小鼠免疫球蛋白E（IgE）ELISA试剂盒说明书

小鼠免疫球蛋白E（IgE）ELISA试剂盒 小鼠免疫球蛋白E(IgE)ELISA试剂盒说明书标本要求 1(标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20?保存，但应避免反复冻融 2(不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 操作步骤 1. 品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图在小试管中进行稀释。 2000ng/ml 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液 1000ng/ml 4 号标准品150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 500ng/ml 3 号标准品150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 250ng/ml 2 号标准品150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 125ng/ml 1 号标准品150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 2. 加样:分别设空白孔 (空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl(样品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 温育:用封板膜封板后置 37?温育 30 分钟。 4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用 5. 洗涤:小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。 6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。 。 7. 温育:操作同 3 8. 洗涤:操作同 5。 9. 显色:每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37?避光显色10 分钟. 10. 终止:每孔加终止液 50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11. 测定:以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。 操作程序总结: 计算 以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 1(试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2(浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3(各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4( 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。 5( 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6(底物请避光保存。 7(严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8(所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9(本试剂不同批号组分不得混用。 小鼠免疫球蛋白E(IgE)ELISA试剂盒说明书 保存条件及有效期 1(试剂盒保存:;2-8?。 2(有效期:6 个月