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约翰霍普金斯医院医学微生物学标本采集指南

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约翰霍普金斯医院医学微生物学标本采集指南约翰霍普金斯医院医学微生物学标本采集指南 医学微生物学标本采集指南 本指南参照约翰霍普金斯医院,Johns Hopkins Hospital,Baltimore, MD, 2010年5月升级版翻泽 . 严禁随意复制 概述 正确采集用于微生物培养的标本是获得感染性疾病致病原最重要的一步。标本采集不当,可能导致假阴性和/或分离到污染微生物。 标本采集的基本概念 1(采集感染部位:避免邻近组织或分泌物的污染。 2(采集时间:如,抗酸杆菌(AFB)培养时留取晨痰。 3(采集标本量:必须足够满足培养的需要 (采集装置...
约翰霍普金斯医院医学微生物学标本采集指南
约翰霍普金斯医院医学微生物学标本采集指南 医学微生物学标本采集指南 本指南参照约翰霍普金斯医院,Johns Hopkins Hospital,Baltimore, MD, 2010年5月升级版翻泽 . 严禁随意复制 概述 正确采集用于微生物培养的标本是获得感染性疾病致病原最重要的一步。标本采集不当,可能导致假阴性和/或分离到污染微生物。 标本采集的基本概念 1(采集感染部位:避免邻近组织或分泌物的污染。 2(采集时间:如,抗酸杆菌(AFB)培养时留取晨痰。 3(采集标本量:必须足够满足培养的需要 (采集装置:无菌、防漏的标本容器。 4 5(使用正确的转运培养基:如,厌氧培养必须置于厌氧菌转运培养基,细菌培养时用Culturette,粪便培养时用卡里-布莱尔(Cary-Blair)转运培养基,病毒和衣原体培养时用M4RT,尿液培养用硼酸。细菌学检查不能置于病毒转运培养基,AFB检查不能置于厌氧转运培养基(注意:使用采集装置前检查其失效日期。 6(只要有可能,在使用抗微生物药物前采集标本。 7(正确标注标本,将检查申请单填写完整。特定来源的标本需要注明。如:伤口,左腿。 8(尽量减少转运时间。从标本采集后,到送抵实验室前的一段时间里,将标本置于正确的环境。 9(如果合适,对皮肤表面进行消毒。使用70-95,的酒精(ALC)和2,氯己啶或1-2,的碘酊(TIO)局部消毒。保持两分钟的作用时间,最大限度起到消毒灭菌作用( 1 目 录 (按标本类型分类) 脓肿 Abscess 羊膜腔穿刺术 Amniocentesis 节肢动物 Arthropod 血 Blood 无菌体液(除尿和脑脊液) Body Fluids,Sterile(except urine and cerebrospinal fluid) 骨髓 Bone Marrow 百日咳博德特菌 Bordetella pertussis 支气管刷/洗液/灌洗液 Bronchial Brush/Wash/Lavage 大疱、蜂窝组织炎、小泡 Bullae,Cellulitis,Vesicles 脑脊液 Cerebrospinal Fluid 皮肤 Cutaneous(仅用于真菌学 Fungal only) 耳 Ear 眼 Eye 胃活检 Gastric Biopsy 生殖器来源 Genital Sources 分子试验指南A:病毒 Molecular Testing Guidelines Part A:Viruses Guidelines Part B:Bacteria 分子试验指南B:细菌 Molecular Testing鼻腔监测 Nares Surveillance 鼻咽 Nasopharyngeal 鼻 Nose 前列腺 Prostate 痰 Sputum 粪便 Stool,Feces 咽喉 Throat 组织 Tissue 尿液(用于细菌、真菌、AFB、寄生虫和病毒培养)Urine for Bacterial,Fungal,AFB,Parasite and Viral Cultures, 病毒转运培养基(M4RT)Viral Transport Media(M4RT) 伤口 Wounds 2 脓肿Abscess 1(用70-95,酒精和1-2,碘酊消毒体表皮肤。 2(对未引流脓肿:使用无菌注射器和针头,按无菌操作术,从中采集脓性物。用无菌手术刀切开粟粒状脓肿(miliary abscesses),使用无菌注射器和针头采集露出的标本。 