甲醛溶液(福尔马林)对小鼠遗传毒性的研究与探讨
甲醛溶液(福尔马林)对小鼠遗传毒性的研
究与探讨
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中国临床医菊研究杂志2008耳总第187期
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甲醛溶液(福尔马林)对小鼠遗传毒性的研究与探讨
广东药学院生物教研室(510006)李白霓陈伟强魏凤香毛建文李红枝
摘要本文采用观察小鼠骨髓细胞中期分裂相和间期细胞微核的方法,以及骨髓细
胞DNA合成变化的情况,对急性,亚急性福尔马林
中毒的小鼠在遗传物质方面的改变进行了探讨.其结果显示福尔马林可导致小鼠
染色体畸变,微核率升高,以及细胞DNA合成的抑
制,与对照组的差别有显着和非常显着的意义
关键词福尔马林遗传物质损伤
AbstractChangesofgeneticmaterialofmouseofacute,thesubacuteFormalinpoisonedarest
udied.Mmousemarrowcellchromosomekaryotypeof metaphaseofmeiosis,andthevarietyofmarrowcellDNAsynthesizeareobserved.Methodof
MicronucleusTestofmousecellisused.Experimentsshowed thatFormalinmaycausethechromosomemutation,MicronucleusrategouDIandtherepress
ofcellDNAsynthesize.Theresultshaveremarkableandthe extremelyremarkablesignificancewithcontrolgroup'sdifference KeyWOrdsFormalingeneticmaterialdamage
福尔马林(Formalin)是甲醛的40%的水溶液,是一种刺激性
液体.它在医疗,卫生行业中用途极广.而它对有机体多个系统
都具有毒性作用.且有致癌和致突变的可能性.本文采用观察小
鼠骨髓细胞中期分裂相和间期细胞微核的方法,以及骨髓细胞
DNA合成变化的情况,分别对急性,亚急性福尔马林中毒的小鼠
在遗传物质方面的改变进行了探讨.
1材料与方法福尔马林,以36%的甲醛水溶液稀释后代替,分
析纯,由广州化学试剂厂提供.
1.1实验动物纯种BALB/C小鼠,体重18—22g,雌雄各半,实
验前自行喂养七天.
1.2染毒方法受试物福尔马林,以36%的甲醛水溶液用蒸馏
水稀释后,配成所需浓度.染毒方法是给小鼠腹腔注射.分别以
一
次注射和五次注射作为急性和亚急性中毒的模型.每次实验
均设等量溶剂组作为空白对照.
1.3小鼠骨髓细胞DAN合成抑制试验小鼠于染毒后24小时
处死,处死前腹腔注射25uci的3H-TdR作为标记物.分离股骨,
取骨髓,用细胞计数器计算细胞数,以生理盐水稀释细胞至
500"104个,毫升.将细胞悬液分别置于5个试管中,并在另一
试管中加人生理盐水作为空白对照,各个试管中加蒸馏水破坏
细胞,然后滴于9999型玻璃纤维滤纸上负压抽滤.加5%的三氯
醋酸3毫升沉淀蛋白质,暴露DNA.用无水乙醇3毫升洗涤脱 水.将已暴露DAN的纸片置于红外线灯下80.C,15分钟烘干, 冷却,移人装有5毫升闪烁液(二甲苯1000毫升,PPO7g. POPOP0.5g)的闪烁杯中.在FJ一2101型双道液体闪烁计数器中 测量.
1.3微核试验小鼠于染毒后24小时处死,取骨髓细胞悬液, 离心10分钟(1000转,分).去掉上清液,保留少量细胞悬液涂 片,晾干,用甲醇固定5分钟,Giemsa染色,冲洗,晾干,在显微镜 下观察,并计数微核率.
1.4小鼠骨髓细胞染色体标本的制备及观察小鼠于染毒后24 小时处死,处死前4小时给小鼠腹腔注射秋水仙素10mg%, 0.3—0.4毫升.取骨髓细胞,加人0.075M的氯化钾低渗30分钟. 用甲醇冰醋酸(3:1)固定三次,每次25分钟.离心后保留少量细 胞悬液,滴片,晾干,Giemsa染色,冲洗,晾干,在显微镜下观察. 每份标本计数500个中期分裂相,统计学分析用卡方检验. 2结果
2.1福尔马林对小鼠骨髓细胞DNA合成的影响急性和亚急 性福尔马林中毒的小鼠骨髓细胞DNA合成较对照组明显降低.
