高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定盐酸大观霉素的含量

高效液相色谱-蒸发光散射法测定盐酸大观霉素的含量 高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定盐酸 大观霉素的含量 4天津药学TianjinPharmacy2004年8月第l6卷第4期 药品质量与检验 高效液相色谱一蒸发光散射检测法测定盐酸大观霉素的含量 吴燕,郭成明,张胜强 (1.天津市药品检验所.天津300070;2.中国药科大学,南京210009) 摘要目的:应用高效液相色谱一蒸发光散射检测(HPLC/ELSD)法分析盐酸大观霉素含量.:采用Diamonsl (钻石)C色谱柱(250mm×4.6mm,5m);流动相:0.02mol/I三氟醋酸水溶液一乙腈(99:1);检测器条件,漂移管温度 为5Oc.雾化气体(空气)压力为3.0bar.结果:盐酸大观霉素在2.725,l0.904g范围内,进样量对数值与峰面积对数值 呈良好的线性关系;理论板数以大观霉素峰计算为5lOO.结论:本方法操作简单,准确性,重现性好,与微生物效价法比较, 测定大观霉素含量无显着性差异,可用于盐酸大观霉素成品的质量控制. 关键词盐酸大观霉素,高效液相色谱,蒸发光散射检测器,含量测定 中图分类号:R927.2文献标识码:A文章编号:l0065687(2004)04—0004—03 ContentdeterminationofspectinomycinhydrOchIOrjdebyHPLCwithELSD WuYan,GuoChengming,ZhangShengqiang (1.TianjinInstituteforDrugControl,Tianjin300070,China;2.ChinaPharmaceuticalUniver sity,Nanjing210009,Chi— na) ABSTRACTObject:ToestablishanHPLC/ELSDmethodforthecontentanalysisofspectin omycinhydrochloride.Meth— ods:TheseparationwasperformedonaDiamonsilC18column(150mm×4.6mm,5m).Themobilephaseconsistsof 0.02mol/LTFA--acetonitrile(99:1,v/v).Thetemperatureofthedrifttubewassetat50~(2,and thegaspressurewas3. 0bar.Results:Intherangeof2.725, 10.904g,therewasagoodlinearrelationshipbetweenthelogvalueoftheinject quantitiesandthelogvalueofthepeakareas.Thenumberoftheoretica1platescalculatedonsp ectinomycinpeakwas 5100.Conclusion:Themethodwassimple,accurateandhighlyreproducible.Therewasnosi gnificantdifferencebetween theHPLC/EI,SDandbiologicalmethodincontentanalysisofthesample.Thismethodissuita bleforqualitycontrolof spectinomycinhydrochloride. KEYWORDSspectinomycinhydrochloride,HPLC,Evaporativelight— scatteringdetector,contentdetermination 盐酸大观霉素作为临床上重要的抗菌药物,对其 质量的控制直接关系到临床的用药安全n].其含量测 定方法,《中国药典})2OOO年版采用微生物效价法, 《欧洲药典》(EP)2002年版均 《美国药典》(USP)26版, 采用衍生化气相色谱法L3";盐酸大观霉素易溶于水, 在水中以药物阳离子的形式存在,极性强,在通常的反 相色谱系统ODS柱上保留差,而且盐酸大观霉素仅在 紫外区末端200nm附近有吸收,使用通常的紫外检测 器检测较困难,这两方面限制了HPLC—UV法在大观 霉素质量分析中的应用.