高效液相色谱法测定复方黄芪颗粒中黄芪苷含量

高效液相色谱法测定复方黄芪颗粒中黄芪苷含量 高效液相色谱法测定复方黄芪颗粒中黄芪 苷含量 摘 要,本文采用高校液相测定了复方黄芪颗粒中黄芪苷的含量,固定相为,安捷伦Cl8,4.6mm×250mm,5um,,乙腈-水,23?77,,用冰醋酸调pH至3.85,为流动相,检测波长为346nm,流速1.0mL?min-1,柱温,30?。黄芪苷在50,500μg?mL-1范围内呈良好的线性关系。黄芪苷的平均回收率为99.5%,RSD为0.73%,n=6,,此方法简便、准确、重现性好,可用于复方黄芪颗粒中黄芪苷的含量测定 关键词,复方黄芪颗粒,黄芪苷,含量 黄芪为复方黄芪颗粒主要成分之一。黄芪具有补气固表,利尿托毒,排脓,敛疮生肌的功效。黄芪常用于气虚乏力,便血崩漏,表虚自汗,食少便溏,久泻脱肛,痈疽难溃,久溃不敛,中气下陷,血虚萎黄,内热消渴等。但食积停滞,表实邪盛,气滞湿阻,痈疽初起或溃后热毒尚盛等实证,以及阴虚阳亢者,均须禁服黄芪。《药品化义》记载,”若气有余,表邪旺,腠理实,三焦火动,宜断戒之。至於中风手足不遂,痰壅气闭,始终皆不加。”现在药理研究表明黄芪具有增强机体免疫功能、调节血压、抗病毒性心肌炎、增强造血 1 功能、改善物质代谢、增强性腺功能、抗应激、延缓衰老、保肝、抗溃疡等作用[1-5]。黄芪临床常用于高血压病、缺血性心脏病、银屑病、糖尿病、幽门螺旋杆菌阳性胃溃疡、慢性鼻炎、急性肾小球肾炎、骨质疏松等。本文采用高校液相测定了复方黄芪颗粒中黄芪苷的含量 1 仪器与试药 HH-601超级恒温水浴,江苏金坛市亿通电子有限公司,,海能LC7000四元低压梯度系统,济南海能仪器股份有限公司,,屹谱仪器U-1810准双光束紫外可见分光光度计,屹谱仪器制造,上海,有限公司,,UV-6双光束扫描型紫外可见分光光度计,上海美谱达仪器有限公司,,舜宇恒平AE电子天平,上海舜宇恒平科学仪器有限公司,,Histoon Lab I-05 实验室超纯水机,科尔顿,中国,有限公司,,10升数控型超声波清洗器,天津市瑞普电子仪器公司,。黄芪苷对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈,河南巴福斯化工产品有限公司,、乙醇,河南巴福斯化工产品有限公司,、磷酸,淄博丰仓化工有限公司,、甲醇,天津威赛诺科技发展有限公司,、冰醋酸,济南英出化工科技有限公司,、磷酸氢二钠,济南英出化工科技有限公司,、三乙胺,河南巴福斯化工产品有限公司, 2 含量测定 2.1 色谱条件,依据查阅文献及考查的结果 ,确定色谱 2 条件如下。色谱柱为安捷伦Cl8规格为,4.6 mm×250 mm,5um,,乙腈-水,23?77,,用冰醋酸调pH至3.85,为流动相,检测波长为346nm。理论板数按黄芪苷峰计算应不得低于2000 2.2 供试品溶液的制备 取复方黄芪颗粒,研细,精密称取,加60毫升50%乙醇溶液超声处理0.5小时,放冷,滤过,滤液置100ml量瓶中,用50%乙醇溶液分次洗涤容器和残渣,洗液滤人同一量瓶中,加50%乙醇溶液至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得 2.3 对照品溶液的制备 精密称取黄芪苷对照品约5mg,用流动相溶解并稀释成每1ml中含200μg的溶液,作,槎哉杖芤骸, 2.4 阴性溶液的制备 依照处方取五味子、补骨脂、女贞子等,按样品制备工艺制成阴性对照样品,照供试品溶液的制备方法制成阴性液,依上述方法测定,结果在黄芪苷出峰处阴性液无色谱峰,结果阴性试验没有干扰,表明本方法专属性良好 2.5 准曲线的制备 制备浓度为50、100、150、200、250、300、350、400、450、500μg?mL-1的对照品溶液,分别精密吸取10μL注入HPLC,记录色谱图。