水蛭乙醇提取物对大鼠血脂和一氧化氮及其合酶影响

水蛭乙醇提取物对大鼠血脂和一氧化氮及其合酶影响 水蛭乙醇提取物对大鼠血脂和一氧化氮及 其合酶影响 ? 24?中国现代医药杂志2008年5月第10卷第5期MMJC,May2008,Vol10,No.5 水蛭乙醇提取物对大鼠血脂和一氧化氮 及其合酶影响 王宏涛李春志肖顺林洪醇赞 【摘要】目的研究水蛭乙醇提取物对实验性高脂血症大鼠血脂和,氧化氮及其 合酶的影响.将50只大鼠 分为5组,即正常对照组,高脂对照组和低,中,高3个剂量的实验组,每组10只, 分离血清TC,TG,HDL—C,LDL—C, NOS,iNOS,cNOS活性.采用试剂盒法测定;NO采用硝酸还原酶法测定,比较其差 异.结果水蛭乙醇提取物能明显降低 大鼠体内TC,TG,LDL—C,NO浓度,给予水蛭乙醇提取物组血清NOS,iNOS活性 降低,cNOS活性升高.结论水蛭乙醇 提取物能调节高脂血症大鼠血脂代谢及纠正NO代谢紊乱. 【关键词】水蛭血脂一氧化氮 Effectsofextraofhirudoonbloodlipidmetabolism,nitricoxideandnitric—oxidesynthase inexperimentalhyper? lipidemiaratsHongtao,LiChunzhi,XiaoShunlin,eto1.Pharmaceutico1department,thefi rsthospitcdofLuzhou medicaluniversity,Sichuan646000 【Abstract]ObjectiveToobservetheeffectofextraofHimdoonbloodlipidmetabolism,nitri coxide(NO)andni- tric-oxidesynthaseinexperimentalhyperlipidemiarats.MethodsHigh—fat-dietwasuse dinexperimentalhyperlipidemia rats.50wistarratsweredividedinto5groups:controlgroup,highlipidcontrolgroup,3\15\7 5mg/(kg’bw?d)extraofHirudo group.ThecontentofTC,TG,LDL—C,HDL—CandNOandactivitiesofNOS,cNOSandi NOSinserumweremeasuredre- spectively.Resultsresultshowedthathigh—flat—dietcausedhyperlipidemia.ThecontentofTC.TG.LDL—CandNO andactivitiesofNOSandiNOSinserumweredecreasedsignificantlyintheHirudogroupcomparedwithhighlipidcontrol group.Inthecomparisonwithhighlipidcontrolgroup,activitiesofserumcNOSincreasedi nthehyperlipidemiarats.Con- clusionExtraofHirudocanregulatebloodlipidandfreeradicalmetabolisminhyperlipide miarats. 【Keywords】ExtraofhirudoHyperlipidemiaNitricoxide 高血脂,脂质代谢障碍及体内过氧化脂质的增 多都与AS的形成有关.动脉粥样硬化(AS1是严重 危害人类健康的常见病,现认为调节血清脂质水平 可降低冠心病死亡率和缺血性心脏事件的发生率. 水蛭异名有马鳖,蚂蝗等.药用水蛭系环节动物蛭 纲水蛭科动物蚂蝗的干燥全体.《本草纲目》记载 ,苦胜血.