【doc】醋酸棉酚,GnRH—A等药物对人子宫内膜细胞雌,孕激素受体的影响

【doc】醋酸棉酚,GnRH—A等药物对人子宫内膜细胞雌,孕激素受体的影响 醋酸棉酚,GnRH—A等药物对人子宫内膜 细胞雌,孕激素受体的影响 7,-辱5 ? 352?1994年第H卷第6 醋酸棉酚,GnRH—A等药物对人子宫内膜 细胞雌,孕激素受体的影响 浙江医科大学妇产科教研室(杭州310006)黄荷风王曼,) /I——L一?7'foU /.}内容提要本研究观察了10M醋酸棉酚,孕酮,丹那唑及促性腺激素释放激素类 . 似物(GnRH—A)作用离体人子宫内膜细胞后,其细胞浆雌:醇受体(R),孕酮受体(PR)结 合容量的变化.发现醋酸棉酚和孕酮使E2R,PR两者结合容量降低,丹那唑仅使PR结合 容量降低,GnRH—A对E2R,PR结合容量均无抑制作用.结果表明,除GnRH—A外,其他 三药通过受体调节途径影响子宫内膜细胞. 关键词人子宫内膜受体醋酸棉酚警醪丹那唑促性腺激素释放激素类似物 . . , 性激素类药磊落位症(简称长成单层,换无血清培养基,随机分5组,每 异位症)有效,但异位症药物治疗的作用机理组样本均大于3.4个实验组分别加入1OM 至今尚未完全清楚,本实验采用DCC法,观醋酸棉酚,1OM孕酮,1OM丹那唑和 察了醋酸棉酚,孕酮,丹那唑及促性腺激素释1OMGnRH—A,继续孵育24h.对照组不 放激素类似物(GonadotropinReleasing加任何药物.将药物作用24h细胞用0.02% HormoneAgonist,GnRH—A)4种药物作用EDTA消化制成细胞悬液,经1000r/min离 人离体子宫内膜细胞后,其E2R,PR结合容心10min收集细胞.冰浴下使用Polyton匀 量的改变,并以孕酮为对照比较其他药物浆器制成细胞匀浆.在0?条件下15000r/ 的作用途径和作用方式.min离心lh,取上清液即为胞浆液.胞浆ER, 材料与方法~ o4 ?条 000 件 r/茎一 ,对象经腹部手术确诊的盆腔子宫内心10min,吸取上清液200l加闪烁液6ml 膜异位症患者.年龄26,38岁,平均31.8岁;过夜,置贝克曼(Backman)液体闪烁计数器 无全身内分泌疾病,术前3个月内未行内分泌中测cpm.蛋白质测定采用Lowary氏法. 等药物治疗.取材时间为月经第7,l4天.子实验结果采用方差分析和Newman 宫截除后,立即剖官刮取官体内膜组织.一Keuls法作统计分析.药效关系分析采用直 二,试剂制备(1)PRMI1640培养基线相关回归法. (日本制药株式会社),内加1O%小牛血清,? 青霉素100u/ml,链霉素100g/ml.(2)一一 TEGD(M0)缓冲液:10mMTris—HC1,14种药物对人子官内膜细胞E2R,PR结 mMEDTA,1mMDTT,3mMNaN,合容量的影响见附表.醋酸棉酚和孕酮处理 20mM钼酸钠,10%甘油,pH7.4.(3)闪使子官内膜细胞E.R,PR结合容量均降低; 烁液:萘75g,PPO7g,POPOP0.6g,乙丹那唑仅使子宫内膜细胞的PR结合容量降 二醇乙醚400ml,加热60?溶解后以甲苯补低;与对照组相比均有非常显着差异(P< 至1000ml.0.01).GnRH—A作用24h后,对于官内膜 三,实验方法将取得的子宫内膜以细胞E.R,PR的结合容量的影响无显着性差 0.2%胰酶消化后行单层细胞培养".待细胞异(P>0.05). 附表4种药物对细胞E:R,PR结合容量的影响 (cpm/mg蛋白,i?S) 组别样数车R?PR? 