血清载脂蛋白B检测操作规程

血清载脂蛋白B检测操作 1. 检测原理 APO A-1与特异的抗血清反应形成不溶性的复合物，可在340nm测定该不溶性复合物的浊度。通过测定品，建立一个吸光度对APO A-1浓度的标准曲线就可以测定出样品中的APO A-1浓度。 2(标本采集与处理 2.1 受检者的准备: 病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。妊娠后期各项血脂都会增高，应在产后或中哺乳后3个月检验才能反应其基本血脂水平。注意有无应用影响血脂的药物，如降血脂药、避孕药等。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为血脂水平有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验，应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。 2.2 静脉采血: 除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。 2.3 抗凝剂: 血浆使用EDTANa2(1mg/mL)作为抗凝剂。 2.4 标本处理: 血标本室温放置30min,45min后离心分离血清或血浆，在两小时内 检测完毕;如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8?保存。 3(试剂 3.1 试剂: 本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司APOA1试剂盒，为液体双试剂，各组分如下: 3.2:校准血清 使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。 校准频次: 空白定标:每日需做试剂空白定标。 全点定标:试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。 3.3 试剂与校准血清的稳定性: 原包装试剂储存在2-8?至标签所示失效日期。试剂开瓶后，在仪器中至少可保存30天。 试剂储存在18-22?稳定28天，试剂应避免污染。试剂R1颜色为无色，试剂R2颜色为无色至浅黄色，当试剂变色，按照试剂失效处理。 项血脂类标准液或APOA/B标准液在2-8?储存至标签所示失效日期，复溶后-20?保存，可稳定一个月，2-8?储存可稳定一周，参见校准血清。 4(仪器 KONELAB 30型号仪器。 性能:波长340nm，仪器测定吸光度的灵敏度应达到0.001ABS以上。 5(操作 样品为血清。本法为终点法。参数见后附，附录A。 试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。 6(计算 ?A测定 C = ———— × C0 ?A标准 式中:c—— 测定血清载脂蛋白A1浓度，g/L; ?A测定—— 标本管吸光度; ?A标准—— 标准管吸光度; CO—— 校准血清中载脂蛋白浓度，g /L; ?A ,A2,A1 7(操作性能 7.1 精密度: 批内CV< 1.78，批间CV< 3.65。 7.2 准确度: 检测结果的相对不准确度??10%。 7.3 灵敏度: 载脂蛋白A1浓度为:1.1g/L时，浊度吸光度A340nm约1.151~1.256。 7.4 可范围: 血清与试剂用量之比为2:260:65时，测定上限为2.4g/L。 7.5 特异性: 测量值在给定值的90%-110,范围内。 7.6 干扰: 内源性干扰物溶血为1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸300mg/ml对测试结果无明显影响。 8(参考值 1.2-1.8 g/L 9(临床意义 载脂蛋白A1 测定试剂盒用于定量测定血清中载脂蛋白A1的含量。 ApoA可分为ApoA?，A?, A?。ApoA?和A?大部分分布在HDL中，是HDL的主要载脂蛋白。 ApoA?主要存在于HDL中，在HDL3中ApoA?占载脂蛋白的65,，在HDL2中ApoA?占载脂蛋白的62,，在CM、VLDL和LDL中也有少量存在。血浆中呈现β迁移率的一种β-HDL，其内80,为ApoA?。 ApoA?的生理功能有:?组成载脂蛋白并维持其结构的稳定性与完整性。实验明，纯化的ApoA?在水溶液中可以自发地和脂类结合。用CNBr法将ApoA?裂解成四个肽段，发现仅有羧基末端的肽段可自发和磷脂结合。后来进一步确认这一段是ApoA?224-242段，这一段既可维持双性螺旋的结构，又可以维持和脂质结合所具备的疏水性。?ApoA?可以激活卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)的活性。已经证实，ApoA?是通过激活LCAT，再催化胆固醇酯化。ApoA?肽段?(肽段116-151)是激活作用的中心。?ApoA?可作为HDL受体的配体，含ApoA?脂蛋白可以和转铁蛋白及铜 蓝蛋白形成大分子复合物以运输铁和铜离子。 载脂蛋白A1是抗动脉搏粥样硬化的指标，检测血清中载脂蛋白的主要用于诊断冠心病。 附录A: 参数