抗肿瘤中药血清药理学研究现状 - 南京大学医学院附属鼓楼医院肿瘤 b...b

抗肿瘤中药血清药理学研究现状 - 南京大学医学院附属鼓楼医院肿瘤 b...b 抗肿瘤中药血清药理学研究现状 南京中医药大学2003级博士 邹玺 摘要:血清药理学近年研究颇多，特别是抗肿瘤中药方面。现将抗肿瘤中药的研究分别从(1)与中药粗制剂的比较，(2)剂量的探索，(3)抗肿瘤作用的研究三个方面作一简要的综述。 关键词:抗肿瘤中药 血清药理学 现状 体外实验是中药药理的实验研究中不可或缺的手段。其优点是条件可控性强，可在细胞、亚细胞水平进行超微、生化、受体、基因等方面的研究，揭示药物机理较为深入，重复性好，使用材料少。但随着研究的深入，传统的用中药粗制剂直接加入离体反应体系中进行体外实验研究的方法发现很多问。由于中药化学成分复杂，口服后体内要进行一系列的生物转化以发挥药效，而且理化性质复杂，经常造成一些假阴性和假阳性的结果，例如:五、六十年代国内外用瘤细胞株在体外过筛数千种植物提取物，报道了上百个阳性结果，但用于体内实 ()1验结果大部分为阴性。这促使各国学者不断的努力，寻找更好的方法，1984年，在日本召开的第一届和汉医药学会上，日本学者首次提出给动物灌服中药一定时间后，取其血清进行实验的药理学新方法。1988年田代真一正式提出了“血清药理学”这一新概念。国内直到90年代初才开始探索，1991年国家中医药管理局正式立题，使该研究得以较系统开展。 ()21996年国家自然科学基金将其列为重点项目，着重进行方法学研究。此后，血清药理学广泛应用于肿瘤、心血管、消化、免疫等方面的药理学研究中，并与体外实验所见作比较，取得了很大的进展。随着研究的深入，相信其推广应用将对提高中药复方的药理研究水平产生重大的影响。现将以血清药理学方法研究中药抗肿瘤作用的国内现状综述如下。 1. 中药粗制剂与含药血清比较: ()3王力倩等首次报道采用中药血清药理学方法观察了苦参、仙鹤草的抗肿瘤作用。结果发现:仙鹤草、苦参煎剂及含苦参的血清在体外均可明显抑制S细胞的生长，而含仙鹤180 草血清则无效。说明苦参在体内外确有较强的抗肿瘤活性，而仙鹤草口服吸收进体内则失去其抗肿瘤活性。这可能与仙鹤草煎剂中的干扰因素有关，也可能与动物体内代谢过程及血清 ()4等因素的影响有关。他们还报道了复方仙人球直接给药和含复方仙人球的大鼠血清均能抑制S180、EAC肿瘤细胞的体外生长。 ()5林秋芳等比较了新制抗癌方的煎剂浓缩液和含药血清的实验结果为，煎剂浓缩液对人肝癌细胞(HePG2)体外生长的抑制作用比含药血清强，这可能与某些有效成分未能从消化道吸收或经体内代谢失活有关。 ()6张群豪等给移植S180肉瘤的BALB/c小鼠灌胃灵芝浸膏(GLE)，结果显示GLE有显著抑制小鼠移植性S180肉瘤生长的作用。基于以上的实验结果，把GLE直接加到体外培养的S180细胞中，结果GLE对S180细胞无抑制作用。流式细胞仪分析亦未发现有诱导S180肿瘤细胞凋亡的作用。然而，按整体实验的剂量给小鼠灌服GLE5、10、20g/Kg连续10d后，取其血清加至S180细胞体外培养，结果却发现3个剂量组均有显著抑制S180细胞增殖的作用。流式细胞仪检测也发现有显著诱导S180细胞凋亡的作用。而灌胃生理盐水的小鼠血清则未抑制肿瘤细胞增殖，亦不能促其凋亡。 ()7熊鹰等通过血清药理学方法并结合MTT法，结果表明含中药血清对人肝癌细胞Bel-7402的生长具有抑制作用，并随含药血清浓度增加而增加，而将中药制剂直接加入体外培养细胞中，导致培养液混浊不清，细胞培养24h后，台盼蓝染色显示细胞大部分死亡，无法进行指标的检测。 ()8黄育华等采用叶下珠液直接加入培养基中和药物血清加入培养基中处理Bel-7402细胞对比观察，细胞生长能力、增殖速度、集落形成能力明显减弱，两法所得结论是一致的。 