血浆中立克命衍生化毛细管气相色谱法测定

血浆中立克命衍生化毛细管气相色谱法测定 血浆中立克命衍生化毛细管气相色谱法测 定 懿1991J6(4):207,2O9 血浆中立克命衍生化毛细管气相色谱法测定 王莉张志荣”柳克清蒋学华 (华西医科太学成都6l?l1) 摄娶谈文研究了血浆中立克命的提取,街生化和毛细臂气相色谱分离测定的方法.其检测限为 10-’克J圊收事为75.0-1’6.74×10J变异系数为0.90(n=6).本法简便,快蘧灵敏.可望用于 临床立克命中毒者体内毒蜘分析. 关?词立克命毛细臂气扭色谱法衔生化 立克命(eoamatctraly)商品名为R cumin,是目前国内外普遍使用的香豆橐类抗 凝血杀鼠药.近年来常有立克命中毒事件发生, 临床上也时有快速检测立克命申毒的需求.其 检测法已有薄层层析法(1),分光光度法[“, 高效液相色谱法(3,4)及气相色谱法(5,6). 这些方法在灵敏,专属和快速等方面均有不足 之处.特别是气相色谱法,因此类药分子结构 中的羟基有极性,气化温度较高易降低色 谱柱寿命.现可经提取和衍生化后,毛细管气 相色谱法分离测定血中立克命浓度.其曲 线方程为IAR=20161x一33.2Jf=0.9984j线 性范围为:40ng,400ng}检测限为lO出血 浆中立克命测定的回收率为75.0_4-6.74x lO. 实验部分 i ,但置与试剂 GC193型气相色谱仪(上海分析仪器厂)l CDMC—lB型数据处理机(上海计算机研究 所),SE-52弹性石英毛细管柱(0.25ramx 13m)(北京分析仪器厂),LXJ-6~-Ol离心 机(北京医疗器械厂),YKH—l型液体快速 棍台器(江西医疗器械厂) 立克命,纯品,(西德拜耳公司提供)’ 乙酸酐,吡啶,氯仿,丙酮,无水硫酸钠均为 ? 华西医科大学青年科学基盘货助艇目 ??通讯联系人,华西医大药学院 分析纯. =,色誊分折条讳 检测器氧火焰离子化检测器进样器温 度3O0?,柱温260?,检澳『器温度29O?}气流 Nzl5ml/mtn;窟气抽Omj}/m抽,煞气95mi/ int灵敏度衰减1/4,量程2my,纸速 4,mm/mla. 三,标准曲鼓尉鲁 1.标准对照晶溶液配制精称立克命400 mg,置lOOml容量瓶中,加氯仿溶解稀释至刻 度,摇匀.’精取此液10ml于另一lOOm1容量瓶 中,加氧仿稀释至刻度,即得0.4Omg/ml标准 蔽,置冰箱中备用. 2.衍生化反应 精密量取立克命标准液lml于试管中, 35?氨气流下挥干溶剂,加入乙酸酐一吡啶 (11)lml,置涛嫩浴加热lO分钟,取出 放冷,进样0.2?1. 3.测定方法与结果精密量取立克命标准 液适量,用熹【仿稀释成0.O8,0.0.24, 0.32,0.40.0.48,O.56,0.64,0.72,0.80 mg/ml浓度的标准试液,分别取不同敞度试液 各lml,挥干溶剂,衍生化,同时作空自试验, 按前述气相色谱分析条件检测,每种浓度连续 进样三次,每次进样0.51,将所得结果以峰面 积AR为纵座标,立克命浓度为横座标绘制标准 曲线(图1),并将数据进行回归得方程为: AR=20161x一33.2f=0.9984线性范围 华西药学杂志6卷 xlf Ia 《 B _了.:嚣 F1.StaadmrdCUR’veotcoumatetraly 盈血浆中立宽命的国收率健验 l_血浆中立克命的提取及衍生化取立克 命标准液适鞋,氮气流下挥干溶剂,加入1m1 空白血浆,置快速混合器上棍匀.加入冰醋酸 酸化(PH=3),离心,取上清液予乳罅中, 加入无水硫酸钠3g,研成粉末,装入底部铺有 步许脱脂棉的注射器中,用丙酮15m1分次淋 沈,合并洗脱液,过滤,挥干溶剂,加入乙酸 酐一毗啶(]:1)1m1,于沸水浴中加热1O 分钟,冷却,供检. 2.