【doc】特异性神经元抗核抗体—Hu抗体的研究

【doc】特异性神经元抗核抗体—Hu抗体的研究 特异性神经元抗核抗体—Hu抗体的研究 特异性神经元抗核抗体 ,f1) Hu抗体的研究 型出叫,如M牛.2 ? 积为擦讨Hu抗体在神经系统副肿瘤综合征(PsNs)发病中的作用用亲各免妊细胞 组织 "疆稿理抖够二=====絮……m…酬一 神经系统副肿瘤综合征(paraneoplastic syndromesofthenervoussystem,PNSNS)系指 好发于某些癌症的神经系统综合征.它既非癌 肿的直接侵犯,压追和转移,也非癌肿引起的代 谢障碍,感染,血管性疾病恶病质及各种治疗 如化疗,放疗的并发症等所致.近年由于发现了 特异性的神经元抗核抗体(Hu抗体)而认为此 病与自身免疫有关.应用先进的亲合免疫细胞 组织化学ABC法和免疫印迹技术,我们发现 17例PNSNS患者体内存在高滴度Hu抗体, 现报告如下. 作者单位:233004蚌埠医学院附属医院神经内科(陈齐 鸣,柬文奠,温伟);法国巴黎话里学医学院 SAIPETRIERE医院神经内科(Delat~rejY,Po[sso~M) 对象和方法 ,临床资料 1.PNSNS患者组:l7倒患者中.男10例. 女7例}年龄35,78岁,平均60岁l7例中小 细胞肺癌13例,肺腺癌,前列腺癌,乳腺癌,卵 巢癌各l例13例患者在癌前期或潜伏期出现 PNSNS症状,间隔时间最长达5年例5于 1985年出现智力下降,言语缓慢.1990年症状 恶化并检出Hu抗体,而后活检证实为左下叶 小细胞肺癌;倒6于l988年lo月出现记忆障 碍和观念运动性迟缓,1990年9月尸检时才发 现小缅咆肺癌饲13于1990年10月突然出现 走路不稳,数天后追使卧床不起,不能维持站立 卵 l, ,. t,( ? 山华经辑杂志09B年^月第29卷第3朗 或坐位姿势.病情维持不变4个月后突然出现 记忆力下降和行为异常,随地小便.检查患者有 近记h己力障碍,定向障碍伴无目的动作增多.腱 反射双下肢消失.上肢减低.肌力V级双下肢 触觉,本体感觉减退.韦克斯勒成几智力量 (WAIS)测定,智商77入院后多次出现癫痫犬 发作.J993年10月发现原发癌肿.另10例出 现PNSNS至发现原发灶的间隔时间为l,6 个月4例患者在癌肿术后2,12个月出现 PNSNS和Hu抗体.其中小细胞肺癌,卵巢癌, 前列腺癌,乳腺癌各1例. 2.副肿瘤性感觉性神经元病(paraneoplas ticsensoryneuronopathy,PSN)7偷.脑干脑炎 (BE)及边缘叶脑炎(1imbieeneephalkis.LE)各 2例,副肿瘤性小脑变性(paraneoplasticeerebel lardegeneration.PCD)1例.PSN盒并脑脊髓 炎(PSN—EM)及PSN合并LE(PSN—LE)各2 例,PSN合并BE(PSN—BE)1例 3.对照组:106例.男66例,女40例;年龄 40,88岁,平均59岁;正常人3o例,无PNSNS 小细胞肺癌患者36例,无PNSNS卵巢癌患者 20例,非PNSNS神经系统其它疾病患者2o 例 二,方法 1.亲合免疫细胞组织化学卵白索生物素 过氧化物酶复合物法(ABC法):6g.m正常人大 脑额叶,颞叶,肝脏,肾脏及Wistar鼠的大脑, 小脑的冰冻}刀片干燥l0分钟,丙酮固定10分 钟+用含0.3H,O1牛血清白蛋白和磷酸 缓冲生理盐水(PBS)抑制内源性过氧化物酶10 分钟.10羊血清/pgs封闭30分钟.分别加各 稀释的血清,脑脊液,尿液在4c冰箱中过夜, 生物素标记羊抗人IgG第二抗体(二抗)为 Cappel公司产品.ABC药盒为Vector公司产 品.用联苯胺(DAB)显色后常规封片镜检. 2.