五子补肾胶囊的制备工艺及其质量控制方法的研究道

五子补肾胶囊的制备工艺及其质量控制方法的研究道 学校代码:10600学 号:091062学位类型:科学学位 广 西 中 医 药 大 学 硕 士 学 位 论 文五子补肾胶囊的制备工艺及其质量控 制方法的研究 研 究 生: 黄晓玉 导 师: 甄汉深 教授 院系 : (部所) 药学院 专 业: 药物分析 研 究 方 向 : 药物质量分析与开发的研究 完 成 日 期 : 2012 年 6 月 5 日 1 目 录中文摘要 1英文摘要 3引 言 6正 文 7第一部分 五子补肾胶囊提取工艺研究 71 实验材料71.1 实验用对照品及药材 71.2 实验主要仪器及试剂 72 实验方法82.1 处方研究与分析 82.1.1 处方组成 82.1.2 提取工艺分析 82.1.3 考察指标的选择 93 五子补肾胶囊水提部分正交试验 103.1 实验方法 103.1.1 水提取工艺正交试验设计 103.1.2 煎煮试验样品的制备 103.1.3 含量测定方法 103.2 样品的测定 123.3 得膏率的测定 133.4 实验结果 143.4.1 正交试验水平设计表及结果 143.4.2 正交实验结果方差分析 153.5 水提取工艺正交实验结果验证性实验 153.6 小结 16 24 五子补肾胶囊水提液醇沉工艺考察 164.1 醇沉工艺的正交设计 164.2 醇沉试验样品的制备及测定 174.3 实验结果 184.3.1 正交试验水平设计表及结果 184.3.2 正交实 205 五子补验结果方差分析 184.4 醇沉工艺正交实验结果验证性实验 194.5 小结肾胶囊醇提部分参数的确定 206 讨论 21第二部分 五子补肾胶囊成型工艺的考察 221 仪器与材料 221.1 仪器 221.2 材料 222 浸膏粉的制备 223 辅料的选择 223.1 辅料配方的选择 223.2 混合粉的制备 233.2.1 吸湿百分率的测定 233.2.2 休止角的测定 244 颗粒的制备与乙醇浓度的选择 244.1 选定辅料的混合粉与颗粒的 254.1.2 药粉的制备 255 堆密度的测定及空心胶囊性质比较 254.1.1 颗粒的制备 型号的选择 266 定辅料颗粒的临界相对湿度的测定 267 工艺流程图 28 38 结语 299 讨论 29第三部分 五子补肾胶囊质量控制方法的研究 321 主要仪器与材料 322 性状描述323 胶囊制剂的常规检查 323.1 装量差异检查 323.2 崩解时限的检查 333.3 水分检查测定 334 薄层定性鉴别 345 含量测定405.1 淫羊藿苷含量的测定 405.1.1 色谱条件与系统适用性试验 405.2 提取试验 435.2.1 提取溶剂的考察 435.2.2 提取方法的考察 445.2.3 提取时间的考察 445.3 色谱条件 455.4 方法学考察 476 十批五子补肾胶囊中淫羊藿苷含量的测定 507 讨论与不足 51第四部分 五子补肾胶囊指纹图谱研究 531 五子补肾胶囊指纹图谱条件选择 531.1 波长的选择 531.2 三种不同样品供试品的制备方法 541.3 提取溶剂的选择 561.4 提取方法的选择 56 41.5 提取时间的比较 561.6 流动相的选择 561.7 柱温的选择 581.8 不同色谱柱的考察 602 五子补肾胶囊指纹图谱的建立 612.1 参照物溶液的制备 612.2 供试品溶液的制备 612.3 色谱条件与系统适应性试验 612.4 方法学考察 623 特征指纹图谱的建立 684 结果 714.1 不同批号样品指纹图谱比较 714.2 相似度评价 775 小结与不足 79附:五子补肾胶囊质量标准(草案) 80结论与展望84参考文献 85综 述 87致 谢 94攻读学位期间发表的学术目录 95广西中医药大学研究生学位论文作者声明 96个 人 简 历 97 5 中 文 摘 要目 的:五子补肾方为临床方，对于肾气亏虚、阳气不足所致的阳痿、早泄、遗精等症具有非常显著的疗效，深受广大患者的欢迎。由于其原剂型为丸剂，服用量较大，服用不方便等特点，且其制剂工艺及其质量标准目前尚属空白，现拟将其改为胶囊制剂。按照国家五类新药研制要求，本实验主要从制剂提取工艺、制剂成型工艺及质量控制三方面对五子补肾胶囊进行研究，优选出最佳的制备工艺和成型工艺，建立HPLC指纹图谱制定出合理的质量标准，以供临床用药的安全性、合理性和有效性。为五子补肾胶囊的 开发提供了试验依据。方 法:? 制备工艺和成型工艺的建立:采用L934正交实验 设计，以方中君药淫羊藿药材的主要有效成分淫羊藿苷的含量及提取液得膏率为指 标，优化提取工艺，并经过实验筛选成型填充辅料。? 质量标准的建立:采用薄层 色谱法，分别对制剂中所含淫羊藿、酒苁蓉、锁阳、西洋参药材进行定性鉴别。以 淫羊藿苷的含量作为评价指标，采用高效液相色谱法进行定量分析、方法学研究。 采用HPLC法研究五子补肾胶囊的指纹图谱。结 果:?最佳制备工艺为加10倍量水 /次，煎煮1.5h/次，煎煮3次。药液浓缩至相对密度为1.10(60?)，加入乙醇至含 醇量为70，静臵12h。以淀粉为成型辅料，20目筛网制粒，整粒。?参照《中华人民 共和国药典》2010年版第一部，所选用的这些薄层色谱鉴别方法专属性强，斑点分 离效果好、阴性对照无干扰，因此均可作为五子补肾胶囊的定性分析标准。参照《中 华人民共和国药典》2010年版第一部测定淫羊藿苷含量，色谱柱用十八烷基硅烷键 合硅胶为固定相(250mm×4.6mm，5μm)，流动相:乙腈-水 ， (26:74) 流速: 1.0mL /min，检测波长:270nm，柱温:25?