水蛭之咸苦,以除畜血,乃肝经血 “咸走血 分药,故能通肝经聚血”.调脂散中以本药为主药以 减低血脂,本实验研究了水蛭乙醇提取物对高脂血 症大鼠血脂和一氧化氮及一氧化氮合酶的影响I1j. 1材料与方法. 1.1实验动物健康Wistar大鼠,雌雄皆有,体重 作者单位:646000四川省泸州市泸州医学院附属医院药剂科 (王宏涛,肖顺林);中国医科大学附属一院放射科[李春志(在 读博士)】;延边大学医学院药理科(洪醇赞) 180,190g,由延边大学动物中心提供. 1.2药品及试剂水蛭:购买于延边药材公司.水蛭 乙醇提取物由从水蛭中提取,实验时,用蒸馏 水配成所需浓度的混悬液.水蛭乙醇提取物的提取 方法:水蛭粉碎(30目筛)取水蛭粉碎,分别加水 10,6,4倍,煎3次(时间90,60,40min),滤取煎液浓 缩至l:l,加95%乙醇沉淀处理3次(乙醇浓度达到 70%),乙醇提取液过滤后,减压回收乙醇,滤清,加 蒸馏水即得. 血清总胆固醇(TC),总甘油三酯(TG),高密度 脂蛋白胆固醇(HDL—C1,低密度脂蛋白胆固醇(LDL— c1测定试剂盒为上海力升生物技术研究所产品; NO,NOS,iNOS,cNOS测定试剂盒为南京建成生物 工程研究所产品.胆固醇,胆酸钠:哈尔滨生化试剂 公司.猪油:市售. 1.3主要仪器UV755B紫外可见分光光度计f上 中国现代医药杂志2008年5月第lO卷第5期MMJC,May2008,Vol10,No.5?25? 海精密科学仪器有限公司分析仪器1,高速台式离心 机,冷冻离心机.旋转蒸发器. 1.4高脂饲料基础饲料88%,蛋黄粉2%,猪油 8%,胆固醇2%,自制. 1.5造模及分组实验设5个组,即正常对照组f给 予基础饲料1,高脂对照组f给予高脂饲料1和低,中, 高3个剂量的实验组f给予高脂饲料的同时1,每组 1O只鼠.饲养环境温度18?一22oC,自然光照,动物 自由摄食和饮水.3周末尾静脉取血分离血清,检测 血脂升高后说明造模成功.高脂对照组和实验组继 续喂高脂饲料,实验组每天灌胃给予不同剂量,即 每日3,15,75mg/kg的受试物,正常对照组,高脂对 照组灌胃等量的蒸馏水,连续灌胃4周.每周称重 2次,根据体重调整剂量. 1.6检验指标动物处死前禁食12h,眼球取血分 离血清,TC,TG,HDL—C,LDL—C,NOS,iNOS,cNOS活 性采用试剂盒法测定;NO采用硝酸还原酶法测定. 1.7统计学方法与高脂对照组相比,在TC,TG, HDL—C3项中,两项或以上指标(TC下降>10%,TG 下降>15%,HDL—C升高4mg/kg)为阳性.若TC和 TG单项指标阳性,则必须有两个或以上剂量组结 果阳性才能称受试物阳性.实验结果采用SPSS11.0 统计软件进行方差分析. 2结果 2.1实验前各组大鼠血脂值,试验前各组间TC,TG, HDL—C和LDL-C基础值无显着差异(P>O.05),见 1. 表1试验前各组大鼠血脂基础值(mmol/l,x一~s) 2.2水蛭乙醇提取物对动物血脂的影响?试验后 C值与高脂对照组的值 正常对照组TC,TG和LDL— 相比,均具有极显着差异fP<O.011,表明建模成功.? 实验组与高脂对照组相比TC和TG值随剂量的增 高而降低,低,中和高剂量组分别具有显着差异fP< 0.051和极显着差异fP<O.01).LDL—C值在低,中,高 剂量组分别有极显着差异(P<O.01),见表2. 2.3水蛭乙醇提取物对大鼠体重的影响实验前, 后各剂量组的体重及增重无显着差异(P>O.05). 2.4水蛭乙醇提取物对高脂血症大鼠血清NO, NOS,iNOS,eNOS的影响见表3. 表2水蛭乙醇提取物对大鼠血脂的影响fmmol/?s 注:与高脂饲料组相比,为P<0.05.为P<0.0l 表3水蛭乙醇提取物对高脂血症大鼠血清NO,NOS,iNOS,eNOS的影响 注:与高脂饲料组相比,为P<0.05.为P<0.01 . 26.