(组织、生乳、全蛋)-RS-奎诺酮酶联免疫检测试剂盒

(组织、生乳、全蛋)-RS-奎诺酮酶联免疫检测试剂盒 RS—QNS—18 广州瑞森生物科技有限公司 喹诺酮类(Quinolones)酶联免疫检测试剂盒说明书反应原理洛美沙星 …………………………………………31% 喹诺酮类(Quinolones，QNS)酶联免疫检测试剂盒，主要是依诺沙星 …………………………………………25% 利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的基本原理来进行的，氟罗沙星 …………………………………………15% 换句话说，就是利用酶标记物与样品中的喹诺酮与微孔中的抗左氧氟沙星…………………………………………9% 体进行竞争反应。在整个反应当中，如果样品中的喹诺酮残留色拉沙星 …………………………………………4% 的越多，相对地就会竞争反应越多的酶标记物，使得能结合上萘啶酸………………………………………………6% 抗体的酶标记物相对地减少，用TMB底物显色，样品中的喹诺 酮含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出喹回收率: 诺酮含量。 生乳………………………………………70~130% 鱼肉………………………………………70~130% 【试剂盒组份】 鸡肉………………………………………70~130% 1、酶标板:8孔/条，12条/板 虾…………………………………………70~130% 2、喹诺酮标准溶液(1.5 mL / 瓶):0 ppb、0.3 ppb、1.1 ppb、猪肉………………………………………70~130% 3.3 ppb、10 ppb、30 ppb; 100ppb 养殖水………………………………………70~130% 3、10倍浓缩萃取稀释液 …………………………… 50 mL 全蛋………………………………………70~130% 4、10倍浓缩清洗液………………………………… 50 mL 批间、批内变异系数:CV?10% 5、200倍喹诺酮酶结合物………………………… 0.1 mL 6、显色液 ………………………………………………12 mL 【所需仪器和试剂】 7、反应终止液 …………………………………………13 mL 所需仪器:酶标仪、离心机、均质机、微量移液器(单道 20µl-200µl、100µl-1000µl、多道250µl) 【试剂盒技术指标】 所需试剂: 试剂盒灵敏度: 0.3ppb 、分析级甲醇:1 样本检测下限: 甲醇甲醇×萃取稀释液 80%: 100% 80ml + 120ml 生乳…………………………………………………2 ppb 甲醇甲醇×萃取稀释液70%: 100% 70ml + 130ml 鱼肉……………………………………………… 0.45 ppb 甲醇甲醇×萃取稀释液 60%: 100% 60ml + 140ml 甲醇甲醇×萃取稀释液 55%: 100% 55ml + 145ml 鸡肉 ………………………………………………0.45 ppb 甲醇甲醇×萃取稀释液 25%: 100% 25ml + 175ml 虾 ………………………………………………0.45 ppb 甲醇甲醇×萃取稀释液 8%: 100% 2ml + 123ml 猪肉……………………………………………… 0.45 ppb 甲醇甲醇×萃取稀释液 4%: 100% 1ml + 124ml 全蛋……………………………………………… 2 ppb 、正己烷2 交叉反应率: iii.(Analyzed Ethanol) 分析级乙醇恩诺沙星……………………………………………100% 35%: 100% 35ml + 1x65ml 环丙沙星……………………………………………102% 乙醇乙醇提取液培氟沙星……………………………………………85% 诺氟沙星……………………………………………70% 单诺沙星……………………………………………65% 【样本前处理 氧氟沙星……………………………………………60% 样品处理前须知: 恶喹酸 ……………………………………………55% (1)实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换 吸头。 