高效液相色谱法测定风湿骨康胶囊中士的宁和马钱子碱含量

高效液相色谱法测定风湿骨康胶囊中士的宁和马钱子碱含量 高效液相色谱法测定风湿骨康胶囊中士的宁和马钱子碱含 量 【摘要】 目的建立风湿骨康胶囊中两种有效成分士的宁和马钱子碱的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱法, Hypersil BOD C18, 5 μm～250 mm×4.6 mm,,流动相:0.3%三乙胺水溶液(磷酸调pH为2.8)-乙腈:,88?12,。流速1 ml〃min-1,柱温35?,检测波长254 nm。结果士的宁和马钱子碱进样量分别在0.010 8，0.345 6 μg 和0.009 2，0.292 8 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系～回收率分别为100.4%和97.78%。结论该法操作简便、快速、准确～适用于风湿骨康胶囊的质量控制。 【关键词】 高效液相色谱法 风湿骨康胶囊 士的宁 马钱子碱 风湿骨康胶囊是由麻黄、马钱子、防风、牛膝等16味中药组成的复方制剂～是由风湿骨康片,1,通过改变剂型而得的胶囊剂～具有追风散寒、除湿止痛的功效。马钱子中的主要成分为士的宁和马钱子碱～其毒性大～具有使中枢神经系统兴奋等多种作用～安全范围窄～过量使用常会导致惊厥、抽搐、昏迷等严重的神经系统不良反应,2～3,。已报道的测定方法有薄层色谱法、紫外光谱法、高效液相色谱法等,4～5,。为了更有效地控制含量～提高产品质量～本实验采用高效液相色谱法测定两者含量。 1 试剂和药品 天美高效液相色谱仪,千谱工作站。士的宁对照品,批号0705-200005,购自中国药品生物制品检定所、马钱子碱对照品购于上海顺勃生物制品有限公司,风湿骨康胶囊为市售～贵州的确神药业有限公司生产,缺马钱子阴性样品,自制,～乙腈为色谱纯～三乙胺、磷酸为分析纯～水为超纯水。 2 方法与结果 2.1 对照品溶液的制备精密称取士的宁对照品、马钱子碱对照品适量～精密称定～加甲醇分别制成每毫升含士的宁0.216 mg马钱子碱0.183 mg的对照储备液。各取1 ml臵10 ml量瓶中～制成含量分别为21.6～18.3 μg的混合对照溶液～即得。 2.2 供试品溶液的制备取样品胶囊20粒～倾出内容物～研细～混匀～精密称取0.25 g于150 ml具塞锥形瓶中～加1 ml浓氨水润湿样品后～准确加入50 ml氯仿～称重～超声提取30 min～静臵～冷却～称重～加氯仿补足失去的重量～摇匀～过滤～取其滤液25 ml～挥干～用甲醇溶解残渣～定量转移至5 ml量瓶内～并稀释至刻度～摇匀～作为供试品溶液。 2.3 阴性对照溶液的制备按处方比例及制备工艺～配制不含马钱子的阴性对照品～并照“2.2”项下方法制得阴性对照溶液。 2.4 色谱条件和系统适用性实验色谱柱:Hypersil BOD C18 ,250 mm×4.6 mm～5 μm,,流动相:乙腈-0.3%三乙胺(磷酸调pH至2.8),12?88,,流速1.0 ml/mim,检测波长254 nm,柱温35?,进样量10 μl。色谱图。如图1，3。 图1 阴性样品色谱图,略, 图2 对照品色谱图,略, 图3 样品色谱图,略, 2.5 线性关系考察 分别精密量取士的宁和马钱子碱的混合对照品溶液0.25～0.5～1～2～4～8 ml于10 ml容量瓶中～用甲醇至刻度～摇匀～作为系列对照品混合溶液。在上述色谱条件下分别进样20 μl～记录色谱图。以对照品进样量,μg,为横坐标～对色谱峰面积,A,为纵坐标绘制曲线。结果明～士的宁在0.010 8，0.345 6 μg范围内线性关系良好～回归方程,n=6,为:Y=262 606X-21.573,r=0.999 6,,马钱子碱在0.009 2，0.292 8 μg范围 内线性关系良好～回归方程,n=6,为:Y=4 832.9X-6.475 6,r=0.999 9,。 2.6 精密度实验 精密吸取对照品溶液10 μl～注入液相色谱仪～连续进样6次～记录各峰面积～计算相对标准偏差～结果RSD分别为1.1%～0.6% 。 2.7 重复性实验取同一批号,071002,6份～按“2.2”项下制成供试品溶液～依法测定～记录峰面积～RSD分别为1.9%～1.8%。 2.8 加样回收率实验 准确称取样品,071002,5份～按照“2.2”项下方法制备。各进样10μl～计算回收率。得到士的宁、马钱子碱回收率分别为:100.4%～97.78%,RSD为1.1%～0.15%。结果见表1，2。 表1 士的宁回收率测定结果,略, 表2 马钱子碱回收率测定结果,略, 2.9 稳定性实验 取供试品溶液～分别在0～1～2～4～6～8 h依法测定。结果表明～士的宁、马钱子碱在8 h内稳定性良好～RSD分别为1.7%～2.3%。 2.10 样品测定 取本品～按“2.2”项下操作～按拟定方法测定～分别计算士的宁和马钱子碱含量。结果见表3。 表3 样品测定结果,略, 3 讨论 1 g士的宁能溶于6 400 ml水、150 ml乙醇、5 ml氯仿、260 ml甲醇～极微溶于乙醚和石油醚,6,～故选择氯仿和甲醇作为提取溶剂进行考察。结果显示以氯仿提取效果更好。 经过筛选～以乙腈-0.3%三乙胺,12?88,为流动相～pH调至3.0时～两个对照峰分离效果不好～且保留时间短～将pH调至2.8后～两者能完全分离～保留时间合适。 【参考文献】 ,1, 国家药典委员会.中国药典～?部,S,.北京:化学工业出版社～2005:327. ,2, 孙 杰～谷学新 ～赵新颖～等.HPLC测定风湿安泰片中马钱子碱和士的宁的含量,J,.药物分析杂志～2007～27,5,:757. ,3, 黄喜茹～孙泽东～曹 冬～等.马钱子的质量控制方法研究,J,.光谱学与光谱分析～2006～26(2):324. ,4, 武建民～王杏云～颜战胜～等.薄层扫描法测定风湿骨康片中士的宁的含量,J,.现代中医药～2004～3:66. ,5, 张春成～张金成～刘玲珠.反相高效液相色谱法测定风湿骨康片中士的宁的含量,J,.中国药品标准～2004～5(1):35. ,6, 孙文基.天然药物成分定量分析,M,.北京:中国医药科技出版社～2003:1.