可溶性糖的测定

可溶性糖的测定 默认分类 2010-06-18 13:30:04 阅读22 评论0 字号:大中小 订 阅 苯酚法测定可溶性糖原理:植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。苯酚法测定可溶性糖的原理是:糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛(分子式见蒽酮法)能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10,100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，试剂便宜，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且 产生的颜色可稳定160min以上。 二、材料、仪器设备及试剂 (一)材料:新鲜的植物叶片。 (二)仪器设备:1. 分光光度计;2. 水浴锅;3. 刻度试管;4. 刻度吸管。 (三)试剂:1. 90,苯酚溶液 称取90克苯酚(AR)，加蒸馏水10ml溶解，在室温下可保存数月;2. 9,苯酚溶液 取3ml90,苯酚溶液，加蒸馏水至30ml，现配现用;3. 浓硫酸(比重1.84);4. 1,蔗糖液 将分析纯蔗糖在80?下烘至恒重，精确称取1.000克。加少量水溶解，转入100ml容量瓶中，加入0.5ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度;5. 100μg/L 蔗糖标准液 精确吸取1,蔗糖标准液1ml加入100ml容量瓶中，加水至刻度。 三、实验步骤 1. 标准曲线的制:向试管内加入1ml90,苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以5,20S加入5ml浓硫酸，摇匀。比色液总体积为8ml，在室温下放置30min，比色。然后以空白为参比，在485nm波长下比色，以糖含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。 2. 可溶性糖的提取取:取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10,0.30g，共3份(或干材料)，分别放入3支刻度试管中，加入5,10ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min(提取2次)，提取液过滤入25ml容量瓶中，反复漂洗试管及残渣，定容至刻度。 3. 测定 吸取2ml样品液于试管中(重复2次)，同制作标准曲线的步骤，按顺序分别加入苯酚、浓硫酸溶液，显色并测定吸光度。由标准曲线查出糖的量。 四、结果计算 按下式计算测试样品的糖含量: 可溶性糖含量(,),从标准曲线查得糖的量(μg)×提取液体积(ml)×稀释倍数/[测定用样品液的体积(ml)×样品重量(g)×106]×100