氟甲喹 ……………………………………………50% (2)实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验加替沙星……………………………………………47% 器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。 地址:广州市番禺区市新路新水坑 电话:020,34697803 传真:020,34697836 E,mail :ruisenbiotech@163.com RS—QNS—18 样品处理 : 底部以1×萃取稀释液再稀释1.5倍(即上层液200μL加 原倍萃取稀释液100μL)。 本试剂可检测生乳、鸡肉、猪肉、鱼、虾全蛋等残留之喹 , 检品敏感度:1.5 ppb 诺酮类抗生素: , 稀释倍数:4.5 、待测物为生乳，则依以下方法进行处理1 1 ml20 (3500 取之待测生乳以离心机离心分钟, 方法二: rpm) 200uL35%，吸取中间液体层，并加入乙醇1.将1g已均质样品放入15 mL离心管中，再加入3 mL 60%800uL5 稀释倍。甲醇，震荡混合约1分钟，再以上下转动充分混合约10 检品敏感度:, 2 ppb 分钟 稀释倍数:, 5 2.以离心机离心15分钟(3000 rpm)，取1 mL上层液,60% 甲醇,至10mL玻璃管中，于50?下，利用氮气将有机溶2、待测物为鸡肉或猪肉或鱼类样品，分别依感度需求以下列方剂吹干。 法择一进行: 3.于此玻璃管中加入加入0.5mL 8%甲醇，先将残余物完全方法一: 溶解后(若未能完全溶解，可能会导致回收率降低)，再加1.将2g已均质样品放入15 mL离心管中，再加入4mL 25%入正己烷1mL，震荡混合约20~30秒钟。 甲醇及1N NaOH 50uL，震荡混合约1分钟，以60?隔4.以离心机离心15分钟(3000 rpm)，利用吸管吸去包含 水加热约10分钟，再以上下转动充分混合约10分钟。 中间乳化层部分的上层液,正己烷,，再吸取下层液备用。 2.以离心机离心15分钟 (3500 rpm) ，再吸取上层液中的, 检品敏感度:0.45 ppb 底部以1×萃取稀释液再稀释1.5倍 (即上层液200 μL, 稀释倍数:1.5 加1×萃取稀释液100 μL)。 4、待测样品为养殖水 检品敏感度:, 1.5ppb 取15ml养殖水于50ml离心管中，4000rmp/min离心10 分钟。用离心后的养殖水上清液将10倍的样品稀释液，稀释, 稀释倍数:4.5 成1倍的溶液 (9体积养殖水和1体积10倍浓缩样品稀释 液)，混匀待检。 方法二: , 检品敏感度:0.3 ppb 1.将1g已均质样品放入15 mL离心管中，再加入3 mL 80% , 稀释倍数:1.1 甲醇，震荡混合约1分钟，再以上下转动充分混合约10 分钟。 待测物为全蛋，则依以下方法进行:, 5. 以离心机离心分钟()，取上层液(2.153000 rpm1 mL80%将已均质之全蛋放入离心管中，再加入, i.1g15 mL3 甲醇)至玻璃管中，于下，利用氮气将有机10 mL50 ?甲醇,,，并震荡混合,,mL 70%Methanolvortex溶剂吹干。 约分钟。1 于此玻璃管中加入加入甲醇，先将残余物完全3.0.5 mL 4%以离心机离心分钟,,，再吸取上层液, ii.153500 rpm 溶解后(若未能完全溶解，可能会导致回收率降低)，再至干净离心管中，并以提取液再稀释倍,即1X1.5 加入正己烷，震荡混合约秒钟。1mL20~30 上层液加原倍提取液,。200μL100μL 以离心机离心分钟()，利用吸管吸去包含中检品敏感度4.153000 rpm, : 2 ppb 稀释倍数, : 6 间乳化层部分的上层液,正己烷,，再吸取下层液备用。 检品敏感度:, 0.45 ppb 注:若萃取过程中乳化现象太严重，看不到下层液有澄清部稀释倍数:, 1.5 分，请先将玻璃管中大部分上层液(正己烷)取出，剩余乳 3. 待测物为虾，则依以下方法进行萃取: 化部份再利用隔水加热?约分钟后，即可大幅改善80~1003方法一: 乳化现象。 1.将2g已均质样品放入15 mL离心管中，再加入4 mL 55% 甲醇，震荡混合约1分钟，再以上下转动充分混合约10【检测程序】 分钟。 1、将标准品(0 ppb、0.3 ppb、1.1 ppb、3.3 ppb、10 ppb、2.