3(将5-l0ml吸取物置于厌氧转运培养基立即送检。注:厌氧转运培养基不能用于AFB培养。 4(在检查单上注明需要排除放线菌属、奴卡菌属。 5(因为标本很容易干,而且获得量有限,应避免使用拭子。注:拭子对下列情况不适用:真菌、厌氧菌培养、褥疮,分枝杆菌培养、肛周脓肿、口腔脓肿。单个拭子无法进行革兰染色。如果需要革兰染色,必须采用双拭子。 羊膜腔穿刺术Amniocentesis 通常由医生经超声定位留取样本,置于封口的注射器或厌氧转运培养基送抵实验室。 节肢动物Arthropod 通过镊子获得和皮肤相粘连的节肢动物标本。置于小瓶或容器,可加或不加少量酒精,确保盖紧以防止泄漏。 血Blood 1(根据如下信息确定所用培养瓶类型:医嘱(有氧和无氧瓶,或树脂瓶和无氧瓶),或其他(详下)。如有必要,和医生讨论取血的时机、取血位点、并在送检单上注明特殊实验室检查等。 2(准备必要的装备: 1)如果患者未用抗生素,一套普通培养包括一个有氧和一个无氧瓶。 2)如果患者经静脉或口服使用抗生素,或停药在24小时内,或疑似奈瑟菌及其他苛养菌,则用树脂瓶替换有氧瓶。当然同时送厌氧培养瓶。 3(向患者或其家人解释程序:通过检查患者标有姓名和病历号的识别腕带来确认患者的身份。如果患者没有识别腕带,比如一些门诊患者,则让患者说出自己的姓名和出生日期,并确认和检查单上的姓名及出生日期一致。 4(依从标准防护。戴手套前及摘手套后对手部进行清洗或消毒。如需抽血培养,建议佩戴口罩 及面罩。 5(皮肤消毒前摆好所需装备: 1)取下培养瓶的防尘盖。 2)用酒精棉擦拭其表面。 3)皮肤消毒时,将酒精棉置于培养瓶顶上。 4)注入培养瓶前去除酒精棉——不要使用碘(iodine)。 3 5)用无菌手套盒外包装的内层,形成一个无菌区域。 6)打开所需物品,置于上述无菌区域。 6(在采血点上部扎上止血带(tourniquet),确定采血位点。 7(采血点消毒: R1)首选Chloraprep? One-Step Frepp【注:是一种以洗必泰为主要成分的皮肤消毒剂的】 ?用2-3个酒精棉清洁擦洗采血点。晾干至少30秒。 ?戴无菌手套。 R?挤压Chloraprep? One-Step Frepp把手,打破安瓿,使用泡沫表面擦洗皮肤。 ?用力擦洗30秒,消毒采血点。 ?消毒10厘米范围的皮肤。 ?静脉穿刺前晾干至少30秒。 R2)如果不能用Chloraprel? One-Step Frepp,则使用1,的碘酊(tincture of iodine frepp)。 ?聚维酮碘(Povidone-iodine)消毒时,污染多于氯己啶或1,碘(iodine frepps)。 ?使用1,碘(iodine frepps),消毒10厘米范围的皮肤,同心圆,由内向外。 ?晾干至少30秒,达到消毒效果。 ?如果使用碘产品,则用酒精去除多余的碘(防止被碘损伤)。 R3)如果不能用Chloraprep? One-Step Frepp或碘(如过敏): ?使用酒精垫消毒皮肤,同心圆,由内向外。 ?重复两次。 ?晾干至少30秒。 8(消毒后不要触摸采血点。如果必须接触,则接触前戴无菌手套。 9(将针刺入静脉,吸取适量血液(见3.10)。如果还要采集其他血标本,则最先进行血培养标 本采集。用注射器采集,将标本注入血培养瓶。 1)去除采血装置(the Angel Wing Blood Collection)配套的内部适配器。 2)将20毫升注射器连接到一个蝴蝶扣(butterfly)末端。 3)刺入静脉,抽取20毫升血液。 4)尽量保持支配手无菌。 5)从采血点移去止血带和蝴蝶扣针,并盖上纱布敷料。如果需要则按压。 6)小心将蝴蝶扣和注射器分开,保持注射器无菌。 7)连接注射器和采血装置(the Angel Wing Blood Collection)的配套适配器。 8)去除培养瓶顶部酒精棉。 9)通过指示线观察,每瓶接种10毫升。如果少于10毫升,则全部注入有氧瓶。 10(如果必须从中心静脉插管抽血,则选择最近插入导管的部位(除非是排除某导管所致脓毒 症sepsis)。操作详见附件B( 4 11(尽快送抵实验室。不要冷藏血培养标本。直接将标本送至微生物学实验室。 12(使用上述相同步骤送检第二套血培养。如果有不同采血点,则第二套可立即取出。如果使 用同一个采血点,则等待至少10分钟再采第二套。如果可能(即不急于应用抗生索),则1-3小时 后采集第三套。 13.为除外某些特殊的诊断,可能需要更为具体的血培养程序。