中国赂床医药研究杂志2008年总第187期
明福尔马林具有抑制DNA合成的作用.统计学检验与对照组 的差别有非常显着的意义.各剂量组之间也呈现明显的剂量反 应关系.(表1,图1.)
2-2福尔马林致小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率的变化在急性 福尔马林中毒的小鼠中,各剂量组的骨髓嗜多染红细胞的微核 率都较对照组为高,差别具有显着和非常显着的意义.亚急性福 尔马林中毒的小鼠,骨髓嗜多染红细胞的微核率也较对照组为 高.差别具有显着和非常显着的意义(表2,图2.) 2.3福尔马林致小鼠骨髓细胞染色体畸变的效应表3列出了
福尔马林诱发小鼠骨髓细胞染色体畸变效应的情况.染毒组染 色体畸变率都较对照组为高.另外,在染色体畸变的类型中,以 染色单体型畸变所占比例较大.(表3,图3.图4,5,6.) 表1福尔马林对小鼠骨髓细胞DNA合成抑制的效应 注:每次实验做2个平行样品,每次实验受试小鼠为3个. 图1.福尔马椭
表2福尔马林致小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率变化的效应 .'
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注:每次实验做2个平行样品,受试小鼠为4个. ,
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图2.福尔马林引起q
表3福尔马林致小鼠骨髓细胞染色体畸变的效应 5
}P<0.05(与对照组比较差别具有显着意义).}P<0.01(与对 照组比较差别具有非常显着意义).注:每次实验做2个平行样品, 受试小鼠为4个.
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图3.福尔马林引起小鼠染色体-奇变率的剂量反应关系 3讨论及
染色体畸变分析是医学上沿用已久的细胞遗传 学方法.染色体畸变与基因突变,人类遗传性疾病和肿瘤的发生 关系密切.
微核亦是染色体异常的现象,只是微核出现在细胞分裂间 期.当其它正常的染色体在分裂后期分别形成子细胞核时,异常 的染色体断片会落后独立形成微核,在光学显微镜下即可观察 到.嗜多染红细胞的特点是,在其完成有丝分裂后12小时即将 主核排出,但诱导产生的微核却被保留在细胞中,这样便给微核 计数带来了很大的方便.Jenssen和Ramel根据142种化合物的 试验结果评价了微核试验对化合物致癌性的预报价值,并与115 种化合物的Ames试验结果进行了比较,发现这种方法的预报值 可达90%.
脱氧胸腺嘧啶核苷(TdR)是DNA合成的原料,测定 3H-TdR掺人组织细胞的放射量,可衡量DAN合成情况.诱变物 和致癌物都能损伤DNA,而哺乳动物细胞DNA损伤的早期反应 是DNA合成抑制.因此,DNA合成抑制试验已成为一种测试诱 变物和致癌物的快速筛选方法.
解剖教室是用来解剖人体标本的实验场所,用作防腐剂的 福尔马林是质量浓度为4o%的甲醛水溶液.在标本的保存,搬运 和解剖过程中,福尔马林挥发出大量的甲醛气体.目前人们认为 甲醛的毒性作用主要有三个方面:1)刺激性:甲醛可以引起眼, 鼻,上呼吸道刺激症状及皮肤病;2)致损性:甲醛可致人体许多器 官受损害,如神经系统,呼吸系统,心血管系统,内分泌系统,肝 脏等;3)致癌性:动物试验证实了甲醛可致大鼠鼻腔肿瘤之后,国
际癌症研究中,~(IARC)将甲醛列入可疑致癌物.在本实验中,福
尔马林可导致染色体畸变,微核率升高,以及细胞DNA合成的
抑制,其差别与对照组有显着和非常显着的意义,这结果可在病
因上提供参考.
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6
图4:正常小鼠染色体图5:染色单体裂隙图6:染色体断裂
基金项目:广州市科技
项目(20o5J1一C0291)
中国临床医药研究杂志2008年总第187期
参考文献
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平消栓对H荷瘤小鼠TGF13表达及抑瘤作用的影响
陕西省咸阳市陕西中医学F:~(712046)马喜迎孔平孝
摘要目的:研究中药平消栓在小鼠体内抑瘤作用及对TGF13表达的影响变化.方法:建立小鼠肝癌实体瘤模型,分别给予平消栓
高,中,低剂量及5-FU腹腔注射,第15天处死小鼠,测定肿瘤生长抑制率脾脏(胸腺)指数:采用免疫组化法测定TGFp的表达情况.