以离心机离心15分钟(3500 rpm)，再吸取上层液中的30 ppb)对应微孔按序编号后分别分别加入100 µL喹诺酮标准地址:广州市番禺区市新路新水坑段6号B座5楼 电话:020,34697803 传真:020,34697836 E,mail :ruisenbiotech@163.com RS—QNS—18 溶液。 使用。 (如1 mL浓缩稀释液加9 mL蒸馏水) 稀释后的原倍萃 2、在其他的微孔加入100 µL已完成前处理的样品溶液。 取稀释液和原倍清洗液可于4 ?保存一周。 3、再于每一微孔另加入50 µL已稀释的喹诺酮酶标记物(参4、原倍喹诺酮酵素结合体配制: 见注意事项4)。 请用原倍萃取稀释液将200倍喹诺酮酶结合物以200倍稀 4、轻敲酶标板四周，使其充分混合后于室温下避光静置50释即完成原倍酵素结合体配制。亦即采用浓缩200倍喹诺酮酶分钟。 结合物0.1ml+1×萃取稀释液19.9ml比例稀释;请在进行上盘 5、将微孔中的反应液甩掉，再将已稀释清洗液(参见注意事测试前方可稀释，过早稀释易造成数据偏差。 项3)加满每一微孔后甩掉，重复3次。 5、萃取流程请使用P.P.材质的15 mL离心管以免腐蚀。 6、最后一次甩掉清洗液后，在吸水纸上拍干。 6、反应终止液含0.5 N HCl，请小心操作。 7、于每一微孔加入显色液100 µL后，轻敲酶标板四周，使其7、本试剂盒的所有试剂出厂前均做过完整的测试，请使用试剂充分混合。 盒提供的药品及试剂，勿任意更换。 8、于室温下避光静置20分钟。 8、ELISA所得的喹诺酮浓度若低于该样品检品敏感度即可视为 9、加入反应终止液，每一微孔加入100 µL。该样品背景值，无须回乘稀释倍数。反之若所得的喹诺酮浓度 10、酶标仪以单波长450 nm或双波长450 nm / 650 nm读值。 若高于该样品检品敏感度，即可能为喹诺酮阳性样品，建议使 用再其它检测方法检测，如GC/MS等。 【结果判定】 9、进行生乳的检品制备时，在ELISA操作时中请确实轻敲酶 标板一到二分钟(D.操作步骤的第四点)。 1、定性判定: 用样品的平均吸光度值与标准值比较即可得出样本所含喹 诺酮类浓度范围(ng/ml)。假设样品1的吸光度值为0.313， 样品2的吸光度值为1.032，标准液吸光度值分别是:0ppb为 1.892;0.3ppb为1.501;1.1ppb为1.175;3.3ppb为0.751; 10ppb为0.421; 30ppb为0.198。则样品1的浓度范围 10ppb-30ppb;样品2的浓度范围1.1ppb-3.3ppb。(再乘以相 【规 格】 96T 应的稀释倍数) 【贮 藏】 2,8?，避光保存 2、定量判定: 【有 效 期】 一年 (生产日期及批号见包装盒) 所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值(B)除 【生产企业】 广州瑞森生物科技有限公司 以第一个标准(0标准)的吸光度值(B0)再乘以100%，即 【地 址】 广州市番禺区市新路新水坑段6号B座5楼 百分吸光度值。 【电 话】 020,34697803 B 百分吸光度值(%), ×100% 【传 真】 020,34697836 B0 B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值 B0—0ng/ml标准溶液的平均吸光度值 以标准品百分吸光率为纵坐标，以喹诺酮标准品浓度(ng/ml) 的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代 入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其 对应的稀释倍数，然后除以相应交叉率即为样本中相应喹诺酮 类的实际浓度。 若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样品的准确、 快速分析。 【注意事项】 1、使用前请先将试剂盒回温至室温 (置于室温60分钟以上)， 各溶液皆摇匀后方可使用。 2、回温后，取出所需酶标板条，将剩余未测的ELISA孔条立 即放回铝箔袋中，置于4 ?保存。 3、10倍萃取稀释液与10倍清洗液请用蒸馏水稀释10倍方可 地址:广州市番禺区市新路新水坑段6号B座5楼 电话:020,34697803 传真:020,34697836 E,mail :ruisenbiotech@163.com