，保留时间约在17min左右，与基线达 。 1本法测定结果准确，操作简便，精密度高，到完全分析，理论塔板数大于10000 可作为淫羊藿苷含量定量分析标准。?建立了HPLC法指纹图谱:采用Dimonsil C1824.6×250mm5μm流动相为乙腈A-0.1磷酸B 梯度洗脱检测波长210nm 流速: 1.0mL/min，分析时间65min，柱温35?，进样量10ul。以淫羊藿苷为参照峰，生成 五子补肾胶囊制剂对照指纹图谱的共有模式，确立了20个共有峰，各共有峰相对保 ，与对照图谱相比较，样品指纹图谱相似度均在0.90以上。留时间的RSD值均小于3 结 论:?优化的制备工艺稳定、可行，简单易行，且精密度高，可用于工业化生产。 ?制剂的质量标准符合药典和新药审批办法中有关中药部分的规定，即可行、可控。 ?通过 HPLC 法测定了制剂中主要有效成分的含量，及其制剂指纹图谱的建立， 初步确定了制剂的质量标准，提出了五子补肾胶囊质量控制方法和评价指标。关键 词:五子补肾胶囊;制备工艺;正交设计实验;质量控制;指纹图谱 2 Study on Preparation Technology and Quality control of Wuzibushen Capsule Abstract Objective: Wuzibushen Capsule is the experience of clinical capsule.Toalleviate kidney deficiency or Yang deficiency induced ED prematureejaculation semen have a very significant effect. It is very popular with themajority of patients welcome. Due to its original form as the pill needed totake a large amount and not so convenient for patients.Andthe preparationprocess and quality standard is curremtly empty.Now it is proposed toconvert it into a capsule preparation. According to the rules for nationalsecond sort new medicine To ensure the effectiveness of clinical and thestability of the quality of the production process，the experiment was studiedthrough extraction technology quality standard and primary stability andoptimized the best preparation process and molding process establishmentHPLC fingerprinting worked out a reasonable quality standards andestimated the degree of stability. The experimental data is very useful for theexploitation of new preparation of Wuzibushen Capsule. Methods: ? To establish the Preparation process and molding processaccording to the L934 orthogonal experimental design the experiment usedIcariin the main effective component of Herba Epimedii which is themonarch drug in the preparation as index to optimize preparation technologyand through the tests we had screening out the filling materials of the capsule.?The establishment of quality standard : TLC had been used to identifyEpimediumCistancheCynomoriumPanax quinquefolium .Taking the content 3of icariin as evaluation index this high performance liquid chromatographymethod had been used for the quantitative analysis and the method research.?Preliminary stability studies: In order to study the preliminary stabilitymultinomial norms had been tested so as to inspect the preliminary stabilityof Wuzibushen capsule. HPLC