结果:高,中,低剂量平消栓组及5一FU抑瘤率分别为(37%,34%,26%,53%),TGFB
在肝癌组织中呈高表达状态,其阳性表达率明
显高于正常肝组织及中剂量组,差异存在显着性(P<O.05).结论:平消栓对小鼠肿瘤的发生有较好的抑制作用.
关键词平消栓荷瘤小鼠抑瘤率TGFB
AbstractObjective:ToinvestigatetheeffectsofPingXiaoShuanontheexpressionofTGFI~,
andanti—tumorefficacyinvivo.Melhods:Thedifferent
doseofPingXiaoShuanand5-FUweregiventotumor-bearingmodelsmiceintreatmentgroup.Theexperimentalsolutionwasgivetomicefor15days.
Thetumorgrowthinhibitoryrateandthespleen(chest)dirtyindexwerecalculated;Immunohistochemicaltechniquewasappliedtoinvestigatethechangesin theexpressionofTGFI~1.Results:ThedifferentdoseofPingXiaoShuanand5-FUanti-tumorrateswere(37%,34%,26%,53%).Thepositiveratesof
TGFI~1weresignificantlyhigherinthecancerthansuperficialinnormallivertissueandinthe
dosegroup(P<o.o5).Conclusion:Theanti-tumoreffectof PingXiaoshuanmaybebettertothemicetumor.TheexpressionofTGFI~1wasinhibitedbyPingXiaoShuan.
KeywordsPingXiaoShuantumor-bearingmiceinhibitoryrateTGFB1 人治疗的复方制剂,由中药黄芪,三七,没药等提纯而成,具
有解毒抗癌,活血止痛,保护正常肝细胞,低毒等功效.实验研究
证实,黄芪抗肿瘤活性成分主要是黄芪多糖与黄芪甲苷,可通过
提高机体免疫功能达到抗肿瘤作用,并具有保肝,抗菌等功效
?;三七有直接抑制和破坏癌细胞,保肝及人参样作用;没药
体外实验有抑制肿瘤细胞的作用,并可提高免疫功能,促进淋巴
母细胞的转化,增强网状内皮系统功能【l】.本实验采用H肝癌实
体瘤模型,分析平消栓的抑瘤效果以及对TGF13,表达的影响的
情况.
1材料与方法
1.1实验动物与瘤株实验用健康ICR封闭群小鼠60只,体重
f20?2)g,雌性,动物合格证号:医动字第08—004.由西安交通大
学医学院实验动物中心提供,小鼠H翌肝癌腹水瘤株由第四军医
大学实验动物中心提供
1.2药品及试剂中药平消栓由陕西中医学院附属医院制剂研
究中心提供,每克含生药7.32g,5一FUO.25g/支,由上海旭东海
普药业有限公司生产,以生理盐水配制,储存4~C保存备用.
1.3造模,分组及给药将6o只健康ICR封闭群小鼠随机分为 6组:空白对照组(A组),荷瘤组(B组),5-FU组(c组),平消栓 大剂量组(D组),中剂量组(E组),小剂量组(F组)每组10只, 清洁级条件下分笼饲养于层流架内.建立荷瘤实体瘤模型: 将已接种7天生长良好的荷瘤H腹水瘤的腹水与生理盐水按 1:2的比例进行稀释,并用血球计数板计数细胞【(2—3×107 个/mU]用锥虫蓝溶液染色进行活细胞计数,活细胞率>95%. 在小鼠右腋部皮下注射O.2IIll腹水稀释液,建立成实体瘤模型.
,A,B组生理盐水O.2rnl腹腔注射,c组25mg/kg,0.2 接种24h后
腹腔注射,D,E,F组分别以0.5g/kg,1.0g/kg,2.0g/kg,0.2ml腹 腔注射'A,B,D,E,F各组用药14天,C组连续用药5天,第l5 天脱臼处死小鼠,解剖剥离瘤块称重计算抑瘤率,剥取脾脏胸腺 计算脏器指数,10%甲醛固定瘤组织,石蜡包埋,切片.