中国现代医药杂志2008年5月第lO卷第5期MMJC,May2008,Vol10,No.5 高脂对照组NO,NOS,iNOS明显高于正常组, 实验SH(P<0.051,水蛭乙醇提取物高,中,低剂量组与 高脂对照组之间差异显着fP<O.011且随剂量增加疗 效越明显,有量效关系而与正常对照组之间差异不 显着fP>0.05).对eNOS的影响结果则相反,高脂对 照组eNOS明显低于正常SH(P<0.051.给予水蛭乙醇 提取物后能提高eNOS的活性,且水蛭乙醇提取物 高剂量组与正常组差异不显着O.051. 3讨论 中医认为高脂血症以血淤为本,痰浊为标;《本 草汇言》:”水蛭,逐恶血,淤血之药也”.《本草经百 种录》:”水蛭最喜食人之血,而性又迟缓善入,迟缓 则生血不伤,善人则坚积易破,借其力以攻积久之 滞,自有利易无害也”. 高血脂是一种中老年人很常见的一种改变,造 成动脉血管粥样硬化,同时,血管壁沉积物增多,造 成血流受阻,血液速度减慢,而引起缺血性心脏病. 中医研究认为,气滞血瘀,气行则血行,血瘀的发生 原因是由于血液的流动性和粘性变化所起,在治疗 高血脂患者时单纯从以往惯用的扩容方面是远不能 达到治疗目的的,而必须以白伯叶定律为依据制定 以逐恶血,淤血为主的,才能达到理想疗效.本 试验表明水蛭乙醇提取物能明显降低高脂大鼠的 TC,TG和LDL—C值,而对HDL—C影响不大[21. ,发展中,高脂血症所造成的动脉内皮 AS发生 功能损害起关键作用,这种损害可能的原因是内皮 细胞NO代谢的异常[3]. NOS分为结构型NOS(cNOS)及诱导型NOS NOS1,血管内皮细胞为cNOS,cNOS催化反应快,生 成NO少,而平滑肌细胞及其它可诱导细胞如巨噬 细胞主要为iNOS.在生理条件下,NO主要来源于 cNOS,发挥传递介质和调节介质功能.诱导型一氧 化氮合酶(iNOS)是不依赖钙离子的酶,催化反应 慢.在非调节状态下可持续数小时导致释放大剂量 NO.短暂合成和持续产生的这2种NO在病理生理 学上意义完全不同.因此.iNOS可能以”病理性”酶 形式而起作用[41. 本研究显示.高脂对照组血清NO含量,NOS, iNOS活性明显高于正常组.而cNOS活性则明显低 于正常组(P<O.05),实验组通过降低血清NO含量, NOS的含量和降低iNOS活性.升高eNOS活性而 调节N0水平. 水蛭之所以在活血化淤治疗中有显着作用.与 其降低血脂和调节一氧化氮及其合酶含量有关,水 蛭含有多种有机成分,丰富的微量元素与氨基酸的 群体效应的协同作用关系密切.因而是值得深入研 究和进一步开发的宝贵中药之一. 参考文献 lMULSE,BLAT0NV,ROSSENEUM,eta1.Serumlipidsan dapolipoproteinsA—I.A一?.andBinhyperthyroidismbefore andaftertreatment[J1.JClinEndocrinolMetab,1982,55(3):459- 464 2CARANTONIM,VIGNAGB,STUCCIN,eta1.Lowlevelsof HDLcholesterolinhypothyroidpatientswithcardiovasculardis eases[J].MinervaEndocrinol,1997,22(4):91-97 ,吴宗贵,郭延松,等.大鼠动脉粥样硬化和高脂血症一氧 3杨军珂 化氮特点的比较[J1.上海医学,2003,26(4):239-242 4ForstermannU,ClossEI,PollockJS,eta1.Nitricoxidesynthase enzymes:Characterization,mpurification,molecularcloning,and functions[J1.Hypertension,1994,23:1121-1131 (收稿:2008.O1.08)