水
平上.从20到48日龄,A,B两组泪液抗体HI效价都比c组高6Log以上,差异显着(P<
0.01).
2.3?2A,B,c三组血清抗体HI效价比较如图5:10日龄时,三组血清母源抗体HI效价差异
不显着(P>o.05),1013龄后三组同时下降,但是,20日龄时,A,B两组降到最低值,而c组继
续下降,直至3413龄才降到最低值.在下降速度上,A组比c组稍快,差异不显着(P>o.05),
B组比A,c两组缓慢,差异显着(P<O.01).
2o13龄后,A,B两组血清抗体HI效价开始上升,34日龄达到峰值,直至48日龄抗
体滴
度均维持在8Logz.B组效价稍高于A组,但差异不显着(P>o.05).C组3413龄后,血清抗体
维持在极低水平上.A,B两组比c组抗体滴度高5Log以上,差异显着(P<O.01).
2.4眼区免疫组织形志观察
2.4.1CALT:A组雏鸡1日龄切除下眼睑结膜后,1o至4813龄,均显示粘膜再生修复,但未
见CALT存在.
B组雏鸡10日龄时在下眼睑结膜穹窿近侧端纵行皱褶内有淋巴组织和高内皮静脉.27
至48日龄间,CALT发育良好,可见淋巴滤泡,结合部粘膜上皮为扁平上皮细胞,无杯状细胞.
c组雏鸡10日龄时CALT如同B组,但直至4813龄尚未见良好发育 CALT非特异性酸性脂酶(ANAE)染色观察T淋巴细胞B组于3.4日龄时可见散在分布
的少量阳性细胞,2o至48日龄见大量的阳性细胞.c组从10至48日龄,均未见有ANAE阳
性细胞
2?4-2哈德氏腺;lo日龄时,各组雏鸡的哈德氏腺中央管上皮下仅见个别的淋巴样细胞.14
日龄时,A,B两组可见多量浆细胞出现,但B组明显地比A组多,还分布到腺泡之间和小叶间
质中,34至48日龄间,B组的这种优势更为显着.c组在3.4日龄以后,哈德氏腺中央管上皮下
也见有少数浆细胞.
畜牧兽医28卷
图1Fig.1
图3.3
图5Fig.5
图2Fig.2
图4Fig.4
注:图中m技价值为Log2的对数.Thevalue~are 1ogarithmofLog
AT:A组泪藏(AT:TearsofgroupA);BT:B组
泪漩(BT:TearsofgroupB)ICTcC组泪藏(CT:
TearsofgroupC)iASlA组血清(AS:Seraof
groupA)fBS:B组血清(BSSeraofgroupB)f
CScC组血清(CS:Seraofgroupc)
3期孙斌等:鸡结膜结台淋巴组织(CALT)对新城疫疫苗点眼免疫应答249 3小结与讨论
3.1用新城疫1系弱毒疫苗点眼免疫雏鸡.泪液抗体比血清抗体出现早,效价高,维持时间较
长.这与以往报道类同,说明泪液抗体主要来自眼区局部免疫组织器官,在局部粘膜免疫保
护中.具有重要作用,特别在血清抗体峰值之前有更大意义.
3.2点眼免疫可促使cALT发育.出现淋巴滤泡和ANAE阳性细胞,其数量随日龄增长而
增多,并减缓血清母源抗体衰退速度,提高泪液免疫抗体HI效价滴度.说明CALT具有免疫
应答功能,参与局部免疫和全身免疫的调控.
3.31日龄雏鸡手术切除下眼睑,可以获得CALT缺失雏鸡.点眼免疫后,CALT缺失的雏
鸡哈德氏腺中免疫细胞比正常雏鸡明显减少,泪液母源抗体衰退速度加快.泪液免疫抗体HI
效价降低.这种现象可能是由于CALT缺失造成局部被活化的B淋巴细胞克隆减少的结
果【9.并说明了CALT与哈德氏腺之间具有免疫功能的协同作用,是眼区重要的免
疫应答组
织之一,它是抗原接触和摄取的部位.还可能是免疫诱导部位,此项工作尚需进一
步研究
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畜牧兽医28卷
IMMUNERESPoNSE0FTHECONJUNCTlVA-ASS0ClATED
LYMPHoIDT硌SUEToEYE-DROPAPPLICATIoNoF
THENEWCASTLEDIsEASEVACCINEINCHICKENS
SunBin,GaoQiyu,WangCaihong
(AnimalMedicineCollege,ChinaAgricultureUniversity,Beljing100094) Abstraet
Onehundredandeightyone—dayoldmalechickensweredividedintothreeequalnumber
groupsA,BandCatrandom.ChickensingroupAwereremovedlowereyelidsconjunctiva surgicallyatoneday.ChickensingroupsAandBweregivenNewcastleDiseasevaccine (NDB1)byocularrouteattendaysforthefirsttime,andattwentydaysforthesecondtime, groupCwasusedascontro1.Tearsandseraofallchickenswerecollectedatschaduledtimes formicrohemagglutinationinhibition(H1)test.conjunativa—associatedlymphoidtissue
(CALT)andharderianglandswerecollectedatthesametimeforhist0path0Iogicalandhisto—
ehemieaIexaminations.TheirHItitersandimmunecellswereobservedandcompared.Incon—
trolledchickensHItitersoftearswasalittlelowerthanthoseofsera,bothofthemslumped duringtendaysto34daysandmaintainedaverylowlevel(1.2-2log2)during34daysto48 days.Inchickensvaccinatedbyocularrouteattendays,thedroprateofseraHItitersre—
duced,andhighlevelHItiterscouldbetested.ButtearsHItiterswere1,2logzhigherthan
thoseofsera,keptupbetween121og2and8—8log2,especiallybeforetheHItitersofsera
reachedthepeak,differencewasremarkable.thetimeoftearsHItitersbeginningtoriseand gettingtothepeakwere6daysand14daysearlierthanthoseofserarespectively.After chickenswithoutCALTwerevaccinatedbyocularroute,tearsHItiterswere1~21og2lower thanthoseofvaccinatednormalchickens,thenumberofimmunecellsinharderianglandsre—
ducedalso—
Experimentresultsindicatethatvaccinationbyocularroutecanproduceefficient localimmunereponselandthatCALTisoneofthemostimportantimmuneresposetissuesin ocularregion,cooperatingwithharderiangland,conductslocalimmunefunctionandtakes partinthecontrolofbodylevelimmuneresponse.
KeywordsConjunctiva—associatedIymphoidtissue,Immuneresponse,Newcastledis—
ease.C:hickens