【doc】吸烟对男性精液质量、精浆活性氧及精子凋亡率的影响

【doc】吸烟对男性精液质量、精浆活性氧及精子凋亡率的影响 吸烟对男性精液质量、精浆活性氧及精子凋 亡率的影响 一 1046一 文章编号:1007—4287(2011)06—1046—03 』:g!』20!. 吸烟对男性精液质量,精浆活性氧 及精子凋亡率的影响 孙启玉h,李剑,韩迎春,薛承岩h,关会臻h,谢守军h,张茉莉h,张秀琴a (1.承德医学院附属医院a.检验科;b.普外科,河北承德067000;2.隆化县医院放射科) 摘要:目的探索吸烟影响精液质量的机制.方法120例男性不育患者根据吸烟习惯和烟龄分为3组:A日吸 烟量<10支,且烟龄?1年;B日吸烟量10—20支,且烟龄5—10年;C日吸悃量I>20支,且烟龄?10年.选35例已 生育正常健康男性作为对照.对其精液常规参数精浆MDA含量及精子凋亡率进行检测.结果不育吸烟组精子活 力显着低于不育非吸烟组,精子凋亡率及精浆MDA含量显着增高;ABC三组比较,C组精子活力显着低于B组和A 组,而精子凋亡率及精浆MDA含量显着增高.结论吸烟可以通过增加精浆活性氧含量及精子凋亡率,严重影响精 液质量. 关键词:吸烟;精子凋亡;活性氧 中图分类号:R698.2文献标识码:A InfluenceofcigarettestoolingOilselnenquality,seminalreactiveoxygenspeciesandsperma poptosisrateSUN9i—yu,LI 肠n,HANYing-chun,etoi.(脚.砌埘 ofClinicalLaboratory,AffiliatedHospitalofChengdeMedicalCollege,Chengde067000, China) Abstract:ObjectiveToexploretheimpactofsmokingonsemenquality.Methods120infertilemenweredividedinto3 groupsaccordingtosmokingquantityandduration:Adaysmoking<10,andsmoked? 1year;Bdaysmokingl0—20,andsmoked5 — 10years;Cdaysmoking>120andsmokingage? 10years.95controlcaseswererecruitedinthestudy.Parametersoftheirsemen, MDAcontentinseminalplasmaandspermapoptosisrateweredetected.ResultsThespermmotilityintheinfertilesmokergroupW&S significantlylowerthanthatintheinfertilenon-smokergroup,thespermapoptosisandseminalplasmaMDAcontentweresignificantly increased;CgroupspermmotilityWaSsignificantlylowerthanBgroupandAgroup,whilethespermapoptosisandseminalplasma MDAcontentweresignificantlyincreased.ConclusionSmokingcanincreasethecontentofreactiveoxygenspeciesinseminalplas— maandspermapoptosisrate,seriouslyaffectingthequalityofsenlen. Keywords:smoking;spermapopiosis;reactiveoxygenspecies (ChinJLabD池,201l,15:1046) 吸烟对男性生殖能力的影响,特别是对精液质 量的影响,近年来已引起社会的广泛关注.我们选 择在我院就诊不孕患者及健康成年男性作为研究对 象,对其精浆活性氧及精子凋亡率进行检测,以探索 吸烟影响精液质量的机制. 1材料和方法 1.1研究对象 120例男性不育患者为2006年9月至2009年7 月来我院就诊病例,均为婚后2年以上,未采取任何 避孕措施,性生活正常,排除女方不孕原因的不育男 性,身体健康,无大量饮酒和长期接触有害物质史, 无生殖道感染和精索静脉曲张史等.不育非吸烟组 研究对象的纳入标准:不吸烟且无被动吸烟史. *通讯作者 育吸烟组研究对象根据吸烟习惯和烟龄分为3组: A日吸烟量<10支,且烟龄?1年;B日吸烟量10— 20支,且烟龄5一l0年;C日吸烟量?20支,且烟龄 ?10年.