请参阅以下推荐: 1)疑似导管相关性脓毒症(catheter sepsis) (1)采集2套血培养。 (2)一套从可疑导管处。 (3)同时,第二套必须从另一个单独的经皮位点采集。 (4)两套标本分别注明采集时间。 (5)如果导管可以拔出,则无菌操作剪下皮内大约1英寸长的部分,置于干燥无菌容器送抵微 生物学实验室。不送检配套血培养,则不能送检导管尖端。此时导管尖端不会被培养。 2)急性心内膜炎 (1)抗生素治疗前,30rain内从不同位点采集2-3套。 (2)获得培养标本后开始治疗。 )亚急性心内膜炎 3 (1)第一天抽取2-3套,间隔30-60分钟。这会有助于诊断持续性菌血症。 (2)如果都是阴性,则第2天和第3天再采集标本(24小时内不超过4套)。 (3)确定病原学诊断比立即抗生素治疗更重要。 4)分枝杆菌血培养(AFB) (1)使用分枝杆菌血培养瓶(BD BACTEC Myco/F 裂解培养瓶)。 (2)皮肤消毒和常规血培养相同。 (3)培养瓶内接种5毫升血液(不要超过5毫升)。不要将患者标识码贴在培养瓶条码上。 (4)将培养瓶置于棕色袋,立即送抵微生物学实验室。 (5)必须有医生开具的分枝杆菌血培养检查单。 5)真菌培养 (1)假丝酵母菌属菌种——如果医嘱进行真菌培养,则遵循上述细菌培养常规程序。 (2)组织胞浆菌、隐球菌、或其他丝状真菌—需要特殊的分离器培养瓶。 ?培养瓶光敏,须置于棕色袋储存。 ?接种5ml(最低3m1)血液。 ?(将棕色袋内血培养直接送抵微生物学实验室。 6)病毒血液培养,只有单纯疱疹病毒(HSV)可经传统的培养检查。(注意肝素管不能用 于PCR检查,请参阅分子实验指南) (1)取一个3毫升肝素化管,皮肤消毒同上。 5 (2)将标本立即送抵微生物学实验室。 (3)在检查单上注明疑似HSV,以优化培养技术,降低成本。 (4)必须由临床医生专门做出病毒血液培养的医嘱。 7)疟疾、巴贝斯虫或其他血液寄生虫 (1)紫帽(EDTA)真空采血管采集3毫升血液。 (2)采集后2小时内将标本送抵微生物学实验室 (3)说明患者的旅行史(如果有)。 8)疑似少见菌如布鲁菌、弯曲菌或巴通体: (1)咨询感染科医生。 (2)须微生物学实验室进行特别检查。 9)血清抗菌活性 (1)须感染科、微生物学或临床病理学专家授权。 (2)抗微生物药物输注前和1小时后,采集2-5毫升血液,置于红帽管。 (3)包括:患者隔离、培养数量、标本采集时间、剂量时间、和抗生素治疗。 (4)要求:各2毫升血清置于塑料瓶,冷冻。 10)曲霉菌半乳甘露聚糖抗原 (1)3-5毫升血液,置于血清分离胶管(SST)。 (2)尽快送抵实验室。 无菌体液(除尿和脑脊液)Body Fluids,Sterile(except urine and cerebrospinal fluid) 1(皮肤消毒要求同血培养。 2(使用无菌针头和注射器采集液体。 3(分离需氧和厌氧微生物,须送检10毫升液体,置于无菌容器。 4(有多余液体时,可注入血培养瓶,操作同血培养。此时多余的液体还可以进行革兰染色。 5(病毒培养,3毫升置于无菌小瓶(最少1毫升)。 6(疑似结核或真菌感染,则至少5毫升,置于无菌容器。 7(立即送检。 8(不能用拭子留取无菌部位体液。 骨髓Bone Marrow 1(标本采集过程中,医生须穿隔离衣、戴口罩和手套。 2(皮肤消毒要求同血培养。 3(用无菌巾悬垂覆盖周围皮肤。 6 4(使用无菌针头和注射器经皮抽吸骨髓。 5(每种检查3-5毫升: 1)细菌培养,注入血培养瓶——不能置于肝素管。 2)AFB培养和真菌培养,置于分枝杆菌填菌血培养瓶。 3)病毒检查则置于肝素管。 4)细小病毒B19分子生物学,置于EDTA管。 6(室温,立即送检。 百日咳博德特菌召Bordetella pertussis 培养和聚合酶链反应PCR分析 1(微生物学实验室提供标本采集系统,包括:1支用于培养的含碳拭子,1支用于PCR的拭子。室温保存采集系统。 2(使用两个拭子采集两个标本。一个拭子用于接种含碳转运培养基。另外一个拭子用于PCR检测(藻酸钙拭子不能用于PCR检测)。 3(患者坐姿舒适,头部后倾。 (如果有鼻窥器则使用鼻窥器。通过鼻孔将拭子插入,直到遇到阻力,此时拭子接触到鼻咽部。 4 5(旋转拭子轻轻擦拭,与鼻咽部接触20-30秒或直到诱发咳嗽。 6(将拭子放入转运培养基。标识患者姓名和识别号码(如,病历号)。转运时将拭子留在管内。 聚合酶链反应PCR 1(首选标本是干拭子取材标本。