免疫印迹技术:采用Blomstrand等"法 提取人大脑神经元细胞核蛋自.经十二烷基硫 酸钠聚丙烯酰胺(SDS—PAGE)凝胶电泳分离. 根据Towbin等法转移至硝酸纤维膜上.1 脱脂奶/PBS封闭1小时.各稀释标本浸泡1小 时.二抗为Cappel公司产品,ABC药盒为Vec tor公司产品,DAB显色 结果 ,亲合免疫细胞组织化学 17例患者的血清,1j倒患者的脑脊液及5 例患者尿液中的Hu抗体与正常人和Wistar鼠 所有神经组织中的神经元胞核形成均匀染色. 核仁阴性(图1,2),但不与神经组织中的胶质 细胞,肝脏及肾脏组织细胞起反应血清中的抗 体滴度为1:1000,1:64000,脑脊液中为 1:10,1:4000,尿液中为i:20,l:200, 例1尿液中无Hu抗体存在(附表).对照组均为 阴性. 附表PNSNS17倒患者血清,晌脊椎厦尿漓神经元 抗核抗体Hu抗体的测定结果 雌粪 二,免疫印迹技术 l7例患者血清中的Hu抗体识别神经元胞 核中蛋白抗原分子量为35,40万.对照组阴 性. 讨论 , ,Hu抗体,PNSNS与癌肿的关系 Hu抗体主要见于小细胞肺癌,极少数 见于乳腺癌,前列腺癌及神经母细胞瘤_S],本 组中肺小细胞癌13例(76),肺腺癌,前列腺 癌,乳腺癌,卵巢癌各1例,其中肺腺癌及卵巢 癌尚属首次报告,这2例患者临床表现为 PSN,肺腺癌血清中Hu抗体的滴度高达 1:32000,卵巢癌达到1:4000,脑脊液中的 滴度分别为120及18O,据推测脑脊液中 的Hu抗体来自于循环中Hu抗体的渗透.国外 报告81的PNSNS出现在癌前期或潜伏期, 从PNSNS出现至癌肿被发现的间隔时间最长 达2年].本组在发现癌肿之前出现PNSNS者 13例(76)+其中3倒间隔时间达2年以上, 倒5出现LE症状至癌肿发现的时间长达5 年.文献报告一组47例患者中PSN占7O, ,本组PSN12例 BE,LE,PCD分别占17一 (71),LE4捌(24),BE3倒(18),与国外 报告基本相符. 二,Hu抗体的免疫学特征 Hu抗体实质上为多克隆IgG,固定补体, 可与中枢神经系统(CNS)及周围神经系统中所 有神经元胞核及小细胞肺癌胞核起反应,但不 与其它组织细胞(如脑胶质细胞,肝,肾等组织 细胞)起反应,与系统性红斑狼疮等结缔组织疾 病所产生的非特异性抗核抗体有本质上的差 别,因此,称为特异性神经元抗核抗体"].免疫 印迹技术(Westernblot)显示Hu抗体识别神经 元胞核中分子量为35,4O万几条蛋白带]. Graus等用免疫荧光法及直接酶标法测出患 者血清中Hu抗体滴度最高达1t4000,由于 我们采用了先进的亲合免疫细胞组织化学 .其敏感性和特异性显着增高,血清及 ABC法 脑脊液中Hu抗体的滴度最高达1:64000及 1t4000我们偶而发现例12尿液中存在Hu 抗体,其滴度达到1:200.又测定了另5例患 者的尿液,发现5例阳性占83,滴度为12O , 1;200.其滴度与血清中循环的Hu抗体无 关联.通常认为,IgG不能从肾小球滤过,据推 测可能为Hu抗体损害了肾小球,使其通透性 增加所致,但确切的发病机理尚须探讨 三,发病机理 Chin】Neurol,June1996.Vol29,No.3 Dalmau等报告直接免疫过氧化酶ABC 法发现Hu抗体阳性患者脑神经元胞核中,存 在大量Hu抗体沉积,Furneaux等E于1990年 报告87患者CNS中有局部Hu抗体的合成 本组中11倒(73)脑脊液中Hu抗体滴度达1 :400以上,与血清中的抗体滴度无关联+提示 可能有CNS中的局部合成.IgG亚型 Hu抗体的同型为IgG和IgG,利用单克隆抗 体免疫标记进行B细胞表面抗原,T细胞亚群 及单核巨噬细胞表型分析,患者病理脑组织中, 