可溶性糖含量的测定

可溶性糖含量的测定 实验九 植物组织中可溶性糖含量的测定 2005级生物科学(1)班 赵银锁(40508010) 一(实验目的 学习可溶性糖测定的蒽酮比色法 二(实验原理 植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外其含量也随之发生变化。了解可溶性糖含量的变化，在生理上和实践上都有重要的意义。本实验采用蒽酮比色法测定可溶性糖的含量。糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物.在低浓度时，625nm的OD值与糖含量成正相关。该实验方法简便，但没有专一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。 三(实验用品 721型分光光度计 天平 研钵 恒温水浴锅 烧杯 刻度试管 大试管 活性炭 移液管 漏斗 酒精(80%) 葡萄糖溶液:称取已在80?烘箱中烘至恒重葡萄糖100mg,配制成500mL溶液，即得每 mL含糖为200μg的标准溶液。 蒽酮试剂:称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。稀硫酸溶液由760mL 浓硫酸(比重1.84)稀释成1000mL而成。 四(实验步骤 1.可溶性糖的提取 称取0.5g的新鲜植物叶片，于研钵中加80%酒精4ml，仔细研磨成匀浆，倒入离心管内，置于80?水浴中不断搅拌30min，离心10分钟(5000转/min)，收集上清液于10ml的刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1次，合并上清液。在上清液中加0.5g活性炭，80?水浴脱色30min,定容至10ml，过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。 2.显色及比色 吸取上述糖提取液1mL， 放入一干洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进行测定，波长为625nm，测得吸光度。从标准曲线上查得滤液中得糖含量(或经直线回归公式计算)，然后再行计算样品中含糖百分数。 3.绘制标准曲线 1 取标准葡萄糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液，浓度分别为每mL含糖0、5、 10、20、40、60、80μg。按上述方法分别测得其吸光度，然后绘制A625,糖浓度曲线，或 进行直线回归求得直线方程。 试剂(ml) 管号 1 2 3 4 5 6 葡萄糖标准液 0 0.05 0.1 0.2 0.3 0.4 80%酒精 1.0 0.95 0.9 0.8 0.7 0.6 蒽酮-硫酸试剂 5 5 5 5 5 5 葡萄糖浓度(ul/ml) 0 10 20 40 60 80 4.计算样品中含糖量, 设V为植物样品稀释后的体积(m L);C为提取液的含糖量(μg/ m L);W为植物组织鲜重 (g)。 则得计算式如:可溶性糖含量,,( C×V)/(W×106) ×100% 五(注意事项 1.蒽酮试剂含有浓硫酸，使用时应该小心; 2.离心时要平衡; 3.在蒽酮反应前稀释样品10-20倍。 六(实验结果既及分析 表一 测得不同浓度的糖溶液的吸光度值 浓度 吸光值 0 0 10 0.21 20 0.387 40 0.91 60 1.369 80 1.72 测得吸光值为0.663，由葡萄糖溶液标准曲线可得方Y=0.0221X-0.0086，则该样品中葡萄糖 含量为30.39ug/ml，植物组织中的含糖量=(100×30.39)/(0.5×1000000) ×100%=0.608%。本次实验中测定了青菜中的标准葡萄糖含量，由测定结果可以看出，青菜中糖含量还是比较 低的。本次实验的标准曲线十分近似与一条直线，因此实验结果还是真实可靠的，能够反映 2 出青菜中的含糖量。 图一 A625,糖溶液浓度的标注准曲线 3