【DOC】乳癖宁贴膏质量控制方法研究

【DOC】乳癖宁贴膏质量控制方法研究 乳癖宁贴膏质量控制方法研究 乳癖宁贴膏质量控制方法研究 叶立新,陈月4梅21张树平,赖素萍,陈育煌.(1.广东惠州市人民医院药剂科,惠州市516002;2.惠州大亚 制药股份有限公司,惠州市516001;3.惠阳妇幼保健院,惠州市516001) 中图分类号R927.11文献标识码A文章编号1001—0408(2006)10—0778—04 摘要目的:建立乳癖宁贴膏的质量控制方法.方法:采用薄层色谱法对乳癖宁贴膏中淫羊藿,土贝母,川楝子进行定性鉴别;采 用柱层析一高效液相色谱法对其中君药淫羊藿进行含量测定.结果:在薄层色谱中均能鉴别出淫羊藿,土贝母,川楝子;淫羊藿苷进 样量在0.428~g,2.568~g范围内与峰面积积分值线性关系良好(r:0.9998);平均加样回收率为94.57%(RSD=1.43%).结 论:本方法灵敏,准确,重现性好,可用于本品的质量控制. 关键词乳癖宁贴膏;薄层色谱法;柱层析一高效液相色谱法;淫羊藿;含量 StudyonQualityControlofRupiningStrapping YELixin,ZHANGShuping,LAIShupin(Dept.ofPharmacy,GuangdongHu izhouCityPeople’SHospital, Huizhou516002,China) CHENGangmei(HuizhouDayaPharmaceuticalManufactureCo.Ltd,Huizhou516001,China) CHENYuhuang(HuiyangMaternalandChildHealthHospital,Huizhou516001,China) ABSTRACTOBJECTIVE:Toestablishqualitycontrolmethodforrupiningstrapping.METHODS:ThequalitationofHerba Epimedii,RhizomaBolbostemmaeandfructustoosendaninrupiningstrappingwasconductedbyTLC.Theprincipaldrug— epimediumherbwasdeterminedbycolumnchromatography—HPLC.RES ULTS:HerbaEpimedii.RhizomaBolbostemmaeand fructustoosendancouldallbeidentifiedinTLC.Goodlinearcorrelationoficariinwasobservedwhenthesamplesizewas 0.428~g, 2.568~g(r=0.9998).Theaveragerecoverywas94.57%(RSD=1.43%).CONCLUS10N:Themethodissensi— tive,accurate,andreproducible.Itcanbeusedforthequalitycontrolofrupiningstripping. KEYWoRDSRupiningstrapping;TLC;Columnchromatography—HPLC; HerbaEpimedii;Contents .’? ?’…_??’_..’? ?’?__I.?’? ___? ?.__.__ ?.…._?_._..? ??? ‘ 取同一批样品6份,按”2.3”项下方法制备供试品溶液,并 按”2.10”项下方法测定,计算槲皮苷,异槲皮苷含量的RSD分 另0为0.61%,0.29%. 2.8加样回收率试验 准确量取已知含量的田基黄注射液6份,每份lml,分别准 确加入槲皮苷对照品,异槲皮苷对照品各0.1332,0.1662mg, 经微孔滤膜过滤,取续滤液,按”2.10”项下方法测定,计算回收 率,结果详见表1. 表1加样回收率试验结果 Tab1Resultsofrecoverytest 塑?量!堡2堡量!堡2旦垩!2主!!垦!生2 槲皮苷异槲皮苷槲皮苷异槲皮苷槲皮苷异槲皮苷槲皮苷异槲皮苷槲皮苷异槲皮苷 2.9最低检测量的确定 取”2.2”项下槲皮苷,异槲皮苷对照品溶液,各稀释100倍 至1.11,1.2g/ml,进样10l,依法测定,结果槲皮苷的最低 检测浓度为1.1l~g/ml,最低检测量为1.11×10a/,g(信噪比 S/N=3:1);异槲皮苷的最低检测浓度为1.2g/ml,最低检 ?