大鼠提睾肌微循环内微栓子的实验研究

大鼠提睾肌微循环内微栓子的实验研究 德曩环学杂志.2002.12(4):9,10 ?2002CHINESEJOURNALOFMICROCIRCULA~ON 大鼠提睾肌微循环内微栓子的实验研究 高洪何鹤皋曾炳芳范存义 因差一 1材料与方法 1.1材料 16只Sprague—Dawley大鼠(雄性,体重150g-- 160g)随机分为二组.一组观察微栓子在微循环内 的变化,另一组观察功能毛细血管密度的变化. 1.2方法 实验大鼠用1%氯胺酮(10rag/100g体重)腹 然后按照Anderson法制备大鼠右侧提 腔注射麻醉, 睾肌模型【,使大鼠提睾肌仅通过阴部一腹壁动静脉 与髂血管相连.在阴部一腹壁动静脉起点的远侧结 扎髂血管使髂动脉吻合后产生的微栓子全部进入大 鼠的提睾肌微循环内.模型制备后经过15min稳 定期,使提睾肌内血流状态趋于稳定后,再进行相应 的实验研究. 在手术显微镜下用血管夹阻断近端髂动脉,在其远端切开髂动脉壁2mm,按照血管吻合技 术吻合血管,用lO,O缝线间断吻合6针,再将大鼠 提睾肌模型放到微循环显微观察仪的观察台上观 察,然后去除血管夹,恢复提睾肌血液供应.摄像 上海市第六人民医院,邮政编码上海200233 本文2002—02—04收到,2002—05—24修回,2002—07—01修回, 2oo2—09一l0接受 t?琢学瓣 2002年第12卷第4张 机,录像机和监视器组成的闭合回路摄像显示系统 记录原始图像.功能毛细血管密度(Fcap)为单位视 野内有红细胞流动的毛细血管数量.在提睾肌上选 择4个均匀分布的观察区,每个观察区包括邻近的 4个视野,每个视野为监视器中的一幅画面.在放 大600倍条件下用交点计数法计算有血液流动的毛 细血管数量J,l6个视野中平均Fcap为测量时刻 该大鼠提睾肌微循环的灌注状态.记录吻合灌注后 1h,2h,3hFcap.切取含有微栓子的提睾肌组织, 扫描电镜观察和拍照. 2结果 提睾肌微循环在正常血流状态时为鲜红的,线条 血流为0级,呈线流(图1).只有当血 状的红细胞柱, 流速度明显减慢时,柱内的单个红细胞才能够分清. 来自髂动脉吻合处的微栓子在血管内呈现为淡 黄色,稀疏的,多种形状的团块状物,例如圆柱状,球 状,椭圆形,沙丘状,不规则形等.它与红细胞柱成 明显反差.当它随血流冲入提睾肌微循环后,由微 动脉逐渐进入毛细血管,其体积也发生相应的变化. 大的栓子可变形通过微血管分叉处进入下一级分支 血管,或者阻塞分叉处使分支血管血流中断,甚至倒 流(图2);或者与其它栓子相互碰撞,聚集形成更大 的栓子.随后在血流切变应力作用下,大栓子分裂 成小的栓子进入分支血管,从而恢复血管分叉处的 血流(图3).在血流作用下,微栓子逐渐被推向毛 细血管.在毛细血管中,微栓子现为明亮的,体积 比白细胞大的亮点,挤胀毛细血管并摇摆通过.在 微静脉内时常可以见到小的微栓子聚集,形成体积 较大的栓子随血流进入髂静脉. 随着微栓子的出现大鼠提睾肌Fcap不断下降, 吻合后3h尽管微栓子明显减少,但Fcap仍下降到 基础值的57.6%(图4). 电镜照片显示髂动脉吻合处产生的微栓子几乎 全部由处于不同激活状态的血小板组成,血小板出 现伪足以及显着脱颗粒(图5). 10高洪,何鹤皋,曾炳芳,等 图4提睾肌吻合后功能毛细血管密度变化("=16) [本文图1,3,5见封2] 3讨论 1989年Acland等j使用大鼠提睾肌模型显示 而在仅 髂动脉吻合灌注后,微循环中出现了微栓子,游离未吻合的对照侧则无微栓子的出现,因此认为: 髂动脉损伤处形成的血栓被血流冲刷进入微循环而 成为微栓子,吻合口处形成的血栓是微栓子的来源. 当血管吻合时,吻合口缺乏血小板内皮细胞粘附分 子一1(PECAM一1)阳性的内皮细胞』,内皮下胶原暴 露,负电荷减少,内皮细胞中的vonWillebrandfactir (vWF)释放,vWF通过与血小板膜上受体糖蛋白IB (GPIB)结合,使血小板粘附于损伤的血管壁.纤维 蛋白原借助于血小板膜上的受体GP)1IB/I]IA使 血小板聚集起来.在髂动脉吻合处形成的血小板团 块稳定之前,血流所引起的切变力可使血小板团块 脱落,从而形成微栓子,随血流进入微循环.