狂犬疫苗介绍

狂犬疫苗介绍 一) 技术来源 1984年11月，世界卫生组织（WHO）和洛克菲勒基金会（RF）开始一项合作项目——以 Vero细胞为基质工业化生产狂犬病疫苗。历时15年的努力，科学有效地解决了生产、纯化 中的诸多问题。1999年，该技术生产的高品质人用狂犬病纯化疫苗首先被批准在哥伦比亚 使用，经过5年的实践，证明具有卓越的安全性和免疫效果。该技术的核心在于实现了细胞 的悬浮培养。 (二) 主要技术 1、 高密度微载体技术 1) 微载体的诞生实现了细胞从贴壁生长到悬浮培养的革命。 成大速达?的微载体技术指标： 1个微载体= 180μm 1克微载体（干重）= 4,400cm2 500克微载体= 1,000转瓶（3升转瓶） 7.5升反应器= 150 克微载体 = 350 转瓶 30升反应器 = 750 克微载体 = 1,750 转瓶 6 细胞密度: 10 x 10个细胞/ml 细胞生长 30 L 生物反应器 = 7 天 病毒生长天数 = 20 天 从上图我们可以看到细胞在微载体表面生长的非常好，细胞密度达107/ml。刚才已经谈过，巴斯德PV2061狂犬病固定毒毒株是WHO公认的免疫原性高的Vero细胞适应株，因此， ?接种病毒后，连续收获病毒的滴度很高，这样从技术上就保证了成大速达0.5ml的小剂量 里面，能够含有较高的抗原蛋白和较少的杂蛋白。 2) 生物反应器为大规模细胞培养提供了设备支持。 全自动、封闭式、管道化的生物反应器 3) 比照传统生产工艺，微载体高密度细胞培养的优势： * 高细胞密度 * 高病毒收获 * 低污染的机会 7/ml，远超过其他工艺（转瓶、细胞工* 生产工艺可控性强 厂、其他类型反应器）。 * 微载体投放量高达25g/L，细胞密度高达1.1-1.5x102、 四柱层析纯化系统 从前面的工艺中，我们已经知道，收获的病毒液必须经过无菌连接的管道化的澄清过滤 和超滤浓缩后，灭活，然后，进行层析纯化。下面的图中显示先进的纯化设备和训练有素的 工作人员在操纵全自动的装备，经过这道关键的工艺后，有效地去除99.95%的杂蛋白和Vero ?细胞DNA，保证了成大速达具有卓越的安全性。 下面的3个图是连续3批层析纯化后收获峰：左侧峰为病毒峰，可以看出与杂蛋白峰距离很 远，3批峰形稳定，收获的抗原含量高，杂蛋白低，3批的批间差异非常小，从而保障不同批次成大速达?的都具有卓越的安全性。 优势：有效地去除残余牛血清蛋白、细胞碎片、残余细胞DNA等杂质，使产品达到高质量 的 3、 来源及代次清晰的毒株和细胞 1) 成大速达?的Vero细胞： 原始细胞库：引进美国ATCC的P134代细胞。 主细胞库：由原始库细胞传代至136代构建。 工作细胞库：由主库细胞传代至138代构建。 生产使用的细胞最多不会超过143代。 2) 成大速达?毒株来源和谱系： PV-2061毒株谱系 来源：美国疾病预防控制中心（CDC） 谱系：巴斯德PV2061 特征：VERO细胞适应的固定毒株 代次：第15代 被全球多个国家使用生产狂犬疫苗，证明为优良毒种。 * ? 主细胞库中136代Vero细胞经过复苏，在转瓶内37?培养，2次传代扩增至138代成为工作细胞，将扩增好的工作细胞移到生物反应器内，微载体高密度悬浮培养7天，细胞密度达到107个/毫升，这时Vero细胞不超过143代。加维持液中止细胞培养，接种巴斯德PV2061毒种，3天后开始连续收获病毒20天。