【word】 两种广藿香精油的抗菌作用研究

【word】 两种广藿香精油的抗菌作用研究 两种广藿香精油的抗菌作用研究 2011年9月第13卷第9期中国现代中药ModemChineseMedicine 髓 两种广藿香精油的抗菌作用研究? ,陈瑜珍,严振 莫小路,蔡岳文,袁亮 (广东省中药研究所,广东广州510520) [摘要]目的:为广藿香的质量评价提供药理学实验基础.:以金黄色葡萄球菌等7种细菌和产黄青霉 等3种真菌为供试微生物,用琼脂平板打孔法测定石牌广藿香和海南广藿香精油的抑菌圈大小,用固体二倍稀释法 测定精油的最小抑菌浓度(MIC).结果:石牌广藿香精油对7种供试细菌的抑制效果与海南广藿香相近,而对3种 供试真菌的抑菌作用显着高于海南广藿香精油.结论:石牌广藿香是栽培广藿香中的优质品种,其抗真菌作用显着 强于海南广藿香. [关键词]广藿香;精油;抗菌作用 广藿香Pogostemoncablin(Blanco)Benth.为唇 形科刺蕊草属植物,原产于菲律宾,马来西亚,印 度等国.我国在宋代已有引种栽培,而广东地区栽 培供药用的历史悠久,故名”广藿香”.广藿香是广 东省主要道地药材之一,是”藿香正气丸(水)”, “藿胆丸”及”抗病毒口服液”等中成药的重要配方 药,主要功效为芳香化浊,开胃止呕,发表解暑…, 此外还对多种人体致病菌和皮肤真菌有抑制作用J. 广藿香主产于广东省的石牌,高要,湛江地区 及海南省的万宁地区,因产地的自然环境条件,种 植习惯,栽培管理,采收加工等的不同,其产品形 态,气味,质量差异较大,因而存在有关广藿香 品种分类方面的争议,有研究根据广藿香蛋白电泳 及形态学方面的差异,认为广藿香应分为3个 栽培品种,也有报道将广藿香按其挥发油的组分 划分为”石牌”和”海南”两个化学型. 药材生产传统上认为产于广州石牌地区的广藿 香(俗称”牌香”)品质最好,产于海南万宁地区 的广藿香(俗称”南香”)药效最差,而原产于广 州石牌的广藿香由于城市发展等原因目前已濒临灭 绝,目前医药生产上使用的原料均为海南和湛江地 区产的”南香”精油,有关石牌广藿香的药理学研 究少有报道.广藿香的药理作用主要是调节胃肠功 能和抗病原微生物两方面,本文利用广东省中药研 究所药用植物标本园内保存的”牌香”资源,进行 体外抗菌研究,并与”南香”比较,旨在为广藿香 化学成分与药理作用的相关性及其作用机制的研究 奠定基础,为广藿香不同品种间的质量评价提供实 验依据. 1材料和仪器 1.1材料 1.1.1供试药材实验用广藿香材料均采自本所药用 植物标本园,经本所南药研究室蔡岳文教授鉴定均为 广藿香Pogostemoncablin(Blanco)Benth.,是分属于 原产石牌和海南的两个栽培品种Pogostemoncablin (Blanco)Benthcv.shipaiensis,Pogostemoncablin (Blanco)BenthCV.hainanensis..上述实验材料的全 草经自然干燥48h后,切成1,2cm的小段,备用. 1.1.2供试菌种供试细菌菌种大肠杆菌(Escherich. iacoli),枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis),普通变形 杆菌(Proteusvulgaris),金黄色葡萄球菌(Staphylo— COCCUSaurelt8),表皮葡萄球菌(Staphylococcusepider- midis),粪肠球菌(Enterococcusfaecalis),绿脓杆菌 (Pseudomonasaeruginosa)及供试真菌白色念珠菌 (Candidaalbicans)购自广东省微生物菌种保藏中心. 供试真菌产黄青霉(Pencicilliumchrysogenum)和黑曲 霉(?znr)为本保藏菌种. 1.1.3主要试剂营养肉汤,营养琼脂和沙堡氏培 养基(广东环凯微生物科技有限公司). 1.2主要仪器 旋转蒸发仪(RE一52A型,上海亚荣生化仪器 厂),超净工作台(美国Thermo公司),霉菌培养 箱(MJP-250型,广东环凯微生物科技有限公司), [基金项目]广东省科技厅粤港关键领域重点突破项目(2009A030901011),广州市科技基础研究项目(2tX~9J1.C201) [通讯作者]严振,Tel:(020)22854883,E—mail:yanz@gdyzy.edu.an ? 34? 2011年9月第13卷第9期中国现代中药ModemChineseMedicine 高压灭菌器(MLS一3750型,SANYO公司),微量移 液器(Finnpipette)及漩涡混合器(XW-80A型,上 海琪特分析仪器公司)等. 2方法 2.1精油提取及测定方法 按《中国药典》(2010版)附录XD操作,精油 得率:石牌广藿香为1.4%,海南广藿香为3.2%. 2.2供试菌液的制备 2.2.1供试细菌菌液的制备挑取在新鲜斜面培养 基上培养24h的供试菌种,接种至营养肉汤培养基 中,摇匀后于37?培养20h,菌液浓度约为 10CFU?mL(用平板稀释菌落计数法测定),将 此菌液用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至1.5x10 CFU?mL,,备用. 2.2.2供试真菌菌液的制备供试真菌在沙堡氏琼 脂(Sabouraud’sagar)斜面培养基上28cc培养5d 左右,待孢予长出后,用2mL0.9%无菌氯化钠溶 液将孢子洗下,将此真菌孢子液稀释到1.5×10 CFU?mL,,备用. 2.3体外抑菌试验方法及最小抑菌浓度(MIC)的 测定 参照中国生物药品检验法操作J,采用平板打 孔法进行抑菌实验.