【doc】高效液相色谱法测定睡安口服液中酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B的含量

【doc】高效液相色谱法测定睡安口服液中酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B的含量 高效液相色谱法测定睡安口服液中酸枣仁 皂苷A和酸枣仁皂苷B的含量 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2008VOL.19NO.5时 珍国医国药2008年第l9卷第5期 响,但不显着,对膜截留率的影响较为显着,结果如图2所示.在 pH为4的条件下截留率最高,溶液越偏碱性截留率越低.由于 车前草可溶性膳食纤维中主要为酸性多糖组分,在酸性条件下高 分子糖链相对稳定,会相互缠绕形成更高的分子量,当高分子量 的组分富集在膜孔径前会导致一些小分子的组分不会透过膜而 被截留;在碱性条件下高分子糖链会断裂成小分子透过膜,使得 膜截留率降低. 图1液固比对膜通量的影响 68l012 PH 料液pH值对膜截留率的影响 -__ JL.- Ej 同 3.2.4超滤和未经超滤制得SDF的组分比较将车前草水提液 过滤,离心浓缩后,未经任何纯化直接加4倍体积的无水乙醇醇 沉制得的SDF粗品,与经过截留分子量l0万的超滤膜浓缩制得 的SDF粗品成分比较如表1所示.蛋白含量参照GB/T5009.5 — 2003,灰份测定参照GB/T5009.4—2003. 表1超滤和未经超滤制得SDF粗品比较% 4结论 利用超滤技术生产车前草可溶性膳食纤维,工艺简单可行, 整个超滤实验均有较好的膜通量,且生产周期短,成本低;与传统 的水提醇沉法比较,经超滤处理生产的可溶性膳食纤维粗品中粗 蛋白和灰分含量明显下降,粗品纯度高. 参考文献: [1]王厚廷,乔善义,杨明,等.超滤法提取六味地黄汤活性多糖的工 艺研究[J].解放军药学,2001,17(2):69. [2]杨晓莉,杨月欣,周瑞华.食品中总的,不溶性及可溶性膳食纤维的 酶一重量测定法[J].卫生研究,2001,30(6):377. [3]钱和,张添.改进苯酚一硫酸法测定芦荟多糖含量[J].江苏食 品与发酵,2002,30(2):3. 效液相色谱法测定睡安口服液 中酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B的含量 于莲,于敏,焦淑清 (佳木斯大学化学与药学院,黑龙江佳木斯154007) 摘要:目的为睡安口服液建立专属性酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B的含量测定方法.方法采用高效液相色谱 (HPLc)法,蒸发光散射检测器(ELSD)检测.结果睡安口服液中酸枣仁皂苷A在0.928,4.604txg范围内线性关系良 好,酸枣仁皂苷B在0.468,2.340txg范围内线性关系良好,酸枣仁皂苷A回收率为97.6%,RSD=0.9%;酸枣仁皂苷B 回收率为97.5%,RSD=1.9%.结论该HPLC法可做为睡安口服液中酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B的含量测定方法. 关键词:睡安口服液;酸枣仁皂苷A;酸枣仁皂苷B;高效液相色谱法 1059-02 中图分类号:R284.2文献标识码:A文章编号:1008—0805(2008)05—DeterminationofjujubosideAandJujubosideBinShuianOralLiquidbyHPLC YULian.YUMin,JIAOShu—qing (TheChemicafandPharmacologicalCollegeofJiamusiUniversity.Jiam~i154007,China) Abstract:0bjectiveTodevelopaspecialmethodtodeterminethecontentsofiujubosideAandi ujubosideBinShuianOral Liquid.MethodsHPLCwasadoptedwithKromasilC1Rcolumnasanalyticalcolumn.Result sThelinearrangeofiuiubosideA was0.928,4.604txg.ThelinearrangeofjujubosideBwas0.468, 2.340txg.RecoveriesofjujubosideAandjujubosideBwere 97.6%(RSD=0.9%)and97.5%(RSD=1.9%).ConclusionThismethodcanbeusedfordeter miningthecontentsofiuiu— bosideAandjujubosideBinShuianoralliquid Keywords:ShuianOralliquid;JujubosideA;JujubosideB;HPLC 睡安口服液(现名睡宝口服液)是黑龙江省药学研究所研制 的专利新药,其主药为酸枣仁.酸枣仁具有镇静安神,养心安血, 收稿日期:2007-04.20;修订日期:2007.10.18 基金项目:黑龙江省教育厅骨干教师项目 作者简介:于莲(1961.),女(汉族),黑龙江佳木斯人,现任佳木斯大学 化学与药学院教授,学士学位,主要从事药物新剂型与新制剂的研究 工作. 治疗失眠等功效.为控制该制剂的质量,本实验建立了一种简单 快速的HPLC法,可同时测定主药中有效成分酸枣仁皂苷A(ju. jubosideA)和酸枣仁皂苷B(jujubosideB)的含量,为其质量标 准的制定提供依据. 