血管周围炎性浸润细胞主要为CD19+B细胞 和CD4+辅助/诱导T细胞,间质组织中主要 为CD8+和CDllb抑制毒性T细胞,在病变严 重的血管周围间隙和间质中,还有EBMll+单 核巨噬细胞表型n,因而推测PNSNS的发病 机制较为复杂,可能是癌细胞与宿主CNS神经 元存在共同抗原决定簇,肿瘤细胞作为始动抗 原诱发机体产生高度特异性Hu抗体参与机体 的自身免疫反应,免疫反应不仅抑制了肿瘤细 胞的生长,同时也导致宿主CNS的损伤,通常 最易损伤的部位是后根神经节,而产生PSN 另外,也可导致大脑,小脑,脑干及边缘叶的损 害,尔产生PS—NEM,PSN—LE,PSN—BE及副肿 瘤性小脑变性等.本组13例(76)的患者以 PNSNS起病,并检出Hu抗体,尔后发现原发 灶,说明Hu抗体的测定对于部分癌肿,特别是 小细胞肺癌的早期诊断有实际临床意义. (本文图1.2见插页图第25页) 参考文献 lBlomstrandC,Hamberg~zA.Proteinturnoverincellen- richedfractLotlsfromrabbitbrain.JNeurochem,l969t16: i401. 2TowblnH,StaehelinT,GordonJ.Electrophoretietramper ofproteinsfrompolyacrllamidegels?nitrocelluloses~eets: pr?edur髓and80T~eapplicatiorLsProcNatlAcadSciUSA, 1979,76:'3SO. 3GrausF,Gordon-CredoC,PmmerJB.NeuronaIantlnucle- ELL"antibodyinsensozTneuronopathyfrom]uag?er.Neu- ro~,uytl985,35:538. 4posnerJB,Da~suJ.Fum~uxHM,et.Paraneoplaatic anti-Husyndromet自clinicaIstudy.f47patients.Neu- ? 中华神 rolngyt1990?40(Suppl1):155. 5GreenleeJE.Ja~kleKA.presenceoftype11Anti—Hu antibodiesinparaaeop[asticneurolngiea[syndromesa~ociat- edwitht1]rn0rsotherthansmalt.e】lcarcinomathelung. Neurology,1990.4O(Supp]1):245. 6AndersonNEtCunninghamJM,PosnerJB.Autolmmune pathogenesisofparaneopl~sticne~oingicalsyndrome~.Crit RevNeurobiol,1987,3:245 7AndeNE,R~enbiumMK_u珀GLF.Hat.Autoanti— bodiesinparancoplasticsyndromesassociatedwithsmaU-eeU lungea~ee~Ne~otogy,1988,38:1391. 8DaI扣auJ,F~aeaux}IM,RosenblumMKteta1.Detection oftheanti-Flu~tibodyinspecificregionsofthe I systemandtumorfrompatientswithparaneopLasticen- cephalomyelitis/sen~oryneuronopathy.Neurologyt1991, 4"1:1757 9F~neauxHF,ReichLtPosnerJB.Autoantibodysynthesis