沙门氏菌生化鉴定

沙门氏菌生化鉴定 沙门氏菌生化试验判定步骤 1 三糖铁琼脂 赖氨酸脱羧酶 初步判断 斜面 底层 产气 硫化氢 产碱 红 产酸 黄 ，(,) ，(,) 黑 ， 紫 可疑沙门氏菌 产碱 红 产酸 黄 ，(,) ，(,) 黑 , 黄 可疑沙门氏菌 产酸 黄 产酸 黄 ，(,) ，(,) 黑 ， 紫 可疑沙门氏菌 三糖铁琼脂原理:本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。用于观察细菌对糖的利用和硫化氢(变黑)的产生。该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。而发酵乳糖的细菌(e.coli)，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。 底层产酸:是因为细菌分解糖类物质使酚红退色变黄。 斜面产碱，低层产酸:是细菌分解葡萄糖(不能分解乳糖和蔗糖),由于量较少进而分解蛋白胨而产碱变红。因为底层是厌氧环境，葡萄糖分解慢，,,小时培养后还没分解蛋白胨产碱;而斜面是需氧环境分解较快，一般,小时左右就把葡萄糖分解完(此时斜面也是酸性)，但继而分解蛋白胨产碱，斜面又转为碱性。 2,志贺氏菌:都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖， 不产生H2S。 4,大肠杆菌:能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不产 生H2S。 3,沙门氏菌:能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数产生H2S，多 数产气。 赖氨酸脱羧酶试验 1、试验管及对照管均要加一层约10mm厚的灭菌石蜡或矿物油以覆盖表面，此可使培养基中的溶解氧通过细菌消耗掉，并控制培养基的pH。 2、阳性试验管培养初期(10—12h)因发酵葡萄糖产酸变黄，继续培养由于氨基酸脱羧产生胺类而使培养基由酸变碱，故又由黄变为紫色。阴性试验管则始终呈黄色。 氨基酸脱羧酶试验 (1)原理:某些细菌可产生氨基酸脱羧酶使氨基酸脱羧生成胺和二氧化碳。由于胺的生成使培养基变为碱性，可用指示剂指示出来。 (2)方法:将待检菌分别接种于1支氨基酸(赖氨酸，鸟氨酸或精氨酸)脱羧酶试验管和1支氨基酸脱羧酶对照管(无氨基酸)，各覆盖至少0.5cm高度的无菌石蜡油，35?孵育1~4d，观察结果。 (3)结果:若为溴甲酚紫指示剂，则试验管紫色为阳性，黄色为阴性，对照管应为黄色。 (4)应用:主要用于某些细菌种间的鉴别，如赖氨酸用于产气肠杆菌(阳性)与阴沟肠杆菌(阴性);鸟氨酸用于阴沟肠杆菌(阳性)和克雷伯菌(阴性);精氨酸用于阴沟肠杆菌(阳性)和产气肠杆菌(阴性)等。 精氨酸双水解酶试验 (1)原理:精氨酸经两次水解后,生成鸟氨酸、氨及二氧化碳。鸟氨酸又在脱羧酶的作用下生成腐胺。氨及腐胺均为碱性物质，故可使培养基变碱，用指示剂指示出来。 (2)方法:将待检菌接种于试验培养上，置35?孵箱孵育1~4d，观察结果。 (3)结果:溴甲酚紫指示剂呈紫色为阳性，酚红指示剂呈红色为阳性。黄色为阴性。 (4)应用:主要用于肠杆菌科及假单胞菌属的鉴定。 非发酵菌:是一大群不发酵葡萄糖或以氧化形式利用糖、需氧或兼性厌氧、无芽孢的革兰阴性杆菌。 表2 序号 硫化氢(H2S) 靛基质 尿素酶 氰化钾(KCN) 赖氨酸脱羧酶 1 ， 黑 , 不变 , 黄 , 澄清 ， 紫 2 ， 黑 ， 红色环 , 黄 , 澄清 ， 紫 3 , 黄 , 不变 , 黄 , 澄清 ，,, (紫/黄) 注:，阳性;,阴性;，,,阴性或阳性 反应1:典型沙门氏菌，如尿素、KCN和赖氨酸3项中有1项异常，按表3进行。如有2项异常为非沙门氏菌。 表3 尿素酶 氰化钾(KCN) 赖氨酸脱羧酶 判定结果 , 黄 , 澄清 , 黄 甲型副伤寒沙门氏菌(要求血清学鉴定结果) , 黄 ， 混浊 ， 紫 沙门氏菌?或?(要求符合本群生化特性) ， 红 , 澄清 ， 紫 沙门氏菌个别变体(要求血清学鉴定结果) 注:，阳性;,阴性。 反应2:补做甘露醇和山梨醇试验，沙门氏菌靛基质阳性变体两项试验结果均为阳性，但需要结合血清学鉴定结果进行判定。 反应3:补做ONPG。ONPG为阴性，同时赖氨酸脱羧酶为阳性;赖氨酸脱羧酶为阴性时为甲型副伤寒沙门氏菌。 必要时按表4进行沙门氏菌生活群的鉴别 表4 项目 ? ? ? ? ? ? 卫矛醇 ， 黄 动力 ， 黄 动力 , 绿/蓝无动力 , 绿/蓝无动力 ， 黄 动力 , 绿/蓝无动力 山梨醇 ， 黄 ， 黄 ， 黄 ， 黄 ， 黄 , 绿/蓝 水杨苷 , 绿/蓝 , 绿/蓝 , 绿/蓝 ， 黄 , 绿/蓝 , 绿/蓝 ONPG , 不变 , 不变 ， 黄 , 不变 , 不变 , 不变 丙二酸盐 , 不变/黄 ， 蓝 ， 蓝 , 不变/黄 , 不变/黄 , 不变/黄 KCN , 澄清 , 澄清 , 澄清 ， 混浊 ， 混浊 , 澄清 注:，阳性;,阴性。