【doc】HPLC法测定酒石酸美托洛尔片的含量

【doc】HPLC法测定酒石酸美托洛尔片的含量 HPLC法测定酒石酸美托洛尔片的含量 科技论坛 HPLC法测定酒石酸美托洛尔片的含量 李妍栾超 (哈尔滨三联药业有限公司,黑龙江哈尔滨150000) 摘要:建立反相高效液相色谱法测定酒石酸关托洛尔片中酒石酸美托洛尔的含量.方法:采用奥泰公司c.色谱柱(2201TI1TIX 4.6mm,5m),醋酸盐缓冲液(取醋酸铵3.9g加水810ml溶解后,加三乙胺2.0ml,冰醋酸10.0ml,磷酸3.0ml,摇匀)一乙腈(824:146)为 流动相,检测波长为275nm,流速为1.0ml/min,柱温为30qC.酒石酸美托洛尔在0.05,4mg?mL范围内呈良好的线性关系(r=O.99995). 酒石酸关托洛尔平均回收率分别为99.3%.结论:本法简便,准确,可用于酒石酸美托洛尔片中酒石酸关托洛尔的含量测定. 关键词:酒石酸美托洛尔片;含量;测定 酒石酸美托洛尔化学名称为1一异丙氨基一3一『对一(2一甲基乙 基)苯氧基卜2一丙醇L(+)一酒石酸盐,主要治疗用于治疗高血压,心 绞痛,主动脉夹层,心律失常,甲状腺机能亢进等.高效液相色谱法 以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的流动相泵入 装有固定相的色谱柱,从而实现对试样的.文采用高效液相法, 又根据本实验采用高效液相色谱法对酒石酸美托洛尔片中的酒石 酸美托洛尔的进行了含量测定. 1仪器与试药 1.1仪器:Waters510高效液相色谱仪;N2000色谱工作站;Wa— ters2487可变波长检测器.赛多利斯BPZn—D分析天平;KQ一300VDE 型双频数控超声波清洗器;TU一1901双光束紫外可见分光光度计(JL 京普析通用仪器有限责任公司). 1.2色谱柱:奥泰公司c色谱柱(220mmX4.6ram,5m). 1.3对照品:酒石酸美托洛尔 1.4试剂:甲醇,乙腈为色谱纯;水为纯化水,其它试剂均为分析 纯. 1.5试药:酒石酸美托洛尔片. 2测定方法确定 2.1色谱条件 依据查阅文献及考查的结果,确定色谱条件如下.流动相:醋酸 盐缓冲液(取醋酸铵3.9g加水810ml溶解后,加三乙胺2.0ml,冰醋酸 )一乙腈(824:146)为流动相,检测波长:275nm, 10.0ml,磷酸3.0ml,摇匀 流速:1.5m?rain,.柱温:30~C.理论板数按酒石酸美托洛尔峰计算应 不得低于2000. 2.2对照品溶液的制备 精密称取酒石酸美托洛尔对照品适量,置容量瓶中,加流动相制 成每lmL含0.3mg的溶液,即得. 2.3提取方法确定 2.3.1提取溶媒的选择 在供试品溶液制备中,分别选用了水,50%甲醇,流动相进行超 声提取,结果表明流动相分离效果,峰形及含量为最好,所以选择流 动相进行超声提取. 2.3.2提取时间的选择 取供试品适量,用流动相溶解,超声波振荡分别提取20,30,40 分钟,制备供试品溶液,含量结果表明:三种提取时间结果无明显差 异,为保证酒石酸美托洛尔不被破坏并缩短处理时间,采用超声提取 30分钟. 2.3.3供试品溶液的制备 取装量差异项下的供试品精密称定,研细,精密称取(相当于酒 石酸美托洛尔3mg),置具塞锥形瓶中,精密加入流动相lOmL,密塞, 精密称定重量,超声处~(240W,40kHz)30min,放冷,精密称定,用流动 相补足重量,摇匀,滤过.