测定收获的病毒液的小鼠滴度，应用全程无菌连接 的澄清过滤和超滤浓缩管线浓缩约20倍后，用β-丙内酯4?灭活，灭活验证试验合格后， 进行层析纯化，有效地去除残余牛血清、细胞碎片、残余细胞DNA等杂质，使产品达到高质量的标准。 对层析纯化收获液进行质量检定，合格后，无佐剂进行半成品配制。经过灌封、轧盖、包装 到成品。成品质量检定，效力大于等于4.5IU/剂，37?4周大于等于2.5 IU /剂。冻干37?8周大于等于2.5IU/剂。 成大速达TM的主要生产步骤 不同生产工艺的比较 这里是生物反应器、转瓶、细胞工厂等3种工艺流程病毒收获液小鼠滴度比较。 从图中可以看出，利用生物反应器微载体高密度悬浮培养收获液的病毒滴度，比其他生产工 艺高10倍以上，而且生物反应器工艺可以连续高滴度收获20天。因为单位体积内有效抗原 含量非常高，从而保证了产品最终效价。 ? 成大速达以Vero细胞为基质，采用生物反应器微载体高密度培养方法，使用巴斯德PV2061毒株制备的人用狂犬病纯化疫苗。 * 成大速达?产品具有以下特点： 1、免疫原性：连续108批平均出厂效价6.72IU/剂，三期及上市后临床研究显示，首针接种 后7天部分接种者抗体阳转，14天后抗体阳转率达到100%，快速产生高水平保护性抗体。 2、安全性：总蛋白、细菌内毒素、残余牛血清、DNA残留等安全性指标均优于国家标准， 确保不良反应轻微，发生率低。 3、稳定性：水针剂型37?放置4周，冻干剂型37?放置60天，效价仍然不低于2.5IU/剂，有利于储存和运输。液体剂型效期长达18个月，冻干剂型效期为3年。 4、使用经验：全球600万人次以上接种，未见严重的不良反应，全程接种后到今年为止无 狂犬病病例。 ? [药品名称] 通用名：人用狂犬病疫苗（Vero细胞） 英文名称：Rabies Vaccine for Human Use（Vero cell） 汉语拼音：Renyong Kuangquanbing Yimiao（Vero Xibao） 通用名：冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞） 英文名称：Rabies Vaccine for Human Use（Vero cell），Freeze-dried 汉语拼音：Donggan Renyong Kuangquanbing Yimiao（Vero Xibao） [成分和性状] 本品系用狂犬病病毒（L巴斯德固定毒PV2061毒株）接种Vero细胞培养后，收获病毒液，经浓缩、灭活、纯化，并加入适量的人白蛋白制成。1免疫剂量即为在有效期内其保护效价 等于或高于2.5个国际单位（IU）。本品为无佐剂疫苗，呈无色澄明液体。 本品系用狂犬病病毒(L巴斯德固定毒PV2061毒株)接种Vero细胞养后，收获病毒液，经浓缩、灭活、纯化，并加入适量的人血白蛋白、右旋糖酐制成。1免疫剂量即为在有效期内其保护效价等于或高于2.5个国际单位(IU)。本品为白色疏松体，加稀释液溶解后为澄明液体。 稀释液为无色、澄清溶液。 [接种对象] 暴露前： 本疫苗用于预防狂犬病，推荐下列人员按照暴露前免疫程序接种： 所有暴露于持续危险的工作着：如狂犬病病毒诊断、研究的工作者，应进行免疫接种；建议 每6个月进行一次血清学检测，当血清抗体滴度低于公认的保护水平（0.5IU/ml）时，应接种加强针。 