对照 醋酸棉酚 孕酮 丹那唑 6nRH-A 24522?1013—24202土2281 16537?1903'5691390.2士2325'522 16512?2681462l670O?112.0336 23804?302.411017026?1213381 23565=247115+22161l?192.8112 洼:各实验组药物旅度均为10M{与对照组相比. ?P<O.01}?为抑制率(%):(对照组均值一药物组均值)/对 照组均值×100% 经相关统计处理,发现孕酮和丹那唑两者 对PR结合容量抑制作用的关系呈正相关(r= 0.99,P<0.05) 讨论 本研究结果表明,10M孕酮处理不仅 使内膜细胞PR结合容量降低,而且使E:R 结合容量也相应降低.这说明经孕酮处理24 h,可使内膜细胞PR和ER产生下调作用. 该作用在临床上用孕激素制剂治疗异位症时可 能有特殊意义,即其可降低体内雌激素对异位 内膜的刺激作用,从而使子宫内膜萎缩,达到 治疗目的. 丹那唑的药理作用近年来研究较多,本研 究观察到,用10M丹那唑处理24h,可使 离体子宫内膜细胞PR结台容量显着下降,而 对E.R的结台容量无明显影响.此结果说明, 丹那唑对PR有下调作用,而对E.R无明显 影响.有研究表明,丹那唑与PR有中等亲 和力,通过孕酮和丹那唑对PR结台容量抑制 率之间的直线相关分析,两者呈正相关关系. 说明丹那唑具有类孕酮作用,可能通过PR途 径发挥对于宫内膜的效应.另一方面.我们以 前的研究表明,孕酮对内膜细胞DNA合成的 抑制率明显大于丹那唑(P<0.01)".由此推 测,丹那唑与孕酮对子宫内膜细胞发挥生物学 效应的作用机制和(或)作用途径是有差异的. 我们过去的研究工作发现,使用醋酸棉酚 治疗异位症时,在血中雌,孕激素水平尚无改 变时,已使在位,异位子宫内膜组织中E:R, PR水平显着下降,并使子官内膜细胞发生形 态学或酶活力的改变.这说明子宫内膜雌, 孕激素受体对非甾体药物醋酸棉酚相当敏感. 本实验在离体条件下,观察到10M醋酸棉 酚处理后,可使内膜细胞R和PR结合容 量均显着降低.提示甾体激素受体除受甾体激 素调节外,还受到非甾体制剂的调节.棉酚对 E:R,PR的负调节作用可能是其抑制内膜细 胞增殖的机制之一.有关棉酚对甾体激素受体 产生下调作用的分子机制有待进一步研究. l临床上,应用GnRH—A时,发现其有类 似丹那唑的假绝经现象.但本研究观察到,用 10MGnRH—A处理对内膜细胞E:R,PR 结合容量并无影响.Henig将雌鼠建立异位 症实验模型后去势,给予GnRH—A,发现其 血中雌二醇,孕酮水平及异位内膜中PR与去 势不给药组比较均无显着差异.由以上两实验 结果分析,由于GnRH—A的化学组成及分子 结构所决定,肽类激素可能不直接参与甾体激 素受体的调节,主要作用部位在垂体水平以 上,临床上通过下丘脑一垂体,卵巢轴起作 用. 参考文献 1.LindenbergS,etal,Isolationandcultureofhuman endometrialcelhFertilSterJ11984~41550 2.刘以训.雌,孕激素受体谢定.生殖与避孕1.98ht(2】: 53 3.TamayaT.etalDanazolbindingtosteriodreceptors inhumanuterineendometrium.FertilSteri]1984;41: 2 4.黄荷风,等.醋酸棉酚,孕酮,丹耶唑及GnRH—A对^ 子宫内膜细胞DNA合成的影响.中西压结台杂志t996, t6(8).-476 5.擦乐凤,等.子宫内艘异位症患者的异位内膜和在位内膜 的组织化学及超微细胞化学观察.中华妇产科杂志1989l 24(6):297.