副主任药师.研究方向:药剂学.电话:0752—2254283.E— mail:ylx51010@21cn.corn . 778.ChinaPharmacy2006Vo1.17No.10 .’??’ …_? ?’….??’….??’.…???._..? ?’…???’…_??’_. 测量为1.26×10一a/,g(信噪比S/N=3:1). 2.10样品含量测定 按”2.1”项下色谱条件,测定10批样品,以峰面积按外标 法计算样品中槲皮苷,异槲皮苷的含量,10批田基黄注射液样 品中槲皮苷平均含量为0.14mg/ml,最低含量为0.0380mg/ ml;异槲皮苷平均含量为0.06mg/ml,最低含量为0.O1101mg/ ml,结果详见表2. 表2样品含量测定结果 Tab2Resultsofsampleassaying 3讨论 HPLC法分离效果良好,线性,稳定性,重现性,回收率等 指标均符合含量测定的要求,因此采用HPLC法测定田基黄 注射液中槲皮苷,异槲皮苷含量,方法准确可靠,应用性强,可 为控制田基黄注射液的质量提供科学,合理,有效的手段. 参考文献 [1】卫生部药典委员会编.中华人民共和国药典(二部)[S】. 1977年版.北京:人民卫生出版社,1977:197. (收稿日期:2005—12—19修回日期:2006—03—16) 中国药房2006年第17卷第10期 乳腺增生症是一种妇科常见疾病,多见于30a,50a的中 年妇女,中医学称为乳癖,其发病率约为10%,是乳腺癌的易 患因素之一,故防治此症对防癌有重要意义.乳癖宁贴膏是由 淫羊藿,土贝母,川I楝子,柴胡,艾叶,天冬6味中药组方而成的 医院制剂,是我院为提高药物疗效,以乳增宁片作为基础方进 行剂型改革而研制成的中药经皮吸收制剂.为有效控制该药品 质量,笔者对乳癖宁贴膏的质量控制方法进行研究.其中,淫羊 藿为方中君药,因而建立其含量测定方法对于控制药品质量具 有可行性,而淫羊藿苷含量测定方法较多,有二阶导数光谱法, 薄层层析一库仑滴定法,薄层扫描法,高效液相色谱法等.笔者 采用柱层析一高效液相色谱法对其进行了含量测定,并采用薄 层色谱法对方中淫羊藿,土贝母,川楝子等药材进行定性鉴别, 为进一步控制该药品的质量提供科学依据. l仪器与试药 1.1仪器 高效液相色谱仪,包括Model500型紫外检测器(美国 Agilent公司);超声波清洗仪(华南超声仪器厂);层析缸 (20cm×10cm);层析柱(内径:10ram);三用紫外仪(上海 顾村光学仪器厂). 1.2试药 淫羊藿苷,土贝母苷甲对照品(均由中国药品生物制品检 定所提供);淫羊藿,土贝母,川I楝子等对照药材(均由惠州市人 民医院中药房提供,经鉴定符合《中国药典》规定);乳癖宁贴膏 (批号:040602,040620,040705)及阴性样品(均由惠州市人民 医院制剂室自制);硅胶G,硅胶H(青岛海洋化工厂);乙腈,甲 醇为色谱纯,水为重蒸馏水,其它试剂均为分析纯. 2方法与结果 2.1薄层色谱鉴别 2.1.1淫羊藿】:取本品,除去盖衬,刮取含药基质1g,用适 量硅藻土分散均匀,加入甲醇2Oral,超声处理30min,过滤,滤 液在水浴上蒸干,残渣加水10ml使之溶解,加入已处理好的聚 酰胺柱内(用水湿法装柱,5g,14目,3o目,内径:10ram),用水 洗脱至流出液无色后,再用甲醇100ml洗脱,收集甲醇洗脱液, 置于水浴上蒸干,加甲醇lml使之溶解,作为供试品溶液;再取 淫羊藿苷对照品,加甲醇制成浓度为0.5mg/ml的溶液,作为 对照品溶液;另取缺淫羊藿药材的阴性样品,按供试品溶液制 备方法制成阴性对照品溶液.按2000年版《中国药典》附录? B薄层色谱法试验,吸取上述3种溶液各10l,分别点样于同 一 以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上,以乙酸乙 酯一丁酮一甲酸一水(5:3:1:1)为展开剂,展开,取出,晾 干,喷以1%三氯化铝甲醇溶液,置于90?加热5rain.结果显 示,供试品色谱中,在与淫羊藿苷对照品色谱相应的位置上,显 相同的亮黄色斑点,而淫羊藿阴性对照品溶液在相对应位置上 不显色,表明该法可作为乳癖宁贴膏中淫羊藿的特征鉴别,色 谱详见图1. 