本文参考有关文献,引入蒸发 光散射检测器作为检测手段],同时在流动相中添加 离子对试剂,建立了盐酸大观霉素含量的HPLC/ ELSD法.实验明,本方法简便,快速,结果准确. 1仪器与材料 岛津LC一10A高效液相色谱系统;SEDEX75型 }收稿Ft期:2004—04—16 作者简介:吴燕,女(1972--),主管药师,从事药品分析检验. 蒸发光散射检测器;XwK—A小型无油空气泵.大观霉 素品(0354—200001,657t~g/mg,中国药品生物制 品检定所提供);盐酸大观霉素,国内药厂提供;三氟醋 酸(USP,TEDA公司产品);乙腈,色谱纯;水为自制重 蒸水. 2方法与结果 2.1色谱条件色谱柱:DiamonslTMC18柱(250mmx 4.6mm,5m);流动相:0.02mol/L三氟醋酸水溶液一 乙腈(99:1);检测器条件,漂移管温度:50?,雾化气 体(空气)压力为3.0bar,灵敏度gain=6;流速:0.6 ml/min;进样量:20l.标准品和样品色谱图,见图1. 2.2溶液制备 2.2.1线性试验用标准品储备液取大观霉素标准 品50mg,精密称定,置50m1量瓶中,加水稀释至刻 度,摇匀,即得. 天津药学TianjinPharmacy2004年8月第16卷第4期 2.2.2含量测定用标准品溶液分别精密量取标准 品储备液2,4,5,6和8ml,分别置于10ml量瓶中,加水 稀释至刻度,制成浓度分别为0.2,0.4,0.5,0.6和0.8 mg/ml的溶液,摇匀,即得. 2.2.3供试品溶液取盐酸大观霉素样品25mg,精 密称定,置50ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得. 2.3实验方法的验证 2.3.1线性试验精密量取标准品贮备液2,4,5,6和 8ml,分别置于10ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀, 依"2.1"项下色谱条件分别进样201分析,大观霉素 进样量在2.725410.90gg范围内,大观霉素峰面积对 数(x)与大观霉素进样量对数(y)线性相关Y= 0.6775一3.826,r一0.9997 O20o20 ,/min A ,/min B 1.盐酸大观霉幕 图1标准品(A)样品(B)色谱图 2.3.2稳定性试验将大观霉素供试品溶液(0.5 mg/m1)室温下放置,分别于0,2,4和6h测定,含量分 别为66.49/6,64.4,63.3和62.5.结果表明,供试 品溶液在6h内基本稳定. 2.3.3重复性试验日内精密度:取供试品溶液(O.5 mg/m1),依"2.1"项下色谱条件,1日内测定5次,结果 分别为68.8,68.4%,68.2%,70.59/6和67.6, RSD一1.57(,2=5);日间精密度:取样品3批,分别 制备供试品溶液(t0为0.5mg/m1),依"2.1"项下色谱 条件,均于2日内测定,结果表明,该方法重复性好, 见表1. 2.4样品含量测定取"2.2.2"项下制备的标准品溶 液,依"2.1"项下色谱条件,分别进样20l,以大观霉素 峰面积对数为横坐标x,大观霉素进样量对数为纵坐 标y,建立标准曲线;取"2.2.3"项下制备的样品溶液, 依"2.1"项下色谱条件,分别进样201分析,依 "2.3.1"项下标准曲线计算样品含量,结果以t*g/mg 计,并将本方法与药典方法(微生物效价法)测定结果 相比较,见表2. 表1盐酸大观霉素样品含量测定日间精密度考察 表2样品含量测定结果比较(=2) 批号微生物效价法 (tzg/mg) HPLC/ELSD法 (tzg/mg) 2.5方差分析对微生物效价法和HPLC/ELSD法 的含量测定结果进行方差分析,F<F一,两方法无显 着性差异(P>0.05),见表3. 表3方差分析表 3讨论 3.1流动相的选择选用三氟醋酸(TFA)水溶液与 一 定比例的乙腈作为流动相,进行样品的含量测定.一 方面酸性流动相更有利于样品的离子化,另一方面 TFA提供的三氟醋酸根阴离子与药物阳离子形成的 乙腈作 离子对,可有效地增强药物在色谱柱中的保留.为改性剂的加入,由于其较强的溶剂化作用[g],在适当 的比例条件下,不但可缩短药物的分析时间,而且不影 响色谱分离效果.