不要用藻酸钙拭子。 2(立即送检。 支气管刷/洗液/灌洗液Bronchial Brush/Wash/Lavage 1(有经验医生才能采用这种技术。该方法的技术信息很容易从现有文献获得。 2(置无菌容器内,室温立即送检。 大疱、蜂窝组织炎、小泡Bullae,Cellulitis,Vesicles 1(皮肤消毒同血液培养。 2(用无菌针头和注射器抽吸液体/化脓性物质。 3(如果获得了抽吸物,将之置于合适的病毒或细菌转运培养基。 4(如果没有得到抽吸物,将小疱或大疱性病变打开,使用涤纶拭子(Dacron swab)采集病变 基底部的细胞。置于合适的病毒或细菌转运培养基。 7 蜂窝织炎 无论注射生理盐水与否,多数情况下,拭子或病损边界的抽吸物都不能分离到病原体。如果疑似少见病原体,则推荐选择病损边界(进展性边缘)打孔活检。将活检置于无菌容器,并放少量不含抑菌剂的盐水。 小疱液体和碎屑vesicle fluid and scrapings 选择一个新鲜的囊泡,用酒精轻轻擦拭,用无菌纱布彻底干燥。用一小针(26gxl/2英寸,结核菌素用注射器)抽吸水泡液,将之置于病毒转运培养基(先抽出培养液,再注射回去)。或使用拭子擦拭,将拭子折断置于转运培养基。所有过程无菌操作。应注意避免出血,因为出血会减少病毒的检出,如单纯疱疹病毒或水痘带状疱疹病毒感染,患者血清中会有中和抗体。 脑脊液Cerebrospinal Fluid 1(医师采集标本时应穿隔离衣、口罩和手套。因为用开口管采集标本,所以其他人员应远离或戴上口罩,以避免呼吸道感染。 2(用1-2,TOI消毒皮肤,70-90,酒精其次。由内向外圆周运动。 (无菌巾悬垂覆盖穿刺部位周围皮肤。 3 4(将针刺入。标本置于无菌防漏管内,共采集3瓶。采集足量标本,推荐如下: 1)细菌培养>1毫升 2)真菌培养2-5毫升 3)分子生物学检查>1毫升 4)结核菌培养5-10毫升 5)病毒培养>1毫升 5(拧紧瓶盖。将第三管培养,以减少皮肤菌群污染的可能性。室温立即送检。 体表Cutaneons(仅用于真菌学Fungal only) 头发 1(用钝手术刀刮头皮。 2(放置在干燥无菌容器。 3(室温立即送检。 4(下面的标本也可以接受: 1)头发残根(hair stubs) 2)堵塞的毛囊的内容物 3)皮屑(skin scales) 4)使用镊子从头皮捏下的头发 8 剪断的头发是不能接受的标本。 指甲 1(70-95,酒精消毒指甲。 2(用手术刀刮取最外层。 3(放置在干燥无菌容器。 4(室温立即送检。 5(下面的标本也可以接受: 1)变色或变脆的任何部分剪下来 2)指甲边缘下方深处的碎屑和碎片 皮肤 1(70-95,酒精消毒皮肤。 2(在病变活动边界用解剖刀采集表皮鳞片。 3(放置在干燥无菌容器。不要粘取标本。 (室温立即送检。 4 耳ear 1(外耳培养:按表浅伤口(wounds)处理。 2(中耳液将按各种体液标本(miscellaneous body fluid)处理方式进行处理。如果诊断是中耳炎, 则标本应通过鼓膜穿刺放液术(tympanocentesis)采集。 3(请注明具体的来源。 眼eye 1(用温和消毒剂消毒眼部周围皮肤。 2(化脓性结膜炎:用常规棉拭子采集脓性标本。 1)将拭子置于合适转运培养基,室温送检。 2)不能用于厌氧菌培养。 3)聚合酶链反应——仅用于衣原体。使用细菌学culturette采集标本,置于3毫升病毒转运培 养基。不要使用Aptima试剂盒。 3(角膜感染: 1)从微生物学实验室获取角膜包。 2)拭取结膜标本的方式同上所述。 3)采集多处角膜碎屑,直接接种到细菌琼脂培养基(巧克力琼脂,脑心浸液庆大霉素琼脂,羊 9 血琼脂,Schaedler肉汤)和域病毒转运培养基。 4)室温送检。 5)不必常规进行革兰染色。 4(眼内液: 1)通过手术针穿刺采集标本。 2)室温送检。 胃活检Galstric BiOpsy 1(仅用于幽门螺杆菌培养。需用适当的转运培养基。采集后lhr内送抵微生物学实验室。 生殖器来源Genital Sources 常规只检测淋病奈瑟菌。应医嘱要求可以检测优势的金黄色葡萄球菌、p溶血链球菌和酵母样真菌。正常无微生物部位标本(如经腹腔的羊膜腔穿刺液),可进行厌氧培养,前提是标本置于厌氧转运培养基运到实验室。 性传播疾病的检测参见衣原体/淋病Chlamydia/Gonorrhea。 前庭大腺Bartholin’s Glands 1(不要在粘膜部位使用酒精。