凡有接触狂犬病病毒危险的人员：如兽医、动物饲养员、林业从业人员、屠宰厂工人、洞穴 居住者、动物聚居区的儿童、成人和旅游者等应进行免疫接种。 暴露后： 凡被患有或可疑患有狂犬病的动物咬伤、抓伤后，应立即按暴露后程序免疫接种。 [作用与用途] 接种本疫苗后，可刺激机体产生抗狂犬病病毒免疫力，用于预防狂犬病。 [规格] 水针：每盒内装5支疫苗，0.5ml/支，1剂量/支。 冻干：每盒内装5支冻干疫苗和5支0.5ml稀释液。1剂量/支。 [免疫程序和剂量] 本疫苗供上臂三角肌肌肉注射，幼儿可在大腿前外侧区肌肉注射。禁止臀部注射。 暴露前免疫程序： 基础免疫接种：第0、7、28天，共接种3剂。1年后加强接种1剂。以后每5年加强免疫1剂。 暴露后免疫程序： 1．辅助治疗 局部伤口处理必须在咬伤后马上进行。推荐首先用肥皂或清洁剂和大量的水反 复冲洗伤口，然后再用75%的酒精或碘酊洗涤，治疗必须在医生的监督指导下进行。 2．对未接受过免疫接种者 全程接种：分别在0、3、7、14、28天各注射1剂疫苗，共5剂，儿童用量相同。在第III级暴露情况下(见下表)，抗狂犬病免疫球蛋白必须与本疫苗同 时不同部位应用）。 一人抗抗狂犬病免疫球蛋白：20国际单位／公斤体重 一马抗抗狂犬病免疫球蛋白：40国际单位／公斤体重 在狂犬病疫区，对于严重咬伤或部位接近中枢神经者或较晚就诊者或有免疫缺陷者，建议在 第0天接种2剂疫苗。 暴露后治疗推荐意见： 伤口损伤类型 接触程度 推荐治疗 如果有可靠病史， ?级暴露 触摸或喂养动物、被动物添伤口 无需治疗 ?级暴露 无出血的皮肤咬伤、抓伤；破损的皮肤被舔触 立即接种疫苗 单一或多处贯通皮肤性咬伤或擦伤；粘膜被唾 立即注射抗狂犬病 ?级暴露 液污染（如舔伤口）；咬伤部位接近中枢神经 免疫球蛋白和疫苗 注：肇事动物在10天观察期都保持健康，或当通过适当的实验室检测技术证实为狂犬病阴 性时，可以停止治疗。 3、对已接受过免疫接种者：5年内接受过预防免疫病加强1针者，接种 2针，第0、3天各1剂。5年内接受过预防免疫但未加强者或最后的加强免疫超过5年者，接种5针，第0、3、7、14、28天各1剂，必要时要求使用狂犬 病人免疫球蛋白。对于免疫状态不确定的人群， 应按5剂接种。 [不良反应] 本疫苗可能对个别接种者产生不同程度的不良反应。 ——局部反应：注射部位疼痛、红斑、水肿、瘙痒、硬结。 ——全身反应：轻度发热、寒战、晕厥、无力、头痛、眩晕、关节痛、肌肉痛、 胃肠道功能紊乱。 ——此外，也可能发生极个别过敏反应、皮疹、荨麻疹。 本中未注明的任何不良反 应及时报告。 [禁忌] 1、暴露后治疗接种 由于狂犬病是致死性疾病，暴露后治疗接种，无任何禁忌症。 2、暴露前预防接种 -严重过敏性疾病。 -发热、急性疾病、慢性病的活动期建议推迟接种。 -对已知任何疫苗成分过敏者。 [注意事项] 水针： 1、 本品不能进行血管内注射，禁止针头插入血管。 2、 抗狂犬病免疫球蛋白和本疫苗决不能使用同一支注射器或在同一部位注射。 3、 使用前注意检查包装容器、标签、外观、有效期是否符合要求。 冻干： 1、本品不能进行血管内注射，禁止针头插入血管。 2、用稀释液溶解疫苗后应立即使用。 3、抗狂犬病免疫球蛋白和本疫苗绝不能使用同一支注射器或在同一部位注射。 4、使用前注意检查包装容器、标签、外观、有效期是否符合要求。 [贮藏] 于2～8?避光保存和运输。 [包装] 水针：本产品为西林瓶包装，5支/小盒，10小盒/中盒。 