根据纳入标准,不育吸烟组有63人,其中 A组19人,B组22人,c组22人.正常对照组选用 35例已生育正常健康体检男性,无吸烟史,无泌尿, 生殖,造血及内分泌系统等疾病. 1.2标本采集 禁欲2—7天后通过手淫取精于无菌广L]瓶中,置 37%恒温箱中液化.液化后取部分精液25~C下,3000 r/rnin离心15min,取上清液即精浆一20?保存待测. 1.3精液常规参数测定 按WHO手册推荐的标准方法检测精液量,粘 ,液化时问,pH值等指标.采用CASA系统(北 京伟力公司WIJYgO00)检测精子总数,精子密度,精 中国实验诊断学2011年6月第l5卷第6期 子活率和活力. 1.4精浆丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量测定 采用南京建成生物技术工程有限公司生产试剂 盒测定,按试剂盒说明书操作,用分光光度计读取吸 光度值. 1.5精子凋亡的检测 试剂:TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒由南京 凯基生物技术有限公司提供;TritonX一100由北京拜 尔迪生物公司提供. 方法:标本液化后,取101.滴于多聚赖氨酸防 脱玻片上,以推血片的方法制作精液涂片;浸入4% 多聚甲醛中固定25min,一20?的乙醇中放置2h; PBS漂洗3次,每次5min;浸入封闭液,室温15— 25~C封闭10min,~PBS漂洗3次,每次5min;浸入通 透液中,冰上(2—8?)促渗2min.PBS漂洗两次, 样本周围用吸水纸吸干;每个样本滴加5OTdT酶 反应液,加盖玻片37?避光湿润反应60min;PBS漂 洗3次,样本周围用吸水纸吸干;滴加50lStrepta. vidin—HRP一工作液,加盖玻片37?湿润避光反应30 min;PBS漂洗3次;滴加50t-dDAB工作液,室温显 色反应10rain;PBS漂洗3次,光学显微镜下检测. 每张涂片随机取10个油镜视野(×1000),计数凋亡 精子数和精子总数,以凋亡精子数/精子总数× 100%示凋亡率. 1.6统计学分析 采用SPSS11.5统计软件,两组间计量资料比较 采用t检验,计数资料比较采用检验,P<0.05 为差异有统计学意义. 2结果 2.1正常对照组,不育非吸烟组及不育吸烟组精液 常规参数,精浆MDA含量和精子凋亡率测定结果 见表1三组年龄比较无明显差异.不育非吸烟组 及不育吸烟组精子密度,精子活率,a+b级精子百 分率和精浆MDA含量低于正常对照组(P<0.05), 精子凋亡率显着高于正常对照组(P<0.05).不育 吸烟组和不育非吸烟组比较精子密度,精子活率,a +b级精子百分率,精浆MDA含量显着下降(P< 0.o5),而精子凋亡率显着增高(P<0.05). 2.2ABC三组精液常规参数,精浆MDA含量和精 子凋亡率测定结果见表2三组年龄比较无明显差 异.B组精子密度,精子活率,a+b级精子百分率, MDA含量低于A组,但统计学上无明显差异.B组 精子凋亡率和A组相比也无统计学差异.c组精子 密度,精子活率,a+b级精子百分率,MDA含量显着 一 1047一 低于A组和B组(P<0.05).C组精子凋亡率显着 高于A组和B组(P<0.05). 表1各组精液常规参数,精浆MDA含量和 精子凋亡率的比较 与正常对照组比较,*P<0.05;与不育非吸烟组比较,ap<O.05 表2不同吸烟量各组精液常规参数,精浆MDA含量和 精子凋亡率的比较 C组与不育非吸烟组比较,aP<0.05 3讨论 近年来,吸烟与男性不育的关系日益受到关注, 但吸烟对精子质量的影响各家报道不一.可能与吸 烟者未能准确提供烟量,起始时间及某些未知的不 育因素等有关_1J.本研究对健康男性,不育吸烟患 者及不育非吸烟患者的研究结果显示不育吸烟患者 的各精液参数值明显下降,且大烟量组精液质量下 降最为明显.表明吸烟影响男性精液质量,并存在 一 定的量一效关系. 目前,吸烟对精液的作用机制尚不完全清楚. 香烟中含有尼古丁,可尼丁,苯并a一芘,一氧化碳,镉 等大量的有害物质.对男性的生殖功能的影响是多 方面的.吸烟能使男性体内激素水平发生改变,与 不吸烟者相比,吸烟男性血清中卵泡刺激素,雌二醇 水平显着上升l.吸烟可以增加精液DNA的氧化 损害.与不吸烟者相比,吸烟者精液DNA中的8一 OhdG(DNA氧化损伤后的一种产物)增加50%,而维 生素E的浓度下降32%E.长期重度吸烟还可干 扰睾丸及附睾微循环和内环境的物质交换,影响睾 丸生精细胞的发育过程,阻碍精子的发生和成熟[. 活性氧(Reactiveoxygenspecies,ROS)和男性生 殖的关系已得到广泛研究.