国产甘油三酯和高密度脂蛋白胆固醇检测试剂质量的调查和评价

国产甘油三酯和高密度脂蛋白胆固醇检测试剂质量的调查和评价 国产甘油三酯和高密度脂蛋白胆固醇检测 试剂质量的调查和评价 324LabeledImmunoassavs&ClinMed.Oct.2010,Vo1.17.No.5 国产甘油三酯和高密度脂蛋白胆固醇 检测试剂质量的调查和评价 王军,杨宗兵,续勇,张宏 (北京市医疗器械检验所,北京100120) 摘要:为了解国产TG检测试剂和HDL-C检测试剂的批内精密度和准确度,对国内生产的61个TG检测试剂和4_4个 HDL—C检测试剂,分别与厂家指定的校准品,质控品和日立7180全自动生化仪组成检测系统,用新鲜混合血清和国 家物质对各试剂进行批内精密度,准确度评价.结果表明,61个TG试剂的CV均<5%,其中16个试剂的偏倚<? 5%,48个试剂的总误差<15%;44个HDL—C试剂的CV均<4%,其中11个试剂的偏倚<?5%,22个试剂的总误差< 13%.国产TG检测试剂和HDL—C检测试剂的批内精密度可以接受,然而在检测同一个样品时,可比性差,国产TG和 HDL?C试剂整体上还无法做到准确可比.因此,国内体外诊断试剂的生产厂家应利用已获公认的参考测量系统,以建立 检测系统的溯源性. 关键词:甘油三酯检测试剂;高密度脂蛋白胆固醇检测试剂;批内精密度;准确度;溯源;参考测量系统 中图分类号:R446.6文献标识码:A文章编号:1006.1703(2010)05-0324-04 EvaluationoftheQualityofHome-madeTriglycerideand HDL-cholesterolDetectionReagents WANGJun,YANGZong—bing,XUYong,ZHANGHong (Beijing/nstituteofMedica1DeviceTesting,Beijing100120,China) Abstract:Toevaluatetheanalyticalperformanceofhome— madeTriglyceride(TG)andHDL—cholesterol(HDL- C)detectionreagents,allthereagentswiththecalibratorsandcontrolswereperformedfollow ingmanufactures' instructiononaHitachi7180automaticchemistryanalyzertoanalysistherepeatabilityandac curacy.There— suhsshowedthatallTGreagentsdemonstratedCV<5%.thebiasof16Reagents<? 5%.andthetotalerror of48Reagents<15%.AllHDL— cholesterolreagentsdemonstratedCV<4%.thebiasof11reagents<? 5%.andthetotalerrorof22reagents<13%.TheTGandHDL-Chome— madereagentshavebeenshowntobe reasonablyprecise,butwithpoorcomparable.Thereforemanufacturesofinvitrodiagnosticr eagentsshouldap— plyreferencemeasurementsystemsandconstructthetraceabilityinclinicalmedicine. Keywords:Triglyceridedetectionreagents;HDL— cholesteroldetectionreagents;Repeatability;Accura- cy;Traceability;Referencemeasurementsystem 美国国家胆固醇教育(NCEP)成人治疗方 案第3版(ATP11I)指出,代谢综合征(MetSyn)影 响着大约25%的20岁以上和45%的50岁以上的美 国人的健康.中国成人血脂异常防治指南也谈及 代谢综合征在我国十分常见.据中华医学会糖尿病 学会调查显示,目前中国20岁以上的人群中,代 谢综合征患病率为10%一14%,即每6至7个人中 就有一个.脂蛋白血症是代谢综合征的一个临床特 征,其特点是患者血液中甘油三酯(TG)水平升高和 高密度脂蛋白胆固醇(HDL—C)水平下降.因此TG 和HDL.C的准确测定对于高脂蛋白血症的诊断和 治疗非常关键j.目前国内生产TG和HDL-C检测 试剂的厂家有一百余家,这些试剂在临床实验室被 广泛应用.批内精密度和准确性是评价体外诊断试 剂质量的重要指标,本研究对国产的61个TG检测 试剂和44个HDL.C检测试剂的批内精密度,准确度 进行了调查和评价. 