经比较,为一种优于甲醇的色谱改性 剂.曾分别以0.02,0.05,0.1和0.3mol/LTFA水溶 液单独作流动相,试验中发现,随着流动相中TFA浓 度增加,药物的保留时间与主峰的理论板数均增大;当 到达一定值后,再提高TFA浓度,则保留时间逐渐下 降,理论板数趋于不变.经比较,最终确定大观霉素含 6天津药学TianjinPharmacy2004年8月第16卷第4期 量测定的流动相为0.02mol/lTFA一乙腈(99:1). 3.2蒸发管温度的选择气体压力3.0bar.灵敏度 不变,改变蒸发管温度,结果见表4. 表4蒸发管温度变化对色谱分离的影响 综合检测灵敏度与柱效(理论板数)两因素,选定 蒸发管温度为5O0C. 3.3雾化气体压力的选择蒸发管温度50.C,灵敏度 不变,改变雾化气体压力,结果见表5. 表5雾化气体压力变化对色谱分离的影响 在保证较低噪音水平的基础上获得较大的色谱响 应n.同时综合考虑柱效(理论板数),雾化气体压力 选定3.0bar. 3.4应用HPLC/ELSD法测定盐酸大观霉素样品含 量,经与微生物效价法比较,两者相关性较好,方法间 无显着性差异,理论上HPLC/ELSD法可替代微生物 效价法,用于样品的含量测定.HPIC/ELSD法操作简 便,省时,结果重现性好.克服了微生物法试验周期长, 结果波动性大的不足,可有效地监控产品质量. 参考文献 赵敏,氨基糖苷类抗生素的发展现状和展望一暨全国氨基糖苷类抗 生素科研,生产和临床应用学术研讨会.中国抗生素杂志,1999,24 (4):319 中国药典.二部.2000.547-548 美国药典.第26版.17081709 欧洲药典.2002.1433—1434 InchauspeG.DelrienP,Mechanismofselectivityinionpairhigh— performanceliquidchromatographyofaminoglycosidesantibiotics usingperfluorinatedpairingions.JChromatogr,1987.404:53 王明娟,胡昌勤,金少鸿.采用HPLCELSD法分析小诺霉素及其 有关物质.药物分析杂志,2002,22(3):205 王明娟,胡昌勤,金少鸿.高效液相色谱一蒸发光散射检测法分析庆 大霉素C组分.药物分析杂志,2002,22(6):461 王明娟,胡昌勤,金少鸿.氨基糖苷类抗生素在蒸发光散射检测器中 相应因子的一致性考察.药学,2002,37(3):204 安登魁,张正行,盛龙生.药物分析.济南出版社,I992.480—484 冯埃生,邹汉法,汪海林.影响高效液相色谱/挥发激光散射检测器 检测性能基本因素的考察.药物分析杂志,1996,16(6):414 反相高效液相色谱法测定地塞米松中有关物质 霍秀敏,樊清扬 (天津市药品检验所,天津300070) 摘要目的:建立反相高效液相色谱法测定地塞米松中有关物质的方法.方法:采用HypersilBDSphenyl为固定相 (4.6mm×250mm,5um),柱温4O.c,以乙腈一0.02mol/I甲酸铵缓冲液(用甲酸溶液调节溶液至pH一3.6)(22:78)为流 动相,流速1.0ml/min,检测波长254nm.结果:地塞米松在5.04,151.2gg/ml浓度范围内与峰面积呈良好线性关系,回 归方程:Y一15.492X一0.9967,r一0.9999.结论:该方法专属性强,较薄层法简便,快速,结果准确,适用于地塞米松的 质量控制. 关键词反相高效液相色谱法,地塞米松,有关物质 中图分类号:R927.2文献标识码:A文章编号:1006—5687(2004)04—0006—03 DeterminationofdexamethasonebyRP—HPLC HuoXiumin,FanQingyang (TianjinInstituteforDrugControl,Tianiin300070,China) ABSTRACTObject:ToestablishanHPLCmethodforthedeterminationofdexamethasone. Methods:TheHPLCsepara 收稿日期:2004—03—17 作者简介:霍秀敏,女(1954一),副主任药师,从事药物分析研究. 6789O