在微循 环内小的栓子可以碰撞聚集成大的栓子阻塞血管, 停止血流:大的栓子在血流切变应力作用下可以分 裂成小的栓子,从而恢复血流.透射电镜显示大鼠 提睾肌微循环中出现的微栓子几乎全部由处于不同 激活状态的血小板组成,这可以解释为什么微栓子 会很容易发生外形的改变. 在血管吻合血流恢复后2O,40min,单位时间 参考文献 1AndersenDM,OShaughnessyM,AelandRD,eta1.INrectvisualiza— tionandmeasurementofmicrosurgicallyinducedthromboembolism. Microsurgery,1994,15(6):413--420. 2AndersonGL,AclandRD,SiemionowM,eta1.Vascularisolationof therateremastermu~le.MicmvascRes,1988,36(1):56,63. 3陶恭明,金惠铭,朱益栋.正常兔肾表面微循环的研究.中华医学 杂志,1984,64(4):222,25. 4AelandRD.AndersonG,SiemionowM.eta1.DirectinviVOobserva— tionsofembolieeventsinthemicrocirculationdistaltoasmall-vessel 叠IItl~赫 2002年蔫12卷蔫4期 内出现于提睾肌微循环内的微栓子数达到高峰,随 后逐渐下降.然后随着时间的推移,虽然吻合处通 畅,出现于微循环内的微栓子数明显减少,但Fcap 仍然逐渐下降.吻合后3hFcap下降到基础值的 57.6%.这种3h后Fcap的下降与血小板释放的血 管活性物质有关.电镜照片显示微栓子中的血小板 显着性地脱颗粒.局部区域内血小板分泌释放的这 些血管活性物质显着增加可以进一步促进血小板的 黏附和聚集,降低微循环灌注,发挥对微循环的生物 化学因素的影响.微动脉上的血栓素A2(TXA2)受 体较为丰富,血小板合成释放的TXA2可以引起局 部微血管的收缩,使管腔变小;在管径500m的血 管,只需0.2ml的血液或3.1×10个血小板就可 以产生闭塞性血栓,而提睾肌微循环A仅在100 脚左右,这一切均有利于微栓子在微循环内停留 聚集形成闭塞性血栓,从而发挥对微循环机械性阻 塞的影响j.Weinzweig[7j的临床研究证实了这一 点.在对140例游离组织移植中1O例皮瓣部分坏 死的患者回顾性研究中发现任何技术上的失误以及 血管壁的异常可能会产生大量的微栓子,从而在远 离血管吻合处的微血管内形成闭塞性血栓,影响组 织存活.有报道显示血管吻合后1周仍有微栓子出 现,但本实验显示微栓子主要集中出现于血管吻合 血流恢复后最初几小时内,并且很容易发生外形的 改变,因此只要保持血管吻合口以及微循环通畅,维 持较长时间的血流量,那么微栓子就可以逐步通过 微循环并且其释放的血管活性物质对微循环的影响 也会逐渐减弱,从而避免形成闭塞性血栓,防止组织 部分或全部坏死.这表明不仅需要努力提高血管吻 合技术,减少微栓子形成的数量,而且对于血管危象 应尽早探查,降低停留在微循环内的微栓子形成闭 塞性微血栓的可能,从而避免组织发生不可逆性坏 死.总之,临床医生应提高对微栓子的重视程度. 本文作者简介: 高洪(1967~).男.汉族.主治医师.硕士 anastomosis.PlastReconstrSurg,1989,84(2):280,288. 5OlssonE,Sarlomo-RikalaM,B6hlingT,eta1.Immunohistochemical evaluationoffailedvesselanastomoseinclinicalmicrosurgery.BrI PlastSurg.2000.53:567,573. 6JohnsonPC,BarkerJH.Thrombosisandantithrombotietherapyin miemvascularsurgery.ClinPlastSurg,1992,19(4):799--807. 7WeinzweigN,GonzalezM.FreetissuefailureiSnotanall—or-none phenomenon.PlastReconstrSurg,1995,96(3):648--660.