材料与方法 1仪器和试剂 TG检测试剂来自于61个国产厂家的开放试 收稿日期:2010-06-02;修回日期:2010-08—16 作者简介:王军(1975一),女,研究生,师.Tel:010—62354086;E— mail:sophiewangjun@yahoo.con.cn 剂,所用方法均为酶法(GPO—PAP法,不去游离甘 油),采用厂家推荐或指定的校准品和质控品,与日 立7180型全自动生化分析仪组合成61种检测系 统,代号为TG1-61.HDL—C检测试剂来自于44个 国产厂家的开放试剂,所用方法均为匀相法,其中有 18家是聚乙二醇修饰酶法(代号HDL1—18),21家是 选择性抑制法(HDL19-39),5家是过氧化氢酶法(代 号HD40-44),采用厂家推荐或指定的校准品和质控 品,与日立7180型全自动生化分析仪组合成44种 检测系统. 2方法 2.1血清样品收集新鲜正常人血清,要求外 观澄清,无溶血,黄疸及脂血,共收集10份,每份 2mL,将这10个标本混合制成新鲜混合血清1.采 用同样的方法获得新鲜混合血清2.两支血清均于 一 20~C冰箱储存,使用时从冰箱取出,室温复苏. 2.2标准物质用卫生部北京老年医学研究 所研制的标准物质GBW09147血清胆固醇,总甘油, 游离甘油和甘油三酯,基体为冰冻人血清,一20?冰 箱储存,使用时从冰箱取出,室温复苏. 2.3批内精密度评价方法在日立7180型全 自动生化分析仪上,将61个厂家的TG检测试剂和 44个厂家的HDL-C检测试剂,采用厂家推荐或指定 的校准品校准后,分别测试2O次混合血清1和2,计 算测试结果的均值,标准差(s). 2.4准确度评价方法在日立7180型全自动 生化分析仪上,将61个厂家的TG检测试剂,采用厂 家推荐或指定的校准品校准后,测试标准物质 GBW09147,连续测试3次,计算均值.在日立7180 型全自动生化分析仪上,将44个厂家的HDL.C检测 试剂,采用厂家推荐或指定的校准品校准后,测试10 次混合血清2,计算均值. 2.5数理统计用变异系数(CV,%)来表示 批内精密度的大小,每个试剂测试结果的标准差与 均值的百分比即为变异系数.用偏倚(bias)来评估 准确度,每个试剂的测试结果的均值与标准物质的 标称值之差再与标称值进行比较可得到偏倚.测试 结果与真值的差异是随机误差和系统误差的总和, 即总误差(TE),TE=1.96s+『biasf(95%允许误 差限). 结果 1TG检测试剂批内精密度和准确度检测结果 TG检测试剂批内精密度和准确度结果见图1. 所有检测TG试剂均测试混合血清1,得到的CV最 325 大值为3.5%,最小值为0.4%.所有TG检测试剂 测试国家标准物质GBW09147,标准物质的标称值 是1.275mmol/L,将每个试剂的测试结果与标准物 质的标称值进行比较,计算偏倚(bias).从图1可看 出,结果较为分散,最大的正偏倚达到27.8%,最大 负偏倚为一29.7%."中国成人血脂异常防治指南" 和美国"国家胆固醇教育计划"要求TG测定可接受 的标准为:CV<5%,偏倚<4-5%,总误差<15%. 按照该标准,本次评估的所有TG试剂的CV均符合 要求,而偏倚只有l6个厂家的试剂符合要求,占总 数的26%,总误差有48个厂家的试剂符合要求,占 总数的79%. Bias(%) 图1TG试剂批内精密度和准确度结果 各TG检测试剂均采用厂家推荐或指定的校准 品校准检测系统后,再用混合血清1对其评价.将 所有测试结果进行排序,计算中位数,中位数为 1.660mmol/L,将每个试剂的测试结果与中位数比 较,计算偏倚(bias).结果见图2. . ?? :.. ... ' .. ? . ? . ?... ?' .. ??? . ..... ????'? ..? ?? ' . '..?.?'一 ? '' ??? 试剂编号 图2TG试剂测试混合血清1的准确度结果 61个试剂的结果中,最大正偏倚为22.1%,最 大负偏倚为一18.9%,若将<4-5%作为可接受限的 话,只有24个厂家的试剂符合要求,占总数的39%. 2HDL—C试剂批内精密度和准确度检测结果 HDL-C试剂批内精密度和准确度结果见图3. 所有HDL-C检测试剂均测试混合血清2,CV最 大值为2.7%,最小值为0.4%.由于没有HDL.C的 国家标准物质,因此将所有HDL.C检测试剂均测试 同一份样品即混合血清2,将每个试剂的测试结果与 %晚%% 加m5Om:2? 一 326 9 8' 71 誊;t 弓一 3. 2u;.. l秘....:. 0{,…1l一……w…一—T,v… l02O30405O6O7080 Bias(%) 图3HDL—C试剂批内精密度和准确度结果 所有结果的中位数进行比较,计算偏倚.从图3可看 &ClinMed.Oct.2010.Vo1.17.No.5 出,结果较为分散,最大的正偏倚达到77.3%,最大 负偏倚为一30.0%."中国成人血脂异常防治指南" 和美国"国家胆固醇教育计划"要求HDL.C测定可 接受的标准为:CV<4%,偏倚<?5%,总误差< 13%.按照该标准,本次评估的所有HDLC检测试 剂的CV均符合要求,而偏倚只有11个厂家的试剂 符合要求,占总数的25%,总误差有22个厂家的试 剂符合要求,占总数的50%. 对HDL—C检测试剂按方法学分组进行统计,计 算各自的中位数,最大正偏倚,最大负偏倚,结果见 下表. 