1仪器与药品 Waters600E型高效液相色谱仪;Millennium32色谱工作站数 据处理系统,均为美国产;蒸发光散射检测器(ELSD)为德国安捷 - 1059- 98765432l0 . L【..?.1/_軎毯 时珍国医国药2008年第19卷第5期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2008VOL.19NO.5 伦公司产.酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B对照品购自成都思科 华生物技术有限公司,用归一化法测定纯度均大于98%;甲醇为 色谱纯;水为高纯水;其他试剂均为纯;睡安口服液样品由黑 龙江省药学研究所提供. 2方法与结果 2.1色谱条件色谱柱为KromasilCl8柱(4.6mm×200mm,5 ),填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶;流动相为甲醇一水一冰 醋酸(70:30:1);流速为1.0ml/min;柱温25.C;ELSD氮气流 速2.0L/min;漂移管温度94.C;理论板数按酸枣仁皂苷A峰计 算应不低于200?0J. 2.2对照品溶液的制备精密称取酸枣仁皂苷A对照品4.6 mg,酸枣仁皂苷B对照品2.3mg,置同一10ml量瓶中,用甲醇 溶解并稀释至刻度,摇匀,即得. 2.3供试品溶液的制备取本品内容物5.0ml,加入5.0ml蒸 馏水,混匀,用水饱和正丁醇萃取5次,10ml/次,合并正丁醇层, 用正丁醇饱和氨水溶液洗涤两次,20ml/次,取正丁醇层蒸干,残 渣用甲醇溶解,定容于5ml量瓶中,摇匀,静置,过0.45m微孔 滤膜,即得. 2.4曲线的制备精密吸取对照品溶液2,4,6,8,10l,按 上述色谱条件进行测定,以对照品进样量为纵坐标,峰面积积分 值为横坐标绘制标准曲线,结果表明,酸枣仁皂苷A在0.928, 4.640g,酸枣仁皂苷B在0.468,2.340之间均有良好的线 性关系,回归方程分别为:Y=1.3964X+11.6745(r=0.9995); Y:1.4504X+11.3604(r=0.9996).液相图谱见图1,4. 2.5精密度实验精密吸取对照品溶液5,按含量测定项下 色谱条件,连续进样5次,分别计算其峰面积值的RSD,结果酸枣 仁皂苷ARSD:1.6%,酸枣皂苷BRSD:2.4%. 图1酸枣仁皂苷A液相图 5500 50001 4500 40001 00C:.1f——————————————————————————————\ 图2酸枣仁皂苷B液相图 \粪;一 图3样品液相图 图4对照品液相图 2.6稳定性实验精密量取供试品(批号050309)5.0ml,按含 量测定项下制备供试品溶液.每隔2h进样1次,进样量10, 测定5次,结果酸枣仁皂苷A及酸枣仁皂苷B的RSD分别为 2.2%和2.6%. 2.7重复性实验精密量取同一批号(批号050309)供试品5 份,按含量测定项下方法制备供试品溶液和测定(见表1).数据 表明,本方法重现性较好. 表1重复性实验数据 2.8回收率实验精密量取供试品(批号050309),蒸馏水和对照 品溶液(含酸枣仁皂苷A0.464mg?ml,,酸枣仁皂苷B0.234mg ? ml).先将对照品溶剂挥干,再用水溶解与口服液混匀,并用 10ml水饱和的正丁醇萃取,然后按供试品溶液制备方法操作,制 备供试液,按含量测定项下色谱条件测定.结果见表2. 表2回收率实验数据 戽县挂显量竺g登重里g型窒堕蝗空(堕) 皂苷A皂苷B皂苷A皂苷B皂苷A皂苷B皂苷A皂苷B ? 1060? 5份样品,酸枣仁皂苷A平均回收率为97.6%,RSD: 0.9%;酸枣仁皂苷B平均回收率为97.5%,RSD:1.9%,该法回 收率较高,方法可靠. 2.9供试品测定取睡安口服液3批,上述方法测定.结果见 表3. 表33批样品含量测定结果 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2008~OL.19NO.5时 珍国医国药2008年第19卷第5期 上述数据表明睡安口服液中含酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B总 量的平均值为0.3375mg?ml,,按降幅20%计为本品含量下 限,则其含量应不低于0.27mg?ml,.按每支10.0ml计算,每 支应不低于2.7mg. 3讨论 《中国药典》(2005版)没有收载酸枣仁单味药材的含量检测 方法,文献报道酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B的含量测定也较 少,主要方法有薄层扫描法,一阶导数分光光度法等.由于高效 液相色谱法常用的紫外(uV)检测器不利于皂苷类成分的检测, 本实验选用蒸发光散射(ELSD)检测器进行检测,建立的HPLC — ELSD法简便准确. 黑龙江省药学研究所提供的睡安口服液含酸枣仁皂苷A和 酸枣仁皂苷B总量的平均值为0.3375mg?ml一,批间差异较小, 说明制备工艺稳定. 参考文献: [1]王健,林晓.酸枣仁中酸枣仁皂甙A和B的含量测定[J].中 草药,1996,27(3):154. [2]王健,林晓,丁少纯.酸枣不同部位中酸枣仁皂甙A和B的含 量测定[J].中成药,1996,18(5):23. 反相高效液相色谱法 同时测定马鞭草中乌索酸和齐墩果酸的含量 谢晚彬,邹盛勤,陈武 (1.宜春学院化学与生物工程学院,江西宜春336000; 2.