皮肤准备参见一般部位。 2(吸取前庭大腺脓肿。 3(使用厌氧转运培养基送至实验室。 用于培养的子宫颈(宫颈管)标本Cervix(Endocervix)for culture 1(患者截石位(Lithotomy position)。 2(准备阴道窥器,除温水外,避免使用润滑剂。 3(插入阴道窥器,见到宫颈。 4(请用棉拭子拭去多余的粘液。 5(将涤纶拭子插入宫颈,轻轻转动,并停留10到30秒。 6(取出拭子,置于细菌转运培养基。 7(室温送检。 8(一般情况下阴道标本培养不会产生有意义的结果,所以除B组链球菌筛检外,不推荐阴道标本培养。阴道标本不能用于厌氧培养。 衣原体/淋病奈瑟菌PCR检测(通过Gen-Probe公司Aptima combo 2 CT/NG 试剂盒): 女性宫颈(female cervical) 1(从医疗配送中心获得标本采集包。 2(使用白色无菌拭子擦拭宫颈表面(exocervix),去除多余粘液。将该拭子弃去。 10 3(使用蓝柄拭子插入宫颈管。旋转10-30秒,退出。 4(将拭子转移到Aptima采集管,在第二线折断。拭子必须置于运输管中。 5(安全闭合运输管,标识并注明日期。 6(尽快送抵实验室。 女性阴道(female vaginal) 1(从医疗配送中心获得标本采集包 2(经过阴道口(introitus),将拭子插入2英寸,轻轻转动10-30秒。确保拭子触及阴道壁。 3(小心退出,不要触及皮肤。 4(将拭子转移到Aptima采集管,在第二线折断。拭子必须置于运输管中。 5(安全闭合运输管,标识并注明日期。 6(尽快送抵实验室。 男性尿道 1(从医疗配送中心获取标本采集包。 (嘱咐患者在采样前至少2个小时内不要排尿。 2 3(将蓝柄拭子插入尿道内2至4厘米。旋转3至5秒后退出。 4(将拭子标本转移到Aptima采集管,在标志线处折断拭子。拭子必须保留在转运管里。 5(将转运管安全封口,注明标识和日期。 6(将标本尽快送到实验室。 咽部 1(从医疗配送中心获取标本采集包。 2(用蓝柄拭子采集标本。 3(涂抹扁桃体柱(Tonsillar pillars)之间的区域以及扁桃体柱后面的区域。 4(将拭子标本转移到Aptima采集管,在标志线处折断拭子。拭子必须保留在转运管里。 5(将转运管安全封口,注明标识和日期。 6(将标本尽快送到实验室。 直肠 1(从医疗配送中心获取标本采集包。 2(对于无症状男性:用无菌生理盐水湿润拭子后插入肛门和直肠,保留20秒后拿开。对于有 症状男性:通过肛门镜涂抹直肠黏膜。 3(用蓝柄拭子采集标本。 11 4(将拭子标本转移到Aprima采集管,在标志线处折断拭子。拭子必须保留在转运管里。 5(将转运管安全封口,注明标识和日期。 6(将标本尽快送到实验室。 淋病培养 1(从临床微生物学实验室获取含碳拭子(Charocal swab)。 衣原体/淋病,尿液标本,男性/女性 1(嘱咐患者在采样前至少2个小时内不要排尿。 2(准备一个塑料的,无防腐剂的,有安全盖的无菌尿液采集杯。 3(嘱咐患者采集前10-30毫升尿液(您可以在尿杯外做好标记,以显示所需的量)。注意在尿杯放置好之前,患者不能开始排尿。 4(安全的盖上盖子。 5(用吸管(已备好)将尿杯中的尿液转移到Aptima采集管中,直到液面上升到尿管的2条黑线之间。 (盖上尿管并标记患者身份信息和日期。 6 7(将标本尽快送到实验室。 子宫内膜 1(患者截石位。 2(插入窥器并使宫颈可见。 3(在宫颈内放置一条窄腔导管。 4(通过导管插入培养拭子的尖端并采集子宫内膜标本。此方法可防止接触宫颈黏膜,减少了污染的机会。 5(将培养拭子放到细菌转运培养基上,室温送检。 尿道 参照衣原体/淋病。 阴道 阴道标本培养常常不会产生有意义的结果。所有阴道标本培养都要除外B组链球菌。如果怀疑是淋病,建议进行核酸检测。参照衣原体/淋病。如果怀疑是酵母样真菌感染,应当进行酵母样真菌培养,而不是常规培养。所有阴道标本病毒培养都要除外单纯疱疹病毒。请把单纯疱疹病毒培养在病毒转运培养基中。 12 分子实验指南A:病毒 实验 需要量 标本类型* 分析敏感性* 52×3mi(如果白细50拷贝/10淋巴细胞,检测EBV定量(病毒载量) 全血(至少2个3mi紫色帽管) 5胞低收多取) 1(7-7log拷贝/10淋巴细胞 10 脑脊液 EBV定性 6-60拷贝/反应 脑脊液眼玻璃体液(vitreous humor) 羊水 CMV 20-200拷贝/反应 BAL 如医嘱多个实验: 脑脊液 Iml 单纯疱疹病毒1+2 眼玻璃体液(vitreous humor) 10拷贝/反应 即可 BAL ?