表HDL—C试剂按方法学分组结果 方法学相同的不同厂家的试剂,对同一样品的 测试结果差别也较大.以聚乙二醇修饰酶法的 HDL.C检测试剂为例,与中位数比较,最大正偏倚为 75.4%,最大负偏倚为一21.6%,偏倚在?5%范围 内的试剂比例为39%. 讨论 临床检验结果准确,具有跨时空的可比性,是防 病治病的需要,也一直是检验医学界的工作目标. 血脂异常是心血管病的重要危险因素,因此血脂检 测是一类重要临床检验项目,对其准确测定的意义 就更加显着.2006年,卫生部临检中心在北京7家 临床实验室对HDL—C做了调查,7家实验室测量同 一 份标本,'狈0量最低值为1.05mmol/L,最高值为1. 58mmol/L,与中位数的偏差最高达到28%,结果问 的CV达到15%.本研究对61个国产厂家的TG试 剂和44个国产厂家的HDL—C试剂进行了调查和评 价,调查样本数量占现有厂家数量的近50%.结果 表明,所有试剂的批内精密度可以接受,然而在检测 同一个样品时,结果分散,差别大,可比性差. 提高检验结果准确性和可比性已经是国际共 识,关键是建立和保证检验量值的溯源性,开展量值 溯源工作的基础是建立参考测量系统,包括参考测 量方法,参考物质和参考测量实验室.血脂测定 项目可能是I临床检验领域标准化工作开展历史最 长,影响最为广泛,成效最显着的一类检验项目.美 国疾病控制及预防中心从1957年就开始血脂标准 化研究及标准化计划建立和实施工作.迄今为 止,检验医学溯源联合委员会(JCTLM)已经公布了 血脂测定项目的参考测量方法,参考测量程序和参 考测量实验室.我国临床检验参考测量系统的研 究在近年来得到较快发展,卫生部北京医院老年医 学研究所从1990年起开始研究血脂测定的标准化 工作,正在建立血脂测定的参考物质和参考方法,目 前有些项目已取得明显进展"J. 目前检验医学普遍使用商品化的试剂,检验医 学质量的主要责任者是检验系统(仪器,试剂)的制 造商和使用者(如临床实验室).制造商应建立检验 系统的溯源性,保证其提供的仪器和(或)试剂给出 结果的准确性?引.从本研究结果看,国产血脂试剂 整体上还无法做到准确可比.究其原因有两个:一 是因为在临床检验领域,溯源性相对是比较新的概 念.溯源性用于临床检验结果质量的描述并开始受 到重视,主要始于1998年欧盟签署的并于2003年 生效的关于体外诊断器具的指令(Directive98/79/ EC)133.该指令的一项关键内容是要求体外诊断器 具的校准物质和/或质控物质定值的溯源性必须通 过已有的高一级的参考方法和/或参考物质予以保 证.欧洲指令是法律文件,生效后有关各方必须执 行.为配合该欧洲指令的实施,国际标准化组织 (ISO)于1999年起草了5个相关标准,其中与生产 厂家关系比较密切的是ISO17511"体外诊断医疗器 械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的 计量学溯源性"lJ和ISO/DIS18153"体外诊断医疗 器械生物样品中量的测量校准品和控制物质中酶 催化浓度赋值的计量学溯源性"1,我们国家已将 这些标准现转化为国家标准或行业标准.目前国内 标记免疫分析与临床2010年l0月第17卷第5期 生产企业虽然接受了这个概念,但对溯源的具体过 程和途径还比较陌生,缺乏相关的经验,虽然已有一 些国家标准物质,但企业对其利用率还是相当低. 2008年北京市医疗器械检验所对北京市l2家生化 试剂生产商进行了调查,12家生产商中只有7家表 示在产品开发阶段,就会主动考虑到要溯源到已有 的参考物质或参考方法,有4家表示有这个意识,但 碍于现实的困难而没有执行,有1家表示无此意识. 二是目前已有的或正在建设的参考测量系统大部分 是临床实验室,企业,科研院所在国家和地方科研基 金支持下建立的,由于缺乏整体规划和统一布局,各 类资源基本上成为部门,单位或课题组所有,尚不能 为体外诊断试剂制造商提供服务. 因此,对于例如血脂测定类已有国际公布的参 考测量系统的项目,一方面要对生产企业进行量值 溯源有关标准,技术文件,进展情况以及参考测量系 统最新信息等内容的宣讲和培训,通过各种方式促 进和要求体外诊断试剂制造商应用已获公认的参考 测量系统,将参考物质,参考测量程序的准确度水平 传递到产品,最终保证临床检验结果准确,可靠;另 一 方面要整合现有的参考测量实验室,建立共享机 制和开放模式,促进参考测量实验室为体外诊断产 品制造商提供参考测量服务,只有上述两方面相结 合才能推动临床检验量值溯源工作的进展. 参考文献: [1]ExpeaPanelonDetection,Evaluation,andTreatmentofHish BloodCholesterolinAdults(AdultTreatmentPanelIn).Executive SummaryoftheThirdRepo~oftheNationalCholesterolEducation Program(NCEP)[J].JAMA,2001,285:2486-2497. 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