孔的直径为5mm,每孑L加浓度 为l0L?mL(用含1%聚山梨酯一80的0.9%无 菌氯化钠溶液稀释)的广藿香精油20L,阴性对 照加含1%聚山梨酯一80的0.9%无菌氯化钠溶液 20?L,37?培养24h后观察,测定抑菌圈大小, 根据抑菌圈的大小判断抑菌活性,抑菌圈大小与抑 菌活性,敏感程度的关系见表1.每个浓度处理6次 重复,测定结果取平均值.广藿香精油的最小抑菌 浓度(MIC)用固体二倍稀释法测定,取50L? mL的广藿香精油做倍比稀释,测定MIC. 表1抑菌圈大小与抑菌活性,敏感程度的关系 3结果与分析 3.1石牌广藿香和海南广藿香精油对细菌的抑制 作用 本试验以10ILL?mL的石牌广藿香和海南广藿 香精油对7株供试细菌菌株进行抑菌试验.由表2 抑菌圈测定结果可见,在该浓度下两种精油对革兰 氏阴性细菌均无抑制作用,石牌广藿香对7种供试 菌的抑制作用与海南广藿香无显着差异,仅是对表 皮葡萄球菌的抑菌效果强于海南广藿香. 从表2精油最低抑菌浓度(M1C)的测定结果 看,石牌广藿香对同种细菌的抑制作用稍强于海南 广藿香. 表2不同广藿香精油对供试细菌的抑制作用 3.2石牌广藿香和海南广藿香精油对真菌的抑制 作用 由表3不同广藿香精油对供试真菌的抑制结果 可见,石牌广藿香对皮肤致病菌(白色念珠菌)和 条件致病真菌(产黄青霉和黑曲霉)的抑制作用都 显着强于海南广藿香,海南广藿香精油对白色念珠 菌几乎没有抑制;MIC的测定结果显示石牌广藿香 精油对白色念珠菌具有较强抗菌作用. ? 35? 2011年9月第13卷第9期中国现代中药ModernChineseMedicineSep.2011Vo1.13No.9 4讨论 精油是广藿香的主要药用成分,广藿香精油的 药理作用之一就是抗菌作用,而精油组分在广藿香 的不同品种问存在较大差异,导致了广藿香不同栽 培品种间的药效差异.在有关广藿香精油成分与抗 菌效果的研究中,杨得坡等认为广藿香醇,异愈 创木烯和广藿香烯是广藿香油抗真菌作用的关键所 在,而张广文等认为广藿香精油抗菌主要成分之 一 是广藿香酮,而.愈创木烯的抗菌活性较差.从 本研究的结果看,石牌广藿香的抗菌效果与海南广 藿香没有显着差异,但在抗真菌方面的药效显着优 于海南广藿香,这可能与石牌广藿香的广藿香酮含 量较高有关.,即广藿香酮是其抗真菌的有效成 分,与文献的观点相同,也与传统药材市场上认 为石牌的药效较高的观点相一致. 本研究结果表明,石牌广藿香是广藿香中的优 良种质,但目前该种质资源已濒临灭绝,规模化种 植已不存在,仅在广东省中药研究所内有活体保存. 导致石牌广藿香濒临灭绝的一个重要原因是其农艺 性状不优:植株分枝较少,生长较慢,即鲜药产量 不高,并且药材的含油量低于广藿香等栽培品种, 药农的种植积极性不高.鉴于石牌广藿香特殊的地 位,对其加以保护并借助现代生物技术加以改良, 提高生物产量和含油量,将是今后广藿香研究的一 个重要方向. 参考文献 [1]广东中药志编委会.广东中药志[M].第一卷.广州:广 东科技出版社,1994:13-16. 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(收稿日期2011-06-02) AntimicrobialandAntifungalEffectsofEssentialOilfromShipaiCultivarofPogostemoncablin M0Xiao—lu,CAIYue—wen,YUANLiang,CHENYu—zhen,YANzhen (GuangdongResearchInstituteofTCM,Guangzhou510520,China) [Abstract]Objective:ToprovideresearchdatainbasicpharmacologytothequalityevaluationofShipaiculti— varofP.cablin,theessentialoilfromShipaicuhivarofP.cablinwereinvestigatedofantibacterialandantifungaleffect invitro.Methods:Essentialoildiffusionthroughtheholesinnutrientagarplate;theminimalinhabitationconcentra— tion(MIC)weredeterminedbyagardilutionmethod,incomparisontotheesse ntialoi1fromHainancultivarofP.cab— Zi 凡.Results:TheantibacterialactivityofessentialoilfromShipaicuhivarissimilarwithHainancuhivar,buttheanti— fungaleffectofShipaicuhivarismarkedlystrongerthanHainancuhivar.Conclusion:Asacablincuhivarwithhigh quality,ShipaihashigherantifungalactivitythanHainancuhivar. [Keywords]Pogostemoncablin;Essentialoil;Antimicrobialeffect ? 36?