对于疱液例外:脑脊液 拭子拭取液体,放玻璃体液(vitreous humor) 水痘带状疱疹病毒 入2ml病毒转运水泡液(vesicle fluid)(可用VTM?) 10拷贝/反应 培养基(VTM) BAL 视网膜活检 脑脊液 JC病毒 100拷贝/反应 400拷贝/ml,检测2.6-7.5log,l0JC病毒定量(病毒载量) 血浆(紫管或ppt血浆准备试管) 1.0ml 拷贝/ml 脑脊液 呼吸道标本,置病毒转运培养基 肠道病毒 大便或直肠拭子 1.0ml 0.1pfu/ml 血浆【紫管或血浆准备试管(PPI试 管)】 血浆(PPT管)~~ 300拷贝/ml, CMV定量(病毒载量) 1.0ml 4小时之内分离并冷冻!! 检测2.5-8.0log拷贝/ml 10 全血(紫管) 培养后的分离株 液体:0.5ml 未知 CMV基因型 BAL 组织:40mg 新鲜组织 血浆(紫管或PPT)或血清(红管 骨髓(紫) 细小病毒B19 1.0ml 100拷贝/反应 羊水 BK病毒定量(病毒载200拷贝/ml,检测2.3-7.0log10血浆(紫管或PPT) 1.0ml 量) 拷贝/ml 尿液 BK病毒定量 1.0ml,检测一或10拷贝/反应 腺病毒 尿液 两种病毒均可 1拷贝/反应 腺病毒定量(病毒载量) 血浆(紫管或PPT) 1.0ml 100拷贝/反应 腺病毒基因型 血浆(紫管或PPT) 1.0ml 具有高危因素的人乳头巴氏涂片后留取宫颈标本(仅用于医嘱必须以细胞病理学方式执行!!! 瘤病毒(杂交捕获) Digene设备) 13 肝炎 实验 体积 标本:血浆* 分析敏感性* 200 考贝/ml,检测2.3到,乙肝病毒DNA定量 1.0ml PPT试管!! log考贝/ml 10采集后4小时内完成离心、 43 IU/ ml,检测 丙肝病毒DNA定量 分离及冷冻!!) 1.0ml 1.6-7.8 logIU/ml 10 丙肝病毒基因型 0.5ml ?11,000IU/ml 分子实验指南B:细菌 实验 标本类型/需要的体积 体积 分析敏感性* 埃利希体(人粒细胞埃 利希体HGE和人单核细全血(紫) 1.0ml 胞埃利希体HME) 咽拭子(干) 肺炎支原体 咽拭子(病毒培养基) BAL=2.0ml 外送 BAL 军团菌 BAL BAL=1.0ml 咽拭子(于) 肺炎衣原体 咽拭子(病毒培养基) BAL=1.0ml BAL 百日咳博德特菌 百日咳标本包中的人造纤维鼻咽拭 0.2cfu/反应 子子宫颈,尿道,直肠或咽拭子CT:5IFU/ml (尿) (Aptima Unisex Swab Kit) 沙眼衣原体(CT)/淋病7.25IFU(拭子) 结膜拭子3mlM4培养基 奈瑟菌(NG) NG:250个细胞/ ml (尿) 尿液:10-15mi(2m1置于Aptima urine 362个细胞(拭子) kit) 难辨梭菌 稀便或软便(置于无菌容器) 10拷贝/反应 *不能用绿管(肝素干扰PCR( *纯化DNA的分析敏感性(analyckal Sensitivity):可能与或不与临床敏感性(clinical sensitivity)有关联。其敏感性通常等于或高于细胞培养。“检测(measure)”表示定量分析的可测量范围。 方法学:HCV基因分型和CNV基因分型基于序列分析,沙眼衣原体/淋病奈瑟菌(CT/NG)是TNA(转录介导扩增),其余测定是实时PCR( 14 鼻腔监测Nares Surveillance 鼻腔标本培养技术: 使用拭子进行的鼻腔标本培养(主要针对MRSA),具体操作如下: 1(用手握住拭子帽(防止拭子被污染或接触到自己的手指)。 2(拔出拭子,深入鼻前庭并旋转(一个拭子采集两侧鼻腔)。 3(小心将拭子插回培养管。( 4(在培养管上注明患者的姓名、标本类型(鼻拭子培养)和日期。 5(将拭子连同培养申请单一起送至微生物学实验室。 6(鼻拭子只进行MRSA的检测,不做常规培养。 鼻咽部nasopharyngeal 抽吸液/洗液(仅用于病毒分离) 1(连接吸引器和导管(拆除外包装),调整为适当的压力进行抽吸。 2(无吸引器时,将导管插入鼻腔,朝向后方,指向外耳道开口。注意事项;插入深度需要达到 后鼻咽部,即前鼻腔与外耳道开口处。 3(使用吸引器,旋转吸引后缓慢撒出导管。 4(使用M4RI掖洗脱管腔,洗脱液进行病毒培养。 