[doc] 止血中草药断血流的研究进展

[doc] 止血中草药断血流的研究进展 止血中草药断血流的研究进展 ? 454?安徽医药AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal2007May;11(5) ?小专论? 止血中草药断血流的研究进展 程霞,陈国广,石绍华 (1.南京工业大学制药与生命科学院,江苏南京210009;2.江苏恩华药业集团,江苏徐州221007) 摘要:断血流是一味有着较高医用价值的止血类中草药.本 文综述了断血流近年来的研究进展,包括化学成分,有效成分 的提取工艺,含量测定,药理作用,临床应用等,并提出了运用 新技术方法进行综合研究的内容. 关键词:断血流;有效成分;药理作用;临床应用 1基源 断血流(HerbaClinopodii)最初是从安徽省发掘出来的民 间使用的草药.其入药商品为唇形科植物风轮菜Clinopodi— amchenensis(Benth.)0.Kuntze与多头风轮菜(荫风轮)a— nopodiumpolycephalum(Vaniot)C.WHetHsuan的干燥地上 部分.风轮菜始载于明《救荒本草》(1406年),荫风轮始载于 《植物名实图考》(1848年),风轮菜分布于浙江,江西,福建, 广东,广西,贵州等地;荫风轮主要分布于江苏,安徽,广西, 贵州,云南,四川等地.2005版药典一部收载的断血流即为 上述二种原植物. 2化学成分及有效成分的提取与分离 中药断血流的药用植物风轮菜和荫风轮中,含有皂苷类, 黄酮类,氨基酸类,多糖类,酚性物质和挥发油等化合物,其中 皂苷类和黄酮类化合物为断血流止血,抗炎的有效成分’. 2,1化学成分 2.1.1黄酮类已从风轮菜中分离出多种黄酮类化合物. 包括香蜂草苷(dydimin),橙皮苷(hesperidin),异樱花索一7一芸 香糖苷(isosakuranetin-7一rutinoside),芹菜素(apigenin),洋芹 素(1elereoin),柚皮素.7一芸香苷(nairutin)和江户樱花苷 (prunin)E4]. 2.1.2皂苷类从风轮菜中分离得到了风轮菜皂苷(clinop— odiside)B,C,D,E,F,Gl5』,从荫风轮中分离出风轮菜皂苷 (clinopodiside)A. 2,1.3挥发油荫风轮中挥发油成分约占0,13%,文献报 道的已