冻干：本产品为西林瓶包装，每盒内装5支冻干疫苗和5支0.5ml稀释液，10小盒／中盒。 [有效期] 水针：18个月 冻干：36个月 [执行标准] YBS00822004 [批准文号] 水针：国药准字S20043089 TM冻干：国药准字S20043090 Vero TM成大利宝------中国第一个安全有效的绿色乙脑疫苗 TM成大利宝是 中国第一个采用生物反应器高密度微载体细胞培养技术生产的乙脑疫苗，选 用的Vero细胞与生产毒株具有清晰的来源与传代史，符合WHO和我国SFDA的要 求。高效纯化系统使最终产品各项安全性指标均达到或者优于国家标准，全封闭、管道化、全程自 TM动化控制整个生产过程，确保产品批间差小，质量稳定。成大利宝不含任何防腐剂及抗 TM生素，几乎不含任何外源因子。临床观察显示，成大利宝具有良好的免疫原性及安全性， 接种后能产生理想的免疫效果，仅个别存在一过性轻度发热，未见任何局部反应。 成大利宝TM生产毒种采用中国生物制品检定所提供的P3株，是Vero细胞适应的毒株，免疫原性和稳定性良好，生产中严格控制病毒代次，确保疫苗的免疫原性。 成大利宝TM生产细胞是从美国菌种保藏中心（ATCC）引进134代的Vero细胞，主细胞库136代，生产代次不超过143代，低于国家SFDA规定生产用Vero细胞不能超过160代的规定。 生物反应器中高浓度的Vero细胞 微载体培养的Vero细胞（未感染病毒） 微载体培养的Vero细胞（感染病毒14天） 成大利宝TM是将乙脑P3毒株接种于生物反应器培养的Vero细胞后，连续灌流收获，经过超滤、浓缩、加入β-丙内脂灭活，再经高效凝胶层析纯化后制备而成的安全有效的人用乙 脑灭活活疫苗。 成大利宝TM的生产工艺流程 （一）生物反应器 成大利宝TM的厂房及工艺流程由WHO专家和美国FDA专家协助设计完成，关键生产环 节全部采用进口设备。 生物反应器高密度微载体培养Vero细胞技术，细胞密度可以达到1.0×107.8个/ml，确保收获高滴度的病毒抗原。 （二）纯化工艺 成大利宝TM采用高效4柱凝胶层析纯化技术，可去除99.95%杂蛋白和残余Vero细胞DNA，有效的减少过敏原，减少副反应发生。 与单柱、2柱串联凝胶层析相比，成大利宝TM的4柱层析纯化工艺更能保证收获到纯度更 高的病毒抗原。 （三）灭活工艺 成大利宝TM采用β-丙内脂灭活代替传统的甲醛灭活工艺。β-丙内脂灭活直接作用于病毒核 酸，使其无法复制而彻底灭活，同时不破坏病毒的外壳蛋白，保留疫苗的免疫原性。因此成 品中无甲醛残留，增加疫苗的稳定性和安全性。 成大利宝TM采用全自动控制、管道化生产、连续灌流收获的工艺，生产过程不需添加任何 抗生素，因此成品中没有抗生素残留，减少过敏反应的发生率。成大利宝TM响应WHO的号召，成品中不添加硫柳汞等任何防腐剂，彻底消除汞对儿童生长发育的影响。按照WHO的要求建立十万级的分包装车间，每个细节确保最终产品质量。 （四）不同疫苗生产工艺比较 乙脑疫苗工艺比较 【品质源于技术】 ? 成大利宝TM是中国第一个安全有效的绿色乙脑疫苗，也是第一个采用生物反应器微载 体高密度细胞培养技术生产的乙脑疫苗。 ? 选用的Vero细胞与生产毒株具有清晰的来源与传代史，符合WHO和我国SFDA的要求。 ? 全封闭、管道化、全程自动化控制控制整个生产过程，确保产品批间差小，质量稳定。 ? 