5(吸取3-5毫升无菌生理盐水注入一个新的无菌吸引球内。 6(将无菌球插入鼻腔最深处。 7(使用吸引球向一侧鼻腔内注入生理盐水后立即采集所有可见的鼻腔标本。 8(将采集的液体置入干燥无菌容器,或加入小于等于3毫升的病毒培养转运基(M4RT)。 9(立即室温送检。 拭子(病毒培养和百日咳PCR。不适用于快速病毒检测) 1(患者坐位,头后仰。 2(插入鼻内镜。 3(通过内窥镜插入鼻咽拭子(连接有韧性的导线)至鼻咽部。 4(轻轻旋转拭子并停留20-30秒。 5(取出拭子放入无生长促进作用的转运培养基内(如已取出原始拭子的培养容器)。将拭子放 入病毒培养专用的病毒转运培养基中。 6(室温送检。 15 注意事项; 由于拭子尖端较小容易干燥,所以转运时必须使用转运培养基。病原可能很脆弱, 婴幼儿采集标本时需要使用专用的吸引球。 如果考虑是特殊的病原菌如百日咳博德特菌,在标本采集和转运过程中需要使用专用的培养基。(这里专指百日咳博德特菌的培养及PCR操作) 拭子(使用专用拭子(flocked swab)进行呼吸道病毒快速检测) Copan~可弯曲的取样无菌拭子(SAP#114949) 病毒转运培养基(SAP#44674) 1(打开拭子管,拔出拭子。将拭子靠近患者的头部,测量患者鼻腔至耳前的距离。 2;用带手套的拇指和食指捏住拭子(大约在上一步测量的距离一半的位置)。该距离相当于患者中低鼻甲的采样位置。 3(将患者的头部稍向后倾倒,嘱患者闭眼以减轻不适感。将拭子轻轻插入一侧鼻腔,水平进 入测量的距离,直至遇到阻隔为止。旋转拭子2-3周,然后放置5-10秒使其充分吸收鼻腔分泌。 (取出拭子,插入病毒转运培养管中。在折线处折断塑料拭子。小心地封好培养管,贴上标签。4 放入生物安全转运箱,通过气动管道送至实验室。 鼻 nose 1(使用合格的棉棒采集鼻孔培养的标本。对/L童的培养,采用鼻咽拭子便于采集。 2(室温送检。 3(注意:除非用于评估葡萄球菌的定植情况,否则该标本是不适宜的。 前列腺 prostate 1(用肥皂和水清洗阴茎头。 2(经直肠前列腺按摩获取前列腺液。 3(用无菌拭子采集前列腺液。 4(在室温下运送标本。 5(选择前列腺按摩前和后最近时刻的尿液同时送培养。 痰 sputum 1(得到合适的标本需要患者能够配合。 16 2(指导患者按照下述进行: 1)用水漱口以清除口腔的食物颗粒及碎屑 2)让患者做深呼吸并咳嗽几次以获得深部痰液 3)患者应将痰涂在干燥灭菌的容器中 4)结核患者应在清晨留取痰标本并放置于有密封盖的容器中。有泄漏的标本。有泄漏的标本可能被拒收。在室温下留取的痰标本应立即送检。如预计超过一小时则标本应冷藏送检。 1(咳痰标本可用于细菌、分枝杆菌和真菌培养。不可用于病毒培养。 2(临床及X线胸片提示结核的患者应采集3份清晨第一口痰标本(最好是不同的3天)做抗酸杆菌培养。 诱导痰 诱导痰通过呼吸科医生和护士(pulmonology and nursing staff)采集。诱导痰标本可用于检测军团菌、卡氏肺胞菌(PCP)(置于冰上)、真菌及抗酸杆菌。不可用于病毒培养或常规细菌培养。 粪便stool,feces 1(采集粪便标本应使用干净的便盆或在马桶座和马桶底部之间放置的塑料袋。不能送检被尿液或马桶水污染的粪便标本。 2(将留取的标本转移至干净、干燥的容器或用适当的防腐剂。 3(室温下2小时内送检。 注意: , 在采集粪便标本之前住院超过3天的患者,其粪便标本不能用于常规肠道细菌培养。 , 只有稀便或腹泻便才能进行常规细菌培养和艰难梭菌培养及PCR检测。艰难梭菌检测限每周一 次。 , 采集粪便标本后应立即将标本放在合适的粪便防腐剂或转运培养基中。检测虫卵和寄生虫,使 用10,福尔马林和改良的PVA;常规便培养使用Cary-Blair转运培养基。 , 如果无法留取粪便标本,可采用下述方法进行培养: , 直肠粘膜拭子,或 , 将直肠拭子插入肛管1英寸(不可用于轮状病毒/腺病毒EIA或艰难梭菌检测)。 , 对于CMV肠炎,建议用活检组织培养。粪便常常对培养用细胞有毒性,因而影响粪便中 病毒的复活增殖。 17 咽喉部 throat 1(使用棉、涤纶(病毒培养)、或藻酸钙拭子。 2(使用压舌板,光源良好,视野良好 3(到达悬雍垂后方用拭子擦拭: a)双侧咽喉扁桃体,以及 b)咽后壁,以及 c)任何溃疡、伸出、病变或炎症区域。 4(将拭子放在合适的转运培养基中并在室温下送检。 5(细菌培养只检测β溶血性链球菌和溶血隐秘杆菌。 