inthecentralssystemofpatientswithpar~eoplastic syndromes.Ne~oIogy,1990,40:1085 10JeanWC,DatmauJrHoA,etat.ArtaJysLsofthelgGsub- classdistributionand.inflammatoryinfiltratesinpatients withanti—Hu—associatedparaneoplast[cencepha]omye[itls. Neuro/~y,1994,44:140. (收稿1996—01—22修回:1996—03—27) (本文编辑:陈秀华) 脑出血合并喉咽腔和食道粘膜管状全剥脱一例报告 闻少琴孔繁元.朱旭东陈桂生党7)-里,</' ——— 7 瞄出血合并喉咽腔及食道粘膜管状全剥脱未见报伸出口外,牙齿紧咬其上,舌蜊血 肿大,不能复位,血从 道,现将我院收治的l例报道如下齿颓缝中源源流出.撬开牙齿清理口腔积血时抽 出一 患者男性,72岁,高血压病史2年入院前5小时条3.5cm×3.5cm之淡红色管状粘 膜样组织,上端膨 赛发右侧肢体无力,数分钟后加重呈全瘫,失语,急诊大呈漏斗形,表面有暗红色血 {葭病理报告为坏死粘膜 入院.查体体温37c,脉搏70次/分,呼吸20次/分,组织.继后,口腔涌出大量暗红色血液,患者呼吸,心跳 血压24/LfkPa(1kPa=7.5raraHg)心,肺,腹无明显异停止死亡.最后诊断t高血压性瞄出血并多脏器功能衰 常.意识清,运动性失语,右鼻唇沟浅,舌右偏,右上下蝎,喉咽腔和食道粘膜管状全剥脱大出血并失血性休 肢肌力0级,腱反射存在.巴氏征(+),右偏身针刺觉克. 减退血,尿,便,血清钾,钠,寨c化物及空腹血糖正常,讨论:脑出血台并神经源性溃疡鞍常见,其发生率 BUN9mmoJ/L~ECG示不完全性右束支传导阻滞;脑国外报道为1.5,54.0H,国内报道7.7.临床表 CT示左内囊区出血.给予降血压,降颅压,止血,给氧,现多为呕血和(或)黑粪与便血.病理改变主要是食道, 预防感染,维持营养及水电解质平衡等综合治疗,病情胃及十二指骑粘膜糜烂,点片状出血与溃疡. 无改善.次日出现嗜睡,呕吐,体温39?.第四天舌根后本捌脑出血已台并有肺,胃肠道,肾脏,血液系统 坠,呼吸困难,肺内闻及水泡音,PO.5.8kPa,pH7.3.急受损及电解质紊乱,说明已合并多脏器功能衰竭.其喉 行气管切开术.第5天频繁呕吐,呕吐物及便隐血试验-咽腔和食道粘膜的管状全剥脱,为上消化道的一种严 (++),(+一++)给予止血,输血,静脉注射碳酸重损害,为耋脏器功髓麦竭的一种表现,与脑出血所致 氢钠等均无效,血小板降至70×10.l,L,BUN升至下丘脑及脑干功能紊乱,胃酸分泌过度亢进有关,后者 37mmot/L,气管套管内不断吸出新鲜血{葭,五官科,血引起食道及胃肠道粘膜充血,水肿,靡烂,坏死及出血, 液科未能查明出血原因.第13天从套管内吸出0.8cm并在粘膜下聚集形成血肿, 使粘膜剥离. ×3cm黄褐色条索状坏死性粘膜样组织.鲜血不断从积血的增多,剥离面扩大,最后致喉咽腔和食道粘 13腔,鼻腔及套管内流出.第15天患者昏迷,血压降至膜完全剥离,完整脱出,剥离面大出血死亡.唯不好解 10/5kPa,尿量减少,血肌酐433~mol/L,血钠185释的是本倒脑出血量仅为25ml左右,何以有如此严重 mmoL/L,氯化物157mmol/L,血钾4mmol/L.患者舌悼之合并症,尚需进一步探讨 作者单位:750004宁夏医学院附属医院神经科(闻少琴, 孔鼙元,朱旭乐,陈桂生);宁夏灵武马家滩职工医院(党万里) (收稿:1995—1l—l2修回:1996—02—0】) (率文编辑;李文慧)