取续滤液,即得. 2.4专属性试验 依照处方取除酒石酸美托洛尔,按样品制备工艺制成阴性对照 样品,照2.3.3项下供试品溶液的制备方法制成阴性液,依上述方法 测定,结果在酒石酸美托洛尔出峰处阴性液无色谱峰,结果阴性试验 没有干扰,表明本方法专属性良好. 2.5精密度试验 精密称取酒石酸美托洛尔对照品适量,加流动相使溶解,制成浓 度为0.3mg?mL-的供试品溶液.照上述色谱条件,精密吸取10l, 连续进样6次,峰面积.结果,RSD=0.65%,表明本方法精密度良 好. 2.6对照品的线性考察 精密称取适量酒石酸美托洛尔对照品,加入流动相溶液使溶解 分别配制成每毫升含0.5,1.0,5.0,10.0,20.0,40.0毫克的溶液.分别 精密上述溶液吸取10L,注人液相色谱仪,依照2.1项下的色谱条 件测定,记录色谱峰.以峰面积(Y)为纵坐标,对照品进样量(x)为横坐 标,绘制标准曲线,计算回归方程为:y=16541.32x一8965.36(r=-0. 99995).结果表明,酒石酸美托洛尔在0.05,4mg?mL-范围内呈良好 的线性关系. 2.7重现性试验 称取同一批的酒石酸美托洛尔片样品6份,按测定方法项下的 方法制备供试品溶液,测定含量,并计算样品的RSD值,结果RSD为 0.66%,结果表明此方法的重现胜良好. 2.8准确度试验 取对照品适量,按处方比例及工艺规程制备模拟片各20片,含 量分别相当于标示量的80%,100%,120%.取模拟片照"含量测定" 项下方法试验,计算回收率为99.3%,RSD为0.65%. 2.9最低检出限与定量? 采用2.1项下色谱条件,对样品测定,当信噪比为10时,定量限 为1.5ng;当信噪比为3时,最低检出限为O.4ng. 2.10样品稳定性试验 取同一批酒石酸美托洛尔片样品,按2.3项下的供试品制备方 法制备供试品,将供试品置室温下放置,分别于第0,1,2,3,4,5小 时,精密吸取供试品溶液10tzl注入液相色谱仪中,记录色谱图.测定 酒石酸美托洛尔片中酒石酸美托洛尔的RSD=0.69%.结果表明供 试品5小时内稳定. 2.11样品含量测定 依照上述含量测定方法,测定酒石酸美托洛尔片三批样品中酒 石酸美托洛尔的含量,结果三批样品的含量分别为标示量的99.8%, 100-2%,101.1%. 3讨论 3.1流动相的选择 分别考察甲醇一水一三乙胺(7o:30:0.2),甲醇一磷酸盐缓冲液 一 三乙胺(640:360:1.5),醋酸盐缓冲液(取醋酸铵3.9g加水810ml 溶解后,加三乙胺2.0ml,冰醋酸10.0ml,磷酸3.0ml,摇匀)一乙腈(824: 146)不同比例的流动相,结果以醋酸盐缓冲液(取醋酸铵3.9g加水 810ml溶解后,加三乙胺2.0ml,冰醋酸10.0ml,磷酸3.0ml,摇匀)一乙 腈(824:146)为流动相为流动相,供试品各峰分离效果最好,故选用醋 酸盐缓冲液(取醋酸铵3.9g加水810ml溶解后,加三乙胺2.Oral,冰醋 酸10.Oml,磷酸3.Oml,摇匀卜乙腈(824:146)为流动相为流动相. 3.2检测波长的选择 制备酒石酸美托洛尔对照品稀释液照紫外一可见分光光度法 (中国药典2010版一部附录VA),于190—900nm波长范围内进行全 波长光谱扫描,记录吸收光谱.在275nm处有最大吸收峰,故选用 275nm为检测波长I1l. 本实验表明此方法分离效果好,方法简便,快捷,准确,专属性 好,可用于酒石酸美托洛尔片中酒石酸美托洛尔的含量测定.酒石 酸美托洛尔片的含量应为标示量的95%,105%.' 参考文献 [11国家药典委员会.中国药典【s].北京:二部,化学工业出版社,2010.