组织 tissue 1(组织标本的采集是一种有创性操作,须由经过训练的外科医生完成。 2(应在无菌条件下采集组织标本,包括从病变中心以及边缘采集。 3(无菌纱布用灭菌的并且不含抑菌剂的盐水润湿。将标本置于该纱布上,放在无菌容器中。 4(室温下1小时内送达,以确保厌氧菌能复活增殖。 5(不要将标本置于福尔马林中。 6(不要用拭子将组织塞进培养管中,它不是可接受的转运装置。 尿标本(用于细菌、真菌、抗酸杆菌、寄生虫和病毒培养)Urine for Bacterial, Fungal,AFB,Parasite and Viral Cultures 1(女性患者采集中段尿进行细菌培养 a) 脱去内衣 b) 用肥皂水彻底洗手,冲净并用一次性纸巾擦干或甩干。 c) 用一只手拨开阴唇并保持分开; d) 句打开冲洗包(WASHPACK)冲洗尿道口及周围区域。棉球弃到废物袋中。 e) 另一只手持无菌尿杯,不要触及杯子或杯盖的内表面。 f) 将开始的20-25ml尿排泄到马桶中,然后采集剩余的尿液,不要中断尿流。杯子不要碰触 大腿或衣服。 g)将尿杯盖上 h)立即将标本移入尿细菌转运培养基 2(男性患者采集中段尿进行细菌培养 18 a) 洗手 b) 使包皮完全缩回 c) 用第一块小毛巾以单向运动包住阴茎头,再用第二块小毛巾重复同样操作,如果不能环绕 包住,在清洁前握住包皮后方; d) 先弃掉20-25ml尿于马桶中,然后采集剩余的尿液到容器中,不要中断尿流。注意尿杯不 要碰触阴茎。 e) 将尿杯盖上 f) 立即将标本移入尿细菌转运培养基 3(第一次晨尿行核酸扩增试验(查衣原体/淋病) a) 采集尿标本前2小时患者一定不能排尿 b) 采集最初排出的10-30mi尿液,置于干净的空塑料杯中 c) 取2ml尿液置于特定试验专用的转运培养基中 4(耻骨上穿刺 a) 此操作非常规技术,最好由有经验医生操作,具体操作方法参见相关文献 ) 需事先与临床微生物学实验室联系(电话5-5077)。如果同意做厌氧培养,应将标本放置于b 厌氧环境中。 5(留置尿管尿液标本 a) 不要从尿袋中留取尿标本,因为这些部位在导管外可能有细菌生长 b) 用酒精棉球清洁导尿管 c) 使用无菌注射器和针头穿刺尿管,直接从尿管中吸取尿液 d) 将尿液放入无菌的标本容器中或合适的培养基中 e) 不接受尿管尖端培养 6(标本的处理 a) 留取标本后立即在容器上贴上标签 注意:?尿液的CMV培养须在一小时内送达 ?抗酸杆菌培养至少需40ml尿液 病毒转运培养基(M4RT)Viral Transport Media(M4RT) 如果预期病毒生存能力不受影响,有些标本可以不用转运培养基,这类标本包括正常无微生物体液如脑脊液、胸水、血液、尿液以及一些并非完全无菌的标本如BAL和粪便。如果稳定性有疑问,应将这些标本放置于合适的病毒转运培养基如M4RT中。更多信息参考特殊检验用户指南。 19 1(组织和活检材料可以直接放置于病毒转运培养基中(M4RT)。每个标本直径不必大于1-2cm。 2(脓肿、大水疱、脓疱、小囊泡、伤口以及皮肤刮屑等可用涤纶拭子采集,直接放置于病毒转运培养基中。如果是针吸材料,放置于M4RT小瓶中,量不要超过3ml(相当于转运培养基的量)。 3(脑脊液标本需用无菌容器盛放送检 4(尿液标本需用无菌容器盛放送检 5(直肠拭子(只能用涤纶拭子)应放置于M4RT中送检 6(血标本需用肝素管 7(藻酸钙拭子和棉拭子可以干扰某些病毒的复活增殖,并可作为PCR反应的抑制剂,不宜用于该类型检测 8(对于CMV肠炎,建议用活检组织培养。粪便常常对培养用细胞有毒性,因而影响粪便中病毒的复活增殖。 9(腮腺炎:可接受的用于培养的标本包括颊拭子(按摩腮腺后)和尿液 伤口wounds 1(对于闭合伤口,参考脓肿、大水泡、蜂窝织炎和小囊泡 2(对于开放伤口: 1)物理方法(mechanically)清洁开放伤口的窦道,不要使用杀菌剂。尽可能清除表面的菌群 2)努力从伤口基底或边缘采集样本做培养,避免采集“正常菌群”微生物 3)对于窦道采样建议遵循: (1)针吸或导管吸引 (2)从窦道内层刮拭 a)只有在上述样本无法获得的情况下方接受窦道拭子。窦道拭子可能不能精确反映内在的疾病 过程。 b)不要送检浅表伤口标本做厌氧培养。宜采取伤口深部边缘活检标本行厌氧菌、分枝杆菌和真 菌培养。 20
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