高效纯化系统使最终产品各项安全性指标均达到或者优于国家标准。 ? 响应WHO的推荐意见，最终产品不含任何防腐剂及抗生素，不含任何外源因子，将对 儿童发育的影响尽量消除。 ? 临床观察显示，成大利宝TM具有良好的免疫原性及安全性，接种后能产生理想的免疫 效果，仅个别存在一过性轻度发热，未见任何局部反应。 ? 成大利宝TM，中国第一个采用国际技术工艺生产的绿色乙脑疫苗，是预防乙脑的理想 产品。 成大利宝TM与国内乙脑疫苗的比较 成大利宝TM灭传统工艺地鼠传统工艺地鼠传统工艺Vero传统工艺地鼠 活疫苗（Vero细肾细胞灭活疫肾细胞纯化疫细胞灭活疫苗 肾减毒活疫苗 胞） 苗 苗 疫苗生产基WHO推荐的 WHO推荐的 原代细胞 原代细胞 原代细胞 质 传代细胞 传代细胞 国际先进的反 细胞培养技手工解剖， 手工解剖， 手工解剖， 应器高密度 微 转瓶培养 术 转瓶培养 转瓶培养 转瓶培养 载体技术培养 灭活剂 β-丙内脂 甲 醛 甲 醛 甲 醛 无 纯化技术 独有的四柱层析 梯度密度离心 无 单柱层析 无 剂 型 水针、冻干 冻 干 水 针 冻 干 冻 干 效 价 国家标准 国家标准 国家标准 国家标准 国家标准 总蛋白含量 ?10ug/ 剂 ?10ug/剂 － ?120ug/剂 － 牛血清含量 ?30ng/ 剂 ?50ng/剂 ?50ng/剂 ?50ng/剂 ?50ng/剂 DNA含量 ?10pg/剂 ?100pg/剂 － － － 柳硫汞含量 无 ＜0.10mg/ml ＜0.10mg/ml ＜0.10mg/ml ＜0.10mg/ml 细菌内毒素 ?50EU/ 剂 ?100EU/剂 ?100EU/剂 ?100EU/剂 ?100EU/剂 游离甲醛 无 ?0.01mg/ml ?0.5mg/ml ?0.01mg/ml － 转瓶生产，产手工解剖，原手工解剖，原手工解剖，原工业化生产， 量低，不能满代细胞生产，代细胞生产，代细胞生产，产 量 疫苗产量可以 足 无法实现工业无法实现工业无法实现工业满足市场需求。 市场需求。 化。 化。 化。 通用名称：乙型脑炎纯化疫苗（Vero细胞） 英文名称：Japanese Encephalitis Purified Vaccine (Vero Cell) 汉语拼音：YiXing NaoYan ChunHua YiMiao (Vero Xibao) 【成份和性状】 ＊水针剂型是用VERO细胞培育P3株乙型脑炎病毒，经浓缩、纯化，采用β－丙内脂灭活后，分装而成，为无色澄明液体。 ＊冻干剂型是用Vero细胞培育P3株乙型脑炎病毒，经浓缩、纯化，采用β－丙内脂灭活后，冻干而成，为白色疏松体，溶解后为澄清液体。 【接种对象】 主要为6个月至10周岁儿童和由非疫区有可能进入疫区的儿童和成人。 本产品可与其他乙脑疫苗交叉使用。 【作用与用途】 本疫苗免疫接种后，可刺激机体产生乙型脑炎病毒的免疫力，用于预防乙型脑炎。 【规 格】 ＊水针剂型每盒内装2支疫苗，0.5ml/支，1剂量/支。 ＊冻干剂型1剂量/支，每盒内装2支冻干疫苗和2支0.5ml稀释液，10小盒/中盒。 【免疫程序和剂量】 1、于上臂外侧三角肌，经消毒后肌肉注射0.5ml。 2、基础免疫应注射两针，间隔1周，在第二针注射后1个月至1年内注射第三针作为加强免疫，以后可根据当地流行情况3～4年加强一次。 ＊冻干剂型将疫苗稀释液（灭菌注射用水）0.5ml加入冻干疫苗的西林瓶中，轻轻摇动，使 疫苗充分溶解。 ＊水针剂型可直接使用。 ＊本乙脑疫苗可与其他乙脑疫苗交叉使用。 【不良反应】 本疫苗可能对个别接种者产生不同程度的不良反应。 ——局部反应：注射部位疼痛、红斑、水肿、瘙痒、硬结。 ——全身反应：个别接种者可有一过性发热，一般不超过24小时，如果体温超过38.5?， 或发热时间延长，应对症治疗或请医生诊治。 【禁 忌】 1、发热、急性疾病、严重慢性疾病活动期建议推迟接种。 2、体质衰弱、严重过敏性疾病、对药物或已知任何疫苗成分过敏者不可注射。 【注意事项】 1、本品不能进行血管内注射。 2、使用前注意检查包装容器、标签、外观、有效期是否符合要求。 3、西林瓶有裂纹、标签不清，或有摇不散的絮状物不得使用。 4、注射疫苗时应备有肾上腺素，以备偶有发生过敏反应时急救用。 【贮 藏】 于2～8?避光保存和运输。 【包 装】 ＊水针剂型1剂量/支，0.5ml/支，2支/小盒，10小盒/中盒。 ＊冻干剂型1剂量/支，每盒内装2支冻干疫苗和2支0.5ml稀释液，10小盒/中盒。 【有效期】 ＊水针剂型有效期18个月 ＊冻干剂型有效期24个月 【执行标准】 企业注册标准 【生产企业】 企业名称：辽宁成大生物股份有限公司 生产地址：辽宁省沈阳市浑南新区新放街1号 邮政编码：110179 电话号码：024－23784215 传真号码：024－23781019 网址：www.cdbio.cn * 这里是狂犬病病毒的电镜照片： 唾液腺中的狂犬病病毒 细胞培养的狂犬病病毒 细胞培养的狂犬病病毒 从图中可以看到，狂犬病病毒因为形状像子弹而被定为弹状病毒科、狂犬病属。 世界卫生组织（WHO）将世界各地的狂犬病病毒分成四个血清型，6种基因型。1型狂犬病病毒是主要感染人类的病源，基因型2~6型非常罕见。实践证明，目前使用的毒株生产的疫 苗对于人类的保护效果是肯定的。 * 狂犬病病毒的结构模式图及横切面模式图： 狂犬病病毒为单股负链RNA病毒，这里是狂犬病病毒结构模式图及横切面模式图。 病毒外壳为紧密而完整的脂蛋白双层包膜，包膜下面是一层基质蛋白，外表有1600~1900个10nm长的槌状糖蛋白（G）覆盖。病毒中央是直径为40nm的核衣壳，它包含核酸（RNA）、核蛋白（N）、磷蛋白（P）和依赖RNA的RNA多聚酸（L）。1750个核蛋白（N）分子与核酸（RNA）结合形成核糖核蛋白（RNP），并有60个RNA多聚酸（L）分子与95个磷蛋白（NS）分子一起构成紧密螺旋的核衣壳。糖蛋白（G）可诱导产生中和性抗体，产生保护。 狂犬病病毒的基因结构图 1981年，美国首先报道了ERA株的糖蛋白（G）的基因序列。 1988年，法国Tordo完成了狂犬病病毒PV株的基因序列。 从图中可以看出，狂犬病病毒是不分节段的单股副链RNA，其中91%参与编码5种结构蛋白：核蛋白（N）、磷蛋白（P）、基质蛋白（M）、糖蛋白（G）和RNA多聚酸（L）。其中糖蛋白是研究最广泛、最深入。不同株的G一般都由相同的开放阅读框架编码而成，成熟 的G分为3个区： 1. 膜外区即抗原区：保守性非常高，不同株之间的同源性一般大于90%。 2. 跨膜区：不同株之间差异比较大，同源性在50－60%。 3. 模内区即附着区。 有人研究G在大肠杆菌、酵母中表达的糖蛋白，表明仅有抗原性而没有免疫原性，这可能 是糖蛋白（G）没有糖基化，所以G的空间构型不同，使抗原位点不能突出表面而显现其免 疫原性。 