method was used to study Wuzibushencapsules fingerprint. Results: ?The best preparation process:The optimal extracting conditionwas to add 18 times amount of water and decoct 3 times totally for 1.5 hourseach time. Then condensed the extraction solution to 1.10 60?and add95alcohol to make contain alcohol attain to 70. The filtrate was placed 12hours. Used starch as molding materials and use 20 mesh to preparate andsort particles. ? Refered to the first part of Ch.P in 2010 all of these TLCmethods we used were specific the separation of the stains was apparent andthe negative contrast was not disturbed so all above were served as standardsof qualitative analysis for Wuzibushen Capsule. Refered to the first part ofCh.P in 2010The chromatographic conditions included column C18250mm×4.6mm5μm mobile phase: acetonitrile - water 26:74 the flowrate was 1.0mL.min-1 and monitored at 270nm the column temperature was25? the retention time was about 17min and the theoretical plate numberwere more than 10000. The method was simple time-saving and accurateandcould be used as icariin content quantitative analysis standard.? EstablishedHPLC method for fingerprinting: used Dimonsil C182 4.6×250mm5μmmobile phase :acetonitrile A-0.1 phosphoric acid B gradient elution thedetection wavelength was 210nm flow rate: 1.0mL/min analysis time was65min column temperature was 35? amount of sample10uL. With icariinas a reference peak generating five kidney capsule preparation controlfingerprint common pattern established the 20common peaks the total 4relative retention time of the RSD value was 3 compared with controlmap sample fingerprint similarity was above 0.96. Conclusions: ? The preparation process was stable and suitable forPharmacia production meanwhile it was simple and accurate. ? Thequality standard of the preparation was feasible controllable and reasonable.3 The initial stability of the preparation was sound and provided evidence forthe feasibility of technological and packing materials. ? Through the HPLCmethod for the determination of main effective component content and itspreparation of fingerprinting the initial preparation quality standard wasdetermined and the five kidney capsule quality control method andevaluation index. Was put forward. Key words: Wuzibushen Capsule Preparation process Orthogonalexperiment design Quality control Fingerprint 5 引 言 随着现代生 活节奏的不断加快，各种竞争日趋激烈，环境污染的日趋严重，现代人们精神压力 不断加大，阳痿的发病率也呈现上升势头。