粘多糖储积症并发骨发育异常与组织蛋白酶K的相关性研究

粘多糖储积症并发骨发育异常与组织蛋白酶K的相关性研究 第, ,卷 第 ,期 青 海 医 学 院 学 报 ,, ( ,, ( , ,, , ,, , ,卑 ,, , , ,, ,, ,,, , , , , , ,, , , , ，,, ， , ,, , ,, , , 粘 多糖储 积 症 并发 骨发 育异 常与 组织 蛋 白酶 ,的相 关性 研 究 吴 建芳 ( 青海大 学 医学院) 摘 ,, ,, ,， , ,)在粘 多糖 储 积 症 ,型疾 病 ( ,,, , , 要 目的 研 究组 织蛋 白酶 ,( , ,, , , , ;,( ,,;,, , , ,, ) , ,, ,,;,, ,,, ,，， ,，并发 多发性 致 密性 骨发 育 不全 病理 机 制 中的作 用。 方法 用基 因敲 ，, ,一 小鼠建立小鼠粘 多糖储积症模型， 除(,,一 ) 免疫荧光化学染色法检测并分析 采用组织化学、 , ,,, 、 , , ,, , , , ) , ,, 脊椎 骨组织中胶原( ,,, ) 硫 酸 乙酰肝 素( ,, ,,,,， , 和组织蛋 白酶 ,的达和含 量。结果 , ,,,,含 ,, ,小鼠脊椎 关节 明显增 大 ，,,, 量与 , , ,,复合 物表达 增加 ， 对照组相 ,—,, 与 , ,, ,, 比具有显著性差异。结论 骨组织中 , — , ,复合物表达增加 、 , ,胶原降解活性受到抑制 , 是 引起 , ,，多发 性骨发 育不全 的重要 原 因。 关键词 ,， ,, 致 密性 骨发 育不全 硫 酸 乙酰肝 素 组 织蛋 白酶 , 胶 原 中图分 类号 ,, , , 文献?识码 , ， , ， ,,, ,,, , , ,,,， ,,,,,,, , , ,,,, , ,, ， ,, ,, ,,,,,,, , ,, ,,， , ,, ,,, ,,, , , , ,, ,, ,, , , , ,, , , , , ) , , , ,, , ( , ,, , ,,,, ,;, , ,, ,,; ,,,, , ,,, , ,,, , , , ,,, , , ,, ,,, , , , , (,, , , ,,,, , , ,; , , , , , , , , , , , ,, , ,, , , ,, , , ,,, , ,, , , , , ,, , , , ?,, , , , , , , ,, ,,, ,, , ，,, , , ,, , ,, , , , , ,;, , , , ,, ,,, ,，,, , , ,,, , , ,,,, , , ,, ; , , , , , , ,,, , , , ,, , , ,， ,, , , , , , ,, ,, ; ,, , , , ,? ,, , ,,, ;, ,, , ,, , , , , , ,,, ;, , ,(, ,, , , ,, , ,, , ， ,, ,, , , ,,,, ,, ,,, , , , , ,, ,, ,,, , , ,,, ,, ,, ; ,,,,,,,,, , , ;, ,,？ ,? , , , , ,, , , (,, , , ; ,, , ,, , , , , , , , , , , , , , , , , ,, , , ,,, , ,, ,, —, , , ,, ,,, , , ,, , , , (,, ;, , , , , , ,, , , , , ?; , , , , , ; ,? , , , , ; , ,, , ,,, , , , ,,; , ; , , , , , , ,,, —,, ; ,,, ,, ; ,,, , , , ,,,, , , ,, ,,,, , , , , ,, ,, , ,, ,, , , , , , , ,, ,, , ; — ,, , , , , ,, ,, , , , , ,, , ,,,, , , ,, , , ,, , ,, , , ,, , ( , ,, , , , , ,,, , , , , , , , , ,, , , ,, , , , ,, , ,, , ,, , , , ,, , ,, , , , , , , ,, , , ,, , , ,, ,; , , ,， 是一 种 常染 色体 粘 多糖储 积症 ，型 (,, ) ,, 在 研 究证实 组织蛋 白酶 ,( , ,) 骨 的破 坏 吸 收和 隐性遗传疾病。患者 因缺乏 ,一 艾杜糖醛酶 (,— ,, 再建过程 中起着关键作用 ，, ,缺陷可导致骨 , ,,,, 导致 大 分 子糖 不能 降解 并 在溶 酶 体 内 ,, ,,,,) 我 ,，骨发育 异 常是否 也 质 硬化症 ， 们 由此 考虑 ,, 如骨骼发 育异 常等 ， 重 的会 储 积引起 多系统 异 常 ， 严 , ,有关 ， 了研 究 和证 实这 一点 ， 与 ,, 为 我们 用艾 杜 导致智力障碍。其中多发性致密性骨发育不全是常 ,, ,一 建立 , ,， 糖醛酶基因敲除小 鼠(， ,一 ) , 模 见并发症 ， 而 目前 国 内对其 发病机 制研究 较少 ， 国外 检测其 脊椎骨 组织 中 , ( 酸 乙酰 肝 素 ) ,, 型， ,硫 和 , ,, ， 汉 青海籍 ， 吴建芳 (, ,一) 女 ， 族， 硕士 副教授 ，,的表达 。 (( ,, , 组 织 化 学染 色 :用碱 性 甲苯 胺 蓝行 常 规 软 , 材料 与方法 骨胶原 染 色。 ( , , 材料 (( 常 水化 ， ,, , 双重免 疫荧光 化学染 色 : 规脱腊 ， 抗 , , , 实 验 动 物 : , , ,小 鼠 ， , (, , 一 ( ( ,, , ,, , ,, , 封 两种 一抗稀 释于 同一 份 原修 复 ， 闭非特 异性抗 原 ，一 、 , , , ( ， , ,，) , , , ) ,, ,, ,, ，, ， 各 ,只 ，由加 拿 大 , 山羊血清 至适 宜浓 度 ， 加覆 盖组织 ， , 滴 ,?过 夜 ，哥伦 比亚大 学 医学 研 究 中 心 赠送 ， 雄 各 半 ， 重 雌 体 , 滴 , ,缓 冲 液 冲洗 。 以 下 步 骤 均 需 避 光 : 加 二 抗 , , , , ,, 。 , , , ,, , , , , , , , , ,,,, ,,, , , , , , , ,,,, ,, , ,, , , , ,, ,, ((,,, 试 剂 : 抗 ， 酸 乙 酰 肝素 ( :, ,, , 一 硫 , ,, , ,, , 室 ，, , ，,， 温 孵育 ,, , ,缓 冲液 冲洗 。滴 加 , ,,,, ,,，, —, , ,,) ; 织 蛋 白酶 ,(,, ,, , , ，,,; 组 实 , , , , ,,,, ,,, , , ,, ,, , , , 室温 , ,,,, , , ,,, , , ,—, , ,，,，验室 自制 ，:,,, ,)。二抗 ，, ,, ,, , ,荧 光标 记 纯 ， , , ,。 孵 育 ,, , ,缓 冲液 冲洗 。然 后普 通 水 洗 ,,, ,化 山 羊 抗 鼠 ，, ( :, , , ,, , , , ,, , ,, , , ,,,, , , , , , 待 干后用抗 荧光 衰减封 片剂封 片 。 ,, ,, , ,, , , , ,, ,, , , ,, , —,,, ，,，, ;, , ;, ,荧 , ,,, ) , (( 采用 图像分 析软件检 测并计算 各 】,, 检 测分 析 : , , ,, , , ,,,, 光标记 纯 化 山羊抗 鼠 ，, ( :, , , ,, , , , 指标 。 ,, ,, , ,,, , , ,—, , ,，, ， ,,?, ,,, , , ,, ,, ,,,, , ;,, )。碱 ( ( , ,, ,软 件 行 统 计 分 ,, , 统 计 分 析 :采 用 , , ， ( , ,,,, , , ; , ) 性 甲苯胺蓝 (, ,,, , ， ,,,, 。 , , , 析 。组 间显著性 检验用 方 差分 析 。,,, 仪器 : (( , ，,, , , ) , 荧光显微 镜 ( ,, ,， , , 。 , 结果 ?(( , ,, , ,。,,, 图像 分析软件 :,,, (( , ( , , 组织 化学 染色结 果 ,, 方法 ( ,， 见 , )胶 ,, 小 鼠椎 关节 明显增 大 ( 图 , , ， 原 (( ,, , ,只 ， 规 ,, , 取材 : , 组 和 ,,组 小 鼠各 , 常 , , , ( , , ,,组 为 ( ( , 含量 占骨 组 织 的 ( ( ,,, , ) ， , , ,周 常饲养 ， 后 处 死取 脊 椎 中段 ， 规 固 定 并 石 蜡 包 ,, ) 两 ,, (, 见 ? (, , ， 者相 比具有显 著性 差异 ， ,, ( 组织切 片 ( ,) 埋， , 。 ) 图, 。 ,， ,, ,, , , ) ,, ,,( , , , 图 , 模型 组染 色 图 图 , 对 照组 染 色 图 , ,, ,,染 色 ( , ,,,,,,, ， ,小 ,×) ,, ， 鼠 脊 椎 关 节 明显 粗 大 , ,,,, , ,, , , , , ,染 色 ( ,×) 图 , 胶原含量占骨组织的百分 比 ,— , ,复合物 占骨组织总 , , 图, , , , , ,的百分比 , , , ,,,,,, , , 与 ( , ,, ,;, , ， , , ,,相 比 ,, ( , ,, ) ( ,—, , , , ,, , , , ， , 与 ,,相 比 ,, (, , , ,, , , ,; , ,, , , , ,, ) , ,, (,, 免疫荧 光化 学染色结 果 与 物增 加 ，而且胶 原 含 量 也增 加 ， 对照 组 相 比呈 显 , ,,复合 物 占骨 组织 总 , , , —, , , ,的百 分 比， 粘 著性 差异 。 由此 推断 : 多糖储 积症 ,型致 密性骨 ,，,, 组 为 ( , , , ( , , ，,,组 为 ( , , , ( ,,, , ) , (,,, ,— 发育 不全 的重要 原因是 由于患 者体 内缺乏 ,—,, , , , ，两 者 相 比具 有 明 显 差 异 ，,,, , 见 (,) ( ,( , ,, ,， 在溶 酶 体 内大 量储 积 ， ,, ,, ,,不能正 常 降解 ， ) 图, 。 .