乙脑病毒结构 乙脑病毒于1935年首先在日本患者脑组织中分离获得，因此又称日本脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV），为球形单股正链RNA病毒，属于黄病毒科黄病毒属，直径20～30nm，内有衣壳蛋白与核酸构成的核心，外披以含脂质的囊膜，表面有囊膜糖蛋白刺突， 即病毒血凝素，囊膜内尚有内膜蛋白，参与病毒的装配，乙脑病毒基因组全长11kb，自5′至3′端依次编码结构蛋白C、M、E以及非结构蛋白NS1—NS5。 乙脑病毒外观 乙脑病毒内部结构 乙脑病毒分型 根据乙脑病毒株E基因序列分析可将乙脑病毒分为5种基因型，即?~?型，其中?型乙脑病毒是分布最广的病毒株，主要分布在日本、朝鲜、菲律宾、印度和斯里兰卡等广大亚洲地 区，我国流行的乙脑病毒也属于?型乙脑病毒。 乙脑病毒基因结构 乙脑病毒的免疫原性 乙脑病毒蛋白的合成主要是在宿主细胞的多聚核糖体的粗面内质网上进行，翻译出结构蛋白 和非结构蛋白。结构蛋白是病毒粒子的主要成分,也是维持形态结构的主要物质，结构蛋白 包括衣壳蛋白C、毒粒包膜蛋白M(由PreM切割而来)和包膜蛋白E；非结构蛋白则有NS1、 NS2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b和NS5等。其中M蛋白、E蛋白能够刺激机体产生中和抗体，NS1蛋白能诱生非中和性的保护力，是疫苗产生免疫原性的主要成分。 据报道，将含有E蛋白基因重组质粒的蛋白经皮内或肌肉注射免疫鼠后，再用乙脑病毒攻 击，可分别获91%和89%的保护率，而JEVprM_E蛋白基因重组质粒免疫鼠后，可获100%的保护率。乙脑病毒免疫除产生体液免疫外，还产生以CTL效应为主的细胞免疫应答。除prM_E与NS3蛋白编码基因外，C、NS1、NS2A、NS2B、NS5等均可诱导机体产生有效CTL，而且此种CTL对JEV感染靶细胞均有明确杀伤作用。因此，乙脑病毒可同时产生体 液免疫应答与细胞免疫应答，从而保证疫苗的有效性。 乙脑发病原理 当人体被带病毒的蚊虫叮蛟后，病毒即进入血液循环中。发病与否，一方面取决于病毒的毒 力与数量，另一方面取决于机体的反应性及防御机能。如果已经接种过乙脑疫苗，体内存在 一定数量的抗体，此时人体抗体病能力较强，病毒即被消灭，不发病或不表现临床症状。 当人体抵抗力较弱，而感染病毒量大，毒力强时，病毒经血循环即可突破血脑屏障侵入中枢 神经系统，并在神经细胞内复制增殖，导致中枢神经系统广泛病变。不同的神经细胞对病毒 感受不同，以及脑组织在高度炎症时引起的缺氧、缺血、营养障碍等，造成中枢病变部位不 平衡，如脑膜病变较轻，脑实质病变较重；间脑、中脑病 变重，脊髓病变轻。 乙脑病毒引起病变过程 1乙脑病毒引起的血管病变 脑内血管扩张、充血、小血管内皮细胞肿胀、坏死、脱落。血管周围环状出血，重者有小动 脉血栓形成及纤维蛋白沉着。血管周围有淋巴细胞和单核细胞浸润，可形成“血管套”。 2乙脑病毒引起的神经细胞变性、肿胀与坏死 神经细胞变性，胞核溶解，细胞浆虎斑消失，重者呈大小不等点、片状神经细胞溶解坏死形 成软化灶。坏死细胞周围常有小胶质细胞围绕并有中性粒细胞浸润形成噬神经细胞现象 （neuronophagia）。脑实质肿胀。软化灶形成后可发生钙化或形成空洞。 3乙脑病毒引起的胶质细胞增生 主要是小胶质细胞增生，呈弥漫性或灶性分存在血管旁或坏死崩解的神经细胞附近。