以峰面积积分值A,μg,为横坐标, 3 进样量为纵坐标,绘制标准曲线,计算回归方程。试验表明,黄芪苷对照品在50,500μg?mL-1范围内线性关系良好 2.6 精密度试验 依照2.3项下制备对照品溶液,精密吸取黄芪苷对照品溶液10μL重复进样6次,测定峰面积积分值,对照品峰面积积分值的RSD为0.76%。结果表明,本实验精密度良好 2.7 重现性试验 称取同一批的复方黄芪颗粒样品6份,按测定方法项下的方法制备供试品溶液,测定含量,并计算样品的RSD值,结果RSD为0.65%,结果表明此方法的重现性良好 2.8 稳定性试验 依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液,分别在0,2,4,8小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪,进样测定,供试品黄芪苷峰面积积分值的RSD为0.73%。结果表明黄芪苷至少在8小时内稳定 2.9 回收率试验 采用加样回收试验,取已知含量的同一批供试品各6份,精密称定,分精密添加一定量的黄芪苷对照品,按供试品制备所述方法制备供试品溶液,测定含量,同时测定样品含量,,计算回收率。6次测定的平均回收率为99.5%,RSD为0.73% 2.10 样品含量测定 4 依照上述含量测定方法,测定复方黄芪颗粒三批样品中黄芪苷的含量,含量为3.26mg/袋、3.16mg/袋、3.34mg/袋 3 讨论 分别考察乙腈-水,23?77,,用冰醋酸调pH至3.85,,甲醇-水-冰醋酸,28?72?0.1,,水-甲醇-三乙胺,60?40,0.01,,乙腈-0.08%磷酸溶液,20,80,,磷酸盐缓冲液,取磷酸二氢钠二水合物15.04g、磷酸氢二钠0.0627g,加水溶解并稀释至1000ml,调节pH值至4.5,一甲醇,70,30,不同比例的流动相,结果以乙腈-水,23?77,,用冰醋酸调pH至3.85,为流动相,供试品各峰分离效果最好,故选用乙腈-水,23?77,,用冰醋酸调pH至3.85,为流动相。此方法简便、准确、重现性好,可用于复方黄芪颗粒中黄芪苷的含量测定。复方黄芪颗粒中黄芪苷的含量应为标示量的95%-105% 参考文献 [1]黄芪注射液对新生儿缺氧缺血性脑病的临床与免疫学机制研究[J].卓名,陈鸿莲,蔡娜丽,张振英,叶国杰.中国中西医结合急救杂志.2008,01, [2]黄芪注射液对血液透析患者氧化应激状态的影响[J].曲晓璐,戴芹,唐咏华,徐达华,吴中华,苑松荣,葛秀萍.中国中西医结合肾病杂志. 2008,01, [3]黄芪多糖对人心脏微血管内皮细胞增殖及再灌注后内 5 皮细胞与中性粒细胞黏附的影响[J].陈立新,朱海燕,朱陵群,谢连娣,林钦,张颖.中国组织工程研究与临床康复.2007,27, [4]黄芪多糖对浆细胞样树突状细胞功能及成熟的影响[J].刘立民,张彦明,陆沭华,孙雨梅,何广胜.中国免疫学杂志.2010,08, [5]黄芪注射液对肾病综合征患儿血生化和免疫球蛋白的影响[J].林飞进,黄金城,崔敏娴.中国中西医结合肾病杂志.2008,01, 6