2.1.2土贝母】:取本品,除去盖衬,刮取含药基质2g,用适 量硅藻土分散均匀,加入70%乙醇2Oral,置于水浴中加热回流 1h,过滤,滤液在水浴上蒸干,残渣加饱和碳酸氢钠水溶液 2Oral使之溶解,用乙酸乙酯萃取2次,每次10ml,分取有机层, 合并,在水浴上挥干,残渣加甲醇lml使之溶解,作为供试品溶 液;再取土贝母苷甲对照品,加甲醇制成浓度为ling/ml的溶 液,作为对照品溶液;另取缺土贝母药材的阴性样品,按供试品 中国药房2006年第17卷第1O期 图1淫羊藿薄层色谱 1.供试品;2.淫羊藿苷对照品;3.阴性对照品 Fig1TLCofHerbaEpimedii 1.testingsample;2.icariincontrolarticle;3.negativecontrolarticle 溶液制备方法制成阴性对照品溶液.按2000年版《中国药典》 附录?B薄层色谱法试验,吸取上述3种溶液各5l,分别点样 于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上,以氯 仿一醋酸乙酯一甲醇甲酸一水(12:3:8:2:2)为展开剂, 展开,取出,晾干,喷以醋酐一硫酸一乙醇(1:1:10)的混和 液,于llOT2加热至斑点清晰.结果显示,供试品色谱中,在与 土贝母苷甲对照品色谱相应的位置上,显相同的灰蓝色斑点, 而土贝母阴性对照品溶液在相同位置上不显色,表明该法可作 为乳癖宁贴膏中土贝母的特征鉴别,色谱详见图2. 图2土贝母薄层色谱 1.供试品;2.土贝母苷甲对照品;3.阴性对照品 Fig2TLCofRhizomaBolbostemmae 1.testingsample;2.tubeimosideAcontrolarticle;3.negativecontrol article 2.1.3川I楝子】:取本品,除去盖衬,刮取含药基质5g,用适 量硅藻土分散均匀,加入乙醇3Oral,置于水浴中加热回流1h, 过滤,滤液在水浴上蒸干,残渣加甲醇lml使之溶解,作为供试 品溶液;再取川楝子对照药材2g,加入乙醇3Oral,按供试品溶 液制备方法制成对照药材溶液;另取缺川楝子药材的阴性样 品,同供试品溶液制备法制成阴性对照品溶液.按2000年版 《中国药典》附录?B薄层色谱法试验,吸取上述3种溶液各 10”l,分别点样于同一硅胶G薄层板上,以苯一甲酸乙酯一甲 酸(6:3.5:0.5)为展开剂,上行展开至8cm,取出,晾干,置于 紫外灯下365nm波长处检视.结果显示,供试品色谱中,在与 川楝子对照药材色谱相应的位置上,显相同的蓝色荧光斑点, 而川楝子阴性对照品溶液在相同位置无斑点,表明该法可作为 乳癖宁贴膏中川楝子的特征鉴别,色谱详见图3. 2.2含量测定 2.2.1色谱条件:色谱柱为Cl8(200mm×4.6ram,5,um),流 速为0.8ml/min,柱温为室温,检测波长为270nm,流动相为乙 腈水(30:70),进样量为10>1,外标法定量.在选定的流动相 及色谱条件下,淫羊藿苷峰与前后杂峰分离良好,色谱详见图4. 2.2.2供试品溶液的制备:取本品,除去盖衬,刮取含药基质 ChinaPharmacy2006Vo1.17No.10’779’ ? 综述讲座? 胸腺肽1的制备及临床应用新进展 韩香,顾军(武警医学院化学教研室,天津市300162) 中图分类号R979.5文献标识码A文章编号1001—0408(2006)10—0781—03 1966年,Goldstein等首次从小牛胸腺提取了具有生物活 性的物质,命名为胸腺肽(胸腺素,Thymosin),1972年经改进 提纯方法制取了胸腺肽组分5(Thymosinfraction5,TF5). TF5较其它胸腺组分免疫活性强,但TF5是数十种多肽的混 合物,使得探讨其效果和作用机制很困难.1977年,Goldstein 等从TF5中进一步分离得到了单一多肽——胸腺肽a. (Thymosina.,简称Ta-,为含有28个氨基酸残基的酸性肽,其 活性较早先开发上市的TF5提高10倍,1000倍.Ta.作为免 疫调节剂,不仅免疫调节作用显着,而且具有TF5不能超越的 靶向作用”】. lTal的性质 1.1Ta.的理化性质 Ta-是酸性甚强的28肽,分子量为3108,等电点为4.2, N端被乙酰化,其结构非常独特与罕见,含有大量的Asp与 Glu,不含有His,Arg,Pro,Gly,Cys,Met,Tyr,Phe和Trp.分 子中有六对重复氨基酸残基,如Ala.