在男性生殖道中,抗氧 化酶系统和非酶性抗氧化物成分使ROS的产生和 清除保持动态平衡.适量低浓度的ROS在精子获 能和顶体反应中有着重要的生理作用,但过量活性 氧存在可导致细胞氧化应激损伤,使精子的活力下 降,死亡率升高,并影响精子的顶体反应及受精功 能,是导致男性不育的重要原因之一_5J.MDA作为 活性氧与细胞多不饱和脂肪酸发生过氧化反应的主 要产物,是脂质过氧化损伤严重程度的指标.MDA 为极活泼的交联剂,可迅速与磷脂酰乙醇胺交联成 荧光色素后与蛋白质,肽类或脂类结合成难溶的无 生理活性的脂褐素沉积于细胞浆内,使细胞功能老 化,从而使精子受到损伤,运动能力下降.因此通过 检测丙二醛可了解活性氧的浓度. 本研究结果显示不育吸烟患者MDA含量显着 高于不育非吸烟患者.c组MDA含量显着高于B 组和A组.表明吸烟可以增加精浆活性氧含量,并 且吸烟量越大,时间越长产生的活性氧含量越高. 同时本研究结果显示不育吸烟患者精子凋亡率显着 高于不育非吸烟患者,且C组最为明显.精子凋亡 是精子受损的直接表现,可以反映吸烟对精子细胞 的损伤情况.长期大量吸烟导致精子凋亡率显着增 文章编号:1007—4287(2011)06—1048—03 加是其增加精浆活性氧含量加重氧化应激损伤的严 重后果. 由于吸烟可以增加精浆活性氧含量,加重损害 精子细胞,导致精液质量显着下降,吸烟可以加重不 育患者的病情,同时吸烟也可能是导致不育的唯一 因素.对于成年男性尤其是育龄男性,我们应加强 宣传力度,提倡不吸烟或戒烟,积极创造条件消除吸 烟对人类健康的危害. 参考文献: [1]武俊青,高尔生.吸烟对男性生殖功能的影响[J].生殖Lj避孕, 2006,26(12):745. [23OchedalskiT,Laehowiez0A,DecW,eta1.Examiningtheeffectsoft()一 baccosmokingonlevelsofcertainhormonesinserlllnofyoungmen[J1. ginekolPol,1994,65(2):87. [3]FragaCG,MotchnikPA,WyrobekAJ,eta1.Smokingandlowantioxidant levelsincreaseoxidativedamagetospermDNA[J].MutatRes,1996,351 (2):199. [4]Agarw~A,SalehRA,BedaiwyMA.Roleofreactiveoxygenspeciesinthe pathophysiologyofhumanreproduction[J].FenilSteril,2003,79(4): 829. [5]AgarwalA,SharmaRK,NalljellaKP,et.Reactiveoxygenspeciesasall independentmarkerofmalefactorinfertility[J].FcrtilStefil,2006,86 (4):878 (收稿Et期:2010—03—22) 热休克蛋白HSP27和HSP70在老年性白内障患者 ' 晶状体上皮细胞中表达及其意义 李桂荣,周鸿雁,张文松 (1.吉林大学第二医院眼科医院,吉林长春1313041;2.吉林大学中日联谊医院眼科) 摘要:目的研究老年性白内障晶状体上皮细胞中热休克蛋白HSP27和HSP70的表达变化情况.方法应刚逆 转录聚合酶链反应(semi—quantitaivereversetranscriptionpolymerasechainreaction,R_r-PcR)方法,检测HSP27,HSP70在老年 性白内障晶状体上皮细胞中mRNA的表达水平.结果正常人品状体上皮细胞中仅有少量的HSP27和IISt70mRNA 表达;而老年性白内障组HSP27和HSP70表达明显增高,差异有显着性.结论热休克蛋白HSP27和HStV0的应激表 达提示其参与了人晶状体上皮细胞抗应激损伤过程,对人晶状体上皮细胞起着重要的保护作用. 关键词:HSP27;HSP70;老年性白内障;表达 中图分类号:R776.1文献标识码:A HeatshockproteinHSP27andHSP70expressionbetweentheage—relatedcataractandthenormallensepithelialcells,J, Gui.rong.ZHOUHong-yan,ZHANGWen-song.(Theophthalmologyhospital,secondhos pitalofJilinUniversity,Changchun 130041,China) *通讯作者