测定及结果取立克命标准0.5,1,l_5 ml各两份,同上法加入空白血浆,提取及衍生 化,各进样0.51,检测蜂面积,并由标准曲 线求得含量,计算回收率.平均回收率为75.0 ?6.74x10,.结果见I. 表1血浆中立克命的回收率 Table1Therecoveries0fcoumatetraly inserum 捌 (mg 圳蓝 SD . )(嘴))(%)( 结果与讨论 1.本文建立的衍生化毛细管气相也谱法可 较快速,准确地检测血浆中的立克命,检测限 10,g,回收率较高,经进一步研究后可望用于 临床中毒患者的快速检测. 2.立克命为弱酸性药物(7],故选择酸性 条件下用丙酮提取的方法.结果表碉,该法能 排除血浆中共存物的干扰,测定的回收率恒定; 简便,适于快速分析. 3.立克命分予结构中的羟基有极性,用填 充拄和毛细管柱分离保留时间均很长灵敏度 低.经衍生化后则不同.各进样相同量进行气 相色谱分析(毛细管柱),结果衍生化的保留 时间为993,峰面积为3217,而未经衍生化的分 别为1584,671.见图2. Fig2.Chromatogramofeoumatetralyfa) anditsderivative’b 4.文献报道立克命在120?以下热稳定性 良好.且在80,120?范围内热分解率基本相 同[.作者选择沸水浴加热衍生化,定时取样 分析,结果表明反应10努钟至5O分钟峰面积无 明显变化,说明衍生化反应1O1分钟即已完成, 将衍生化产物置室温,定时取样分析,证明衍 生化物在72小时内蜂面积无明显变化. 5.实验表明柱温高于270?时分离效果不 佳,低于250?时分析时间延长.选择260?较 为适宜.柱长大于I5m分析时间明显增长,小 于10m分离效果欠佳,故选择12.5,13.Om毛 细符柱较直. i.............v— 4期 参考文? 1.0w鼬P,秕a1.J曲rc如1978i101,la 2.丹析化学文摘?1e5|1:53? 3.丁国,尊.第三届生国法蘑学术斑备- 1日B 4.Hu.nterKJehroma~ogra1983~270:267. 5.王其海,等.第三届生国法医学木麦流台论文汇箱 搴f?:,. e.ey盱盘毓血抽Toxicology1980} 845.. e:幡芏l最婚箍.国外农葑品种(三). l086. THEQUANTITATIVEDETERM~NATIONOFCOUMATETRALY IN.~ERUMBYCAPILLARYGASCHREMATOGRAPtt~ WangLiZhangZhirongLiuKeqingJiangXuehua WestChinaUniversity町MedicalSciences,Chen~du-610041) ABSTRAeTThemethodsofex一 ~ction8ndde~tv-atizafitmofcoumatetra~y (Racumtn).mse瑚皿1were?es七吕_bl;shed. Thederivativeo}coum~alyaB, terrainat~dbycapillarygasehromatogra— phyAndnca口besepara~edonSE-52 Iusedsilicorteapillm-ycolumn(1Sin×0.25 KeyWord5Cmat曲myCapillary mmi.d?)w|thN:(ismllmin).a王r(400 ml/m叫,h州r0gen(85ml/m.m)andFID Thedeteirniria~ion1imltIs10’g}asevage recovery”is75. 0?674×1’;CV重s 0.go%m6).Themanlpula~onisslm— ple.swiftandsensitive, gasChromatographyReteuininder~;atizalion