一Ala,Ser.一Ser, Thr一Thr”,Lys一Lys,Val一Val.与Glu一Glu,其氨 基酸序列为: Ac—Ser一Asp—Ala—Ala—Val,Asp—Thr—Ser— Ser—Glu”一Ile—Thr—Thr—Lys—Asp一Leu—Lys— Glu—Lys—Lys一Glu—Val—Val—Glu—Glu一Ala— Glu—Asn—OH Ta耐酸,耐碱,耐热,用2mol/L盐酸或2mol/L氢氧化 钠或磷酸盐缓冲溶液100”(2水浴lh.Ta.仍具有活性】. 1.2TaI的活性检测 Ta-的活性检测方法有抗体免疫测定和生物活性测定2 种.免疫测定中有放射免疫学(RIA)和酶联免疫学(ELISA)0】 方法.由于Ta只有28肽,分子量仅为3108,需要与载体蛋白 连接以后才有免疫原性.在Ta-N末端添加一额外酪氨酸残 基,与牛血清白蛋白(BsA)或匙孔血蓝蛋白(KLH)载体蛋白相 连再去免疫老鼠等动物,获得了Ta.的单克隆抗体.以此为基 础,建立了Ta.的ELISA和RIA检测方法. Ta-的生物活性检测有下列方法:E玫瑰花实验法”】,巨 噬细胞移动抑制因子法(MIF),Lytl,2,3淋巴细胞表面标 记法,自然杀伤(NK)细胞活性法l,白介素及其受体诱导法.E 玫瑰花法的原理是基于Ta.可体外增加胸腺缺陷的病人外周 血中表达特定的绵羊红细胞受体的T淋巴细胞数目,从而有 更高的与绵羊红细胞发生凝集反应的百分比.MIF法的原理 是Ta.可以诱导外周血淋巴细胞合成更多的巨噬细胞移动抑 制因子,造成巨噬细胞的聚集,从而发挥免疫功能.Lytl,2, 3表面标记诱导法的原理是基于Ta.可以诱导来自骨髓的淋 巴细胞带上T细胞的表面标记. 2T伍l的临床应用 2.1Ta.的功能 Ta-作为一种免疫增强剂,临床上主要用于治疗免疫缺陷 和免疫受抑制的疾病】,如胸腺发育不全,重症感染,病毒性 肝炎等.用于肿瘤,可见大部分患者T淋巴细胞数目增多,改 善临床症状.当病人感染某些病毒如人类免疫缺陷病毒 (HIV),乙型肝炎病毒(HBV)或患有癌症以及经过放疗或化 疗后,其免疫系统往往会被逐渐抑制乃至破坏,进而不能发挥 对病毒或癌细胞的正常杀伤作用.Ta.可恢复T淋巴细胞的功 能并促进成熟T细胞的增殖,促进淋巴细胞在病原组织及癌 细胞周围的聚集,促进淋巴因子及淋巴因子受体的产生,这样 就大大增强了免疫细胞的作用,提高了对病毒和癌症的抵抗能 力.薛红安”.等观察了Ta.对慢性重型乙型肝炎患者的存活率 及肝功能的影响.将30例慢性重型乙型肝炎患者分为Ta.治 疗组(16例)和对照组(14例),观察患者治疗前,治疗中及随访 时每周的肝功能及凝血酶原活动度.结果证明,Ta.能显着提 高慢性重型乙型肝炎患者存活率,并能显着改善患者的肝功 能.程树群”等观察Ta.对原发性肝癌术后复发的影响.将57 例肝癌患者随机分为2组,对照组为手术切除组(38例),治疗 组为手术切除加术后Ta治疗(19例).结果,治疗组和对照组 液相色谱法测定乳癖宁贴膏中淫羊藿苷的含量来控制其内在 质量,能有效消除处方中其它成分对含量测定的干扰,且方法 灵敏,准确,符合定量要求,可为制订本品的质量提供科学 依据. 参考文献 [1】谢东,杨戒骄.乳增宁片中淫羊藿苷的薄层鉴别与含 量测定[J】.天津药学,2001,13(4):84. [2】谢志民,刘晓华,曹林林.中药土贝母的生药鉴定[J】.中 ?天津市自然科学基金资助项目(023612611) #讲师,硕士.研究方向:多肽药物化学.电话:022—60578046. E—mail:xianghan@263.net 中国药房2006年第17卷第10期 药材,1998,21(11):548. [3】陶涛,邢贞建,刘瑛.痛经丸中川楝子薄层鉴别方法 的研究[J】.广东药学,2004,14(2):11. [4】柴逸峰,李修禄.用反相液相色谱法测定淫羊藿及其制 剂中淫羊藿苷的含量研究[J】.药物分析杂志,1991,11 (3):207. [5】杨戒骄.柱层析一高效液相色谱法测定乳增宁片中淫羊 藿苷含量[J】.中国药房,2004,15(9):565. [6】杨松,靳宝峰.反相液相色谱法测定乳增宁片中淫羊 藿苷含量[J】.药物分析杂志,1995,15(增刊):105. (收稿日期:2005—05—30修回日期:2005—07—20) ChinaPharmacy2006Vo1.17No.10?781?