江西省天然药物活性成分研究重点实验室,江西宜春336000) 摘要:目的建立RP—HPLC法测定马鞭草中乌索酸和齐墩果酸的含量.方法色谱柱 为NucleosilC.柱(4.6mm×250 mm,5Izm),流动相为甲醇一水(88:12,WV),流速为0.8ml/min,检测波长为210nm,柱 温25?.结果鸟索酸在 0.458-4.109Izg范围内呈良好的线性关系(r=0.9997),平均回收率为 98.1%,RSD=1.1%;齐墩果酸在0.156,1. 389Izg范围内呈良好的线性关系(r=0.9996),平均回收率为101.7%,RSD=1.7%.结 论方法快速简便,准确可靠,可 作为马鞭草药材的质量控制方法. 关键词:马鞭草;鸟索酸;齐墩果酸;反相高效液相色谱法 中图分类号:R284.2文献标识码:A文章编号:1008-0805(2008)05—1061-02 DeterminationofUrsolicAcidandOleanolicAcidinVerbenaofficina矾L.byRIP—HPLC XIEwan-bin.ZOUSheng-qin.CHENWu一 (1.CollegeofChemistryandBioengineeringofYichunUniversity,Ywhun,Jiangxi336000,China;2.KeyLa- boratoryofJiangxiProvinceforResearchonActiveIngredientsnNaturalMedicines,Yichun,336000,Cina) Abstract:ObjectlveToestablishamethodfordeterminingursolicacidandoleanolicacidinVerbenaofficinalisL.byhighper. formanceliquidchromatography.Methods111eseparationwascarriedoutonNucleosilC18column(4.6mm×250mm,5Izm) withmethanol— water(88:12.v/v)asthemobilephase.Theflowratewas0.8ml/minandthedetectionwavelengthwas 2lOnm.Thecolumnwasusedat25?.ResultsUrsolicacidshowedagoodlinearrelationshipintherangeof0.458,4.109ug (r=0.9997)andtheaveragerecoverywas98.1%.RSDwas1.1%.OleanolicacidshowedagoodlinearrelationshipintIle rangeof0.156,1.389p~g(r=0.9996)andtheaveragerecoverywas101.7%.was1.7%.ConclusionThemetIl odis rapid,simple,accurateandreliableandcanbeusedforthequalitycontrolofVerbenaofficinali sL,. Keywords:Verbenaq[-ficinalisL.:Ursolicacid:Oleanolicacid:RP—HPLC 马鞭草为马鞭草科植物马鞭草VerbenaoffwinalisL.的干燥 地上部分,又名铁马鞭,疟马鞭,土荆芥.马鞭草为传统中药,具 有清热解毒,活血散淤,利水消肿等功效,可用于治疗疟疾,白喉, 传染性肝炎,流行性感冒等….马鞭草含马鞭草苷,5一羟基马 鞭草苷,熊果酸,挥发油等多种化合物J.现代药理研究表明, 乌索酸(熊果酸,Ursolicacid)具有抗肝炎,抗肿瘤,抗病毒,抗炎 抑菌及增强免疫功能等多种药理活性,具有重要的药用开发价 值.本实验采用RP—HPLC法同时测定了马鞭草中乌索酸和 齐墩果酸的含量,为控制药材质量提供科学依据. 收稿日期:2007-08-22;修订日期:200711-26 基金项目:国家"863"重点资助项目(No.2002AA2Z3217) 作者简介:谢晚彬(1971.),男(汉族),湖南冷水江人,现任宜春学院化学 与生物工程学院讲师,硕士学位,主要从事生物化学与分子生物学工作. 通讯作者简介:陈武(1944一),男(汉族),江西奉新人,现任宜春学院 化学与生物工程学院教授,学士学位,主要从事天然药物与生物技术研究 工作. 1器材 1.1仪器Waters515双泵型高效液相色谱仪(2996光电二极管 矩阵检测器,77251进样阀,20定量环,Empower中文色谱工作 站,美国Waters公司);RO—MB一10D高纯水机(杭州永洁达膜 分离设备厂);CP225D电子分析天平(德国Sartorius公司);202 — 26A型数显电热恒温干燥箱(上海阳光实验仪器有限公司); FW100型高速万能粉碎机(天津泰斯特仪器有限公司);KS一 1500超声提取仪器(宁波科盛仪器厂). 1.2材料马鞭草购于江西省宜春市药材市场,经江西省天然 药物活性成分研究重点实验室鉴定为马鞭草科植物马鞭草leer- benaoffieinalisL.的干燥地上部分. 甲醇为色谱纯(上海陆忠试剂厂),水为高纯水,95%乙醇 (分析纯,江西同盟试剂化工厂),乌索酸和齐墩果酸对照品(中 国药品生物制品检定所提供,批号:110742—200516,110709— 200511). 2方法与结果 2.1色谱条件色谱柱为NucleosilC18柱(4.6mm×250mm,5 ? lO6l?