这样一种疾病，影响着病患者的生理健 康的同时，也带来了巨大的精神压力，这种精神压力已远远超过其对生理的影响， 甚至可能给整个家庭带来了很大的不利影响。阳痿的治疗，在人们不断追求高物质 生活水平与精神生活水平的今天，已日益受到重视并亟待得到较为有效、经济，可 行的治疗。 五子补肾方来源于民间秘方，亦是柳州市中医院多年来的临床验方。本 方在中医理论的指导下组成，方中药物以补肾为主，具添精补髓，温肾壮阳，补肝 益精等功效，用于肾气亏虚、阳气不足所致的阳痿、早泄、遗精等症。本方长期用 于临床治疗阳痿等症有较好疗效。因原剂型为丸剂，服用量较大，给患者服用带来 诸多不便，因此，本试验拟改剂型为胶囊剂，并对其制备工艺、质量标准和质量控 制方法，指纹图谱进行研究，以期获得合理的制备工艺及可靠的质量标准，确保新 制剂的“安全、有效、稳定、可靠”。 6 正 文 第一部分:五子补肾胶囊提取工艺研究1 实验材料1.1 实验用对照品及药材 淫羊藿苷对照品(批号110737-200415;供含量测定用，中国药品生物制品检定所) 淫羊藿:批号110517，产地为四川;锁阳:批号110413，产地为内蒙古;牛大力:批号110115，产地为广西;韭菜子:批号110404，产地为广西;酒苁蓉:批号110524，产地为内蒙古;菟丝子 : (盐制) 批号110701，产地为河北;熟地黄，批号110531，产地为山西;补骨脂:批号110712，产地为四川;沙苑子，批号110531，产地为陕西;雄蛹:批号110721，产地为广西;车前子，批号110609，产地为江西;山茱萸，批号110222，产地为陕西;金樱子，批号110711，产地为广西;西洋参，批号110528，产地为吉林;仙茅，批号110413，产地为四川;狗脊，批号110422，产地为广西;枸杞子，批号110701，产地为宁夏;杜仲，批号110610，产地为四川; 以上药材均购于南宁生源中药饮片有限责任公司，经广西一心药业马利飞副主任药师鉴定，均符合 2010 年版中国药典饮片药材的要求，均为正品。1.2 实验主要仪器及试剂 101A-3E 电热鼓风干燥箱(上海实验仪器有限公司); BP211D 电子天平(德国赛多利斯);Agilent8453 分光光度计; ; 电磁炉(美的) 高效液相色谱仪:美国 Agilent 1100分析软件为 Agilent 色谱工作站 7数据处理系统 水为纯净水，乙腈为色谱级别，其他如甲醇等均为分析级别用试剂。2 实验方法2.1 处方研究与分析2.1.1 处方组成 淫羊藿、锁阳、牛大力、韭菜子、酒苁蓉、西洋参等十八味药材。2.1.2 提取工艺分析(1)提取方法的确定: ?方中淫羊藿为本方君药。淫羊藿主要含的有效成分为淫羊藿苷等黄酮苷类成分。药理研究表明:淫羊藿对生殖系统作用的主要药效成分为黄酮苷类成分。黄酮苷类成分可溶于乙醇、热水等。影响淫羊藿有效成分提取的主要因素一般为提取方法(水提法或醇提法)、乙醇浓度、溶剂用量、药材的粉碎度、提取次数、提取时间等。文献研究 1以淫羊藿苷含量为指标对淫羊藿总黄酮的提取工艺进行了研究，以淫羊藿叶 500g用水提取工艺提取收率 2.767 g有效成分含量 0.5534 经济成本 88 元 而用醇提取法提取收率 3.1395 g有效成分含量 0. 6279 经济成本 188 元。可以看出两工艺有效成分含量相差 0.0745 而经济成本相差 100 元且醇提法设备要求高从工艺成本分析水提法优于醇提法。并得出适合大生产的最佳工艺参数即加 20 倍水浸泡 1. 5 h煎煮 2 次每次煎煮 1 h。故本实验中淫羊藿宜用水煎提取。 方中菟丝子含有槲皮素、菟丝子苷等黄酮苷类化合物及生物碱类和皂苷类成分，相关文献表明用其水煎液培养 10 天能明显增加黑腹果蝇交配次数，故菟丝子宜采用水煎煮。锁阳含花色苷、三萜苷等黄酮类成分，牛大力根含蔓性千斤拔素等多种黄酮类成分，肉苁蓉含多种环烯醚萜类化合物，葡萄糖苷等成分。杜仲、熟地均含黄酮类成分，金樱子含有萜甾醇类化合物。根据处方中所含有的化合物成分大多溶于水的性质，并 8结合制剂生产的可行性以及成本，通过群药(西洋参除外)共煎可提取出有效成分，故拟以水作为提取溶剂。 ?西洋参系贵重药材，主要含有人参皂苷类成分，既溶于水又溶于醇，但由于水提取时由于酶的作用可引起人参皂苷类成分水解，而醇提则可抑制酶的活性，且其提取效率较高，同时参照 2010 年版中国药典及大量参考文献，采用乙醇提取。(2)提取液精制、纯化方法的确定: 水提时，药材中含较多的粘液质、淀粉、脂质等其他成分与有效成分一并溶出。有文献2采用醇沉法、超滤法、大孔树脂法和吸附澄清法对淫羊藿的水提取液进行精制工艺的研究，结果是醇沉法所得淫羊藿苷的含量最高，大孔树脂法略低，超滤法极低。按对有效成分影响 最小的，选用能溶解方中大多数有效成分而不溶解粘液质、淀粉等非药用成分的溶媒——乙醇去除杂质。而为避免在醇沉过程中对有效成分造成的大量损失，故需要优选水提取液的最佳醇沉条件。2.1.3 考察指标的选择 根据传统中医药理论，按照君、臣、佐、使的配伍原则，以有效化学部位或君、臣药中某一理化性质相对稳定且易于检测的主要化学成分作为含量测定指标，从而构成工艺评价指标，建立测定方法。 通过文献资料知，淫羊藿苷是淫羊藿中的主要有效成分，现代药理学研究，淫羊藿苷具有抗肿瘤、增强免疫功能、改善心脑血管功能、调节内分泌等多重药理学作用。其中对生殖系统的影响是淫羊藿苷药理作用的一个重要方面，其能明显促进幼年小鼠附睾及精.