浮毛茛的组织培养与植株再生

浮毛茛的组织培养与植株再生 浮毛茛的组织培养与植株再生 植物生理学通讯第43卷第5期,2007年l0月889 浮毛茛的组织培养与植株再生 吴侠,张鑫,王亚芬,姜长阳 辽宁师范大学生命科学学院,辽宁大连116029 TissueCultureandPlantletRegenerationofRanunculusnatansC.A.Mey. WUXia,ZHANGXin,WANGYa—Fen,JIANGChang?Yang CollegeofLifeScience,LiaoningNormalUniversity,Dalian,Liaoning116029,China 1植物名称浮毛莨(RanunculusnatansC.A. MeY.),又称水毛. 2材料类别基生茎. 3培养条件愈伤组织诱导培养基:(1)MS+6一BA 1mg.L.(单位下同);(2)MS+6一BAI+IBA0.6; (3)MS+6一BA1+IAA0.6;(4)MS+6一BA1+2,4一D 0.6;(5)MS+6一BAI+NAA0.6.愈伤组织分化培 养基:(6)1/2MS+6一BA0.2+NAA0.1;(7)1/2MS+6一 BA0.2+NAA0.5;(8)1/2MS+6一BA0.2+NAA1; (9)1/2MS+6一BA0.2+NAA1.5.生根培养基:(10) MS+NAA0.2;(11)1/2MS+NAA0.2;(12) 1/3MS+NAA0.2.上述MS培养基中加30g.L.蔗 糖,1/2MS培养基中加15g.L.蔗糖,1/3MS培 养基中加10g.L.蔗糖.所有固体培养基琼脂的含 量均为5g.L一,pH6.0.光强30~tmo1.m,.s一, 光照时间12h.d一;温度18?.愈伤组织分化培 养时光强为40lamo1.m-2.s一,培养温度为21?. 4生长与分化情况 4.1无菌材料的获得将3月中旬在水塘浅水区采 集的浮毛莨幼苗去掉叶子和根系后,用画笔刷洗 基生茎10min左右,放入250mL的磨口广口瓶 中,用自来水冲洗30min后,加0.05%的安利 洗涤液振荡洗涤20min,再用自来水振荡洗涤至 完全没有泡沫为止,移至超净台上,用75%的乙 醇灭菌15S后,迅速用无菌水清洗4次,接着用 0.03%的HgC1,溶液振荡灭菌10min,再用无菌水 振荡清洗5次,即获得无菌材料. 4.2愈伤组织的诱导用解剖刀将基生茎切成长 0.2cm左右的茎块后,接种到培养基(1)一(5)上, 进行愈伤组织的诱导培养.接种50d时,在培 养基(1)一(3)上基本未见变化,(4),(5)上开始形成 愈伤组织.随后,愈伤组织迅速生长,培养到 90d时,培养基(4),(5)上的愈伤组织诱导率均达 100%.观察表明,在培养基(4)上诱导生长的愈 伤组织为浅黄松软状,为没有分化能力的愈伤组 织;在培养基(5)上诱导的愈伤组织为绿色的颗粒 状(图1),培养到90d时,伴随着愈伤组织的生 长,少数愈伤组织颗粒会分化出不定芽.在培养 基(5)上诱导培养的愈伤组织经过连续9代的继代 培养,不仅愈伤组织生长速度加快了1倍左右, 而且绿色颗粒状形态保持不变. 图l浮毛茛的愈伤组织培养 4.3分化培养把在培养基(5)上继代培养的绿色颗 粒状愈伤组织接种到培养基(6)一(9)上进行分化培 养.培养30d左右,培养基(6)上的部分愈伤组 织颗粒分化出绿色芽点,培养到65d时,愈伤 组织颗粒分化率达到89%(图2);在培养基(6)上 继续培养15d左右,绿色的芽点就会分化生长成 具有少许根的丛生芽.将其切成基部具有愈伤组 收稿2007—06—25修定2007—08一l8 资助辽宁师范大学教学改革项目(20050101123). $通讯作者(E—mail:changyangjiang@】26,~om;Tel 04ll一842589831 890植物生理学通讯第43卷第5期,2007年l0月 织的不定芽,接种到培养基(6)上进行分化继代培 养,15d开始分化,60d时分化形成旺盛的丛生 不定芽,平均每块愈伤组织上为9.6个. 图2浮毛茛愈伤组织的分化培养 4.4试管苗的生根将不定芽从基部剪开形成单芽 后,接种到培养基(1O)(12)上进行生根培养.在 培养基(11)和(12)上培养710d均能生根,但培 养基(12)较培养基(11)的根原基形成早2—3d,根 生长速度也较快,25d时生根率为100%,平均 每株生根5.5条,根长3cm左右,生根试管苗 生长较为旺盛(图3). 图3浮毛茛不定芽的生根培养 4.5试管苗的移栽将试管苗从三角瓶中取出,立 即洗去根部培养基,栽到下部为7—8cm厚的鱼塘 土,上面约为10cm深清水的烧杯等容器中,在 保持温度15?左右的条件下,成活率达90%以 上.移栽40d左右,试管苗生长旺盛(图4).将 移栽成活的试管苗于5月中下旬移植到鱼塘浅水 区,小批量的移栽成活率为99%.移植试管苗的 当年长势与野生苗的一样,6月下旬至7月上旬可 正常开花. 图4浮毛茛生根苗移栽成活 5意义与进展浮毛茛属于毛茛科毛茛属多年生沉 水草本植物,全草含白头翁素,毛茛甙等化学成 分,具有杀菌作用.近年来,辽宁部分地区有 人将浮毛茛栽种到鱼塘的浅水区后,草鱼等鱼类 疾病明显减少.但由于这种水生植物在北方难以 形成种子,即使形成了种子在水中的发芽率也非 常低,并且在自然条件下不能进行无性繁殖,因 此无法满足农民的需要.本文采用组织培养的方 法获得了浮毛茛的试管苗,为满足农民栽植的需 要提供了可能.毛茛科植物的组织培养已有宣威 乌头(王定康等2004),乌头(胡延玉和伍光庆 1985)和大花飞燕草(何小玲和王金发1998)的报 道,但浮毛茛的组织培养与植株再生的报道尚未 见. 参考文献 何小玲,王金发(1998).大花飞燕草的组织培养及植株再生.植物 生理学通讯,34(1):39~4O 胡延玉,伍光庆(1985).乌头的组织培养与植株再生.植物生理 学通讯,(5):37 王定康.郭丽红,翟书华(2004).宣成乌头的组织培养与快速繁 殖.植物生理学通讯,40(4):464