2. 剂量的探索: ()9王力倩等含喂大剂量(以参考公式:动物给药剂量,临床常用量×动物等效剂量系数×培养基内血清稀释度计算的剂量)苦参、仙鹤草的血清对H细胞体外生长均有较强的抑22 制作用，并且可以显示以参考公式计算的给药剂量，可以达到一定的血药浓度，而含喂小剂量(比以参考公式计算的剂量小一倍)苦参、仙鹤草的血清对H肿瘤细胞体外生长无显著意22 义，可见不能达到一定的血药浓度。以上实验结果提示以上述的参考公式计算给药剂量来制备含药血清具有一定的合理可行性。 ()10张侠等实验结果表明含有以益肾健脾活血法制定的中药兔血清三个剂量组均可明显抑制BEL-7402细胞增殖，并且相同时间点高剂量组抑制率高于低剂量组、相同剂量组长时间点高于短时间点。同时表明采用血清药理学方法进行抗肿瘤中药体外试验，具有一定的科学性和可行性。 ()11戴馨仪等以含药血清对K562细胞生长的抑制试验亦表明:参桃软肝丸有抑瘤作用，其抑瘤率随着剂量及作用时间的增加而逐渐提高。 ()12朱梅菊等研究结果表明，含抗纤灵血清各组均对HepG2细胞的体外生长有抑制作用。并随药物剂量的增加而抑制作用有增强的趋势。 3.抗肿瘤作用机制的研究: ()13何玉军等采用血清药理学方法，流式细胞仪、琼脂糖凝胶电泳和透射电镜分析技术对中药复方制剂诱导人胃癌细胞凋亡情况进行检测和观察。结果见中药复方I号诱发肿瘤细胞，DNA裂解成典型的梯状电泳图谱，胞核固缩，核染色质着边并裂解为碎块;G,G期01细胞减少，产生典型凋亡峰。 ()14杨勤建等选用复方“香龙散”，通过血清药理学方法成功地诱导了人胃癌细胞的凋亡，其主要是作用于癌细胞的DNA复制期，即S期和G期，以5,含药血清浓度处理24h,2 36h的阻滞最为明显，从而抑制了胃癌细胞的分裂增殖;同时还发现香龙散含药血清持续作用于人胃癌细胞较长时间并未出现明显的凋亡细胞，而只作用24h后再更换无含药血清培养基培养24h,36h，细胞则出现明显的凋亡形态改变，提示香龙散含药血清诱导的人胃癌细 ()()1516胞凋亡与药物浓度无直接关系。他们还通过血清药理学方法诱导了人肺癌细胞的凋亡，从形态学和流式细胞仪检测均呈现明显的凋亡特征，表明中药化痰散结方具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用。此后又以含药血清进行了进一步的研究，提示化痰散结方含药血清诱导的SPC-A1细胞凋亡，与胞内VAMP/CGMP的比值升高有密切关系。 ()17郭振球等运用抗癌方药物血清与HepG2细胞作用后P21waf1/Cip1表达明显增强，与CTX药物血清比较，差异有高度显著性意义。提示抗癌方药物血清可提高HepG2细胞P21waf1/Cip1蛋白表达。由于P21waf1/Cip1既能对细胞周期实行负性调控，又能诱导肿瘤细胞凋亡，其蛋白表达水平的提高可阻止癌细胞的恶性增生，从而起到抑制恶性肿瘤生长的作用。而且研究结果显示，中药抗癌方组中癌细胞的形态改变主要为细胞凋亡;而CTX组中癌细胞的形态改变则以坏死为主，空模组与抗癌方组瘤组织中心均见点状坏死，可能是由于癌细胞增殖活跃，局部血液供应相对不足而致细胞缺血缺氧所引起的。 ()6张群豪等为了深入探讨灵芝的抗肿瘤作用机制，实验发现灵芝浸膏(GLE)本身无直接抑瘤及诱导肿瘤细胞凋亡的作用，GLE通过口服吸收后，促进PMTNF-αmRNA、脾细胞INF-γmRNA的表达。刺激诱导机体产生TNF-α和INF-γ，进而达到诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖的作用。 ()18陈孝银等证实含琼玉膏和DDP的联合组药物血清诱发肺腺癌细胞株GLC-82凋亡的百分率明显高于化疗组药物血清，说明琼玉膏可增加化疗药物DDP对瘤细胞凋亡作用的敏感性。 ()19熊鹰等进一步研究结果表明其含药血清可产生肝癌细胞凋亡的典型形态学改变，进一步阐明了其抗癌机制。 ()20叶春玲等通过血清药理学方法，以慢性粒细胞白血病HL-60细胞进行研究，观察到中华眼镜蛇毒兔血清能明显诱导细胞凋亡。 ()21蒋振明等采用Wistar大鼠血清药理学方法，观察到张镜人治疗胃癌的经验方中扶正方药与祛邪方药或两者结合组方对胃癌细胞的凋亡与死亡有一定作用。 ()()2223臧运华等以相当于2倍临床剂量砒霜尾静脉注射大鼠，其血清能显著降低K562细胞的Bcl -2基因表达水平，从而减少Bcl- 2对凋亡的抑制作用，诱导细胞凋亡发生。而且砒霜能使K562细胞膜流动性增高，G -G期细胞百分数减少，S期细胞百分数增加，并具01 有诱导K562细胞凋亡的作用。 中药抗癌新药药效学研究如采用血清药理学方法，必将提高新药研究的质量。通过口服途径给药的制剂，只有通过血清药理学方法证明有效的药物，才能说明该药物进入体内后能 ()3产生体外同样的药理效应。血清药理学是一种很有发展前景的新的药理实验方法，它为中药药理研究提供了崭新的思路，提高了体外实验的可信性与可靠性，并使以前无法进行的研究成为可能，从而开辟了中药药理研究的新纪元。它将对中药药理学或药效学研究以及临床药理学研究的深入起促进作用，将加速中药走向世界的进程。 参考文献: (1)崔晓兰，贺玉琢，高英杰，中药药理研究的新思路――中药血清药理学，中国中医药科技，1997;4(4):239，250 (2)王宁生，雷燕，刘平，杨奎，关于血清药理学的若干思考，中国中西医结合杂志，1999;19(5):263-266 (3)王力倩，余上才，李仪奎，李悦，用血清药理学方法研究中药苦参、仙鹤草的抗肿瘤作用，中国中医药科技，1995;2(5);19-21 (4)王力倩，金若敏，孙峥嵘，沈玉茹，陈长勋，复方仙人球对肿瘤细胞体外生长影响的实验观察，上海中医药杂志，1997;4:44-46 (5)林秋芳，朱梅菊，郭振球，张红，新制抗癌方对人肝癌细胞(HePG2)体外生长的抑制作用，湖南中医学院学报，1999;19(2):6-7 (6)张群豪，於东晖，林志彬，用血清药理学方法研究灵芝浸膏GLE的抗肿瘤作用机制，北京医科大学学报，2000;32(3):210-213 (7)熊鹰，孔小云，陈如山，刘新民，金庆文，复方犀黄丸含药血清体外抗癌作用的研究，中国中西医结合消化杂志，2001;9(4):122-123 (8)黄育华，张建军，晏雪生，彭慎安，王伯祥，叶下珠对人肝癌细胞株Be1,7402诱导分化的影响，湖北中医学院学报， 2000;2(1):10-12 (9)王力倩，李仪奎，符胜光，付惠娣，血清药理学方法研究探索，中药药理研究与临床，1997;13(3):29-31 (10)张侠，陈信义，王沛，血清药理学方法研究益肾健脾活血法对BEL-7402细胞增殖抑制作用，实用肿瘤杂志，1999;14(2):87-89 (11)戴馨仪，陈林香，周岱翰，陈雪馨，陈瑶，参桃软肝丸对荷瘤动物抑瘤与免疫的实验研究，中国肿瘤，2001;10(7):426-428 (12)朱梅菊，郭振球，抗纤灵药物血清对人肝癌细胞(HepG2)的体外生长抑制作用，中草药，2001;32(10):905-907 (13)何玉军，苏安英，柴锡庆，周双俊，悦随士，门金娥，用血清药理学方法观察中药复方制剂诱导人胃癌细胞凋亡的研究，综合临床医学，1998;14(1):30-31 (14)杨勤建，雷良蔚，潘希雄，李波，郑从义，中药复方香龙散(含药血清)诱导人胃癌细胞凋亡的研究，湖北中医学院学报，1999;1(1):43-45 (15)杨勤建，化痰散结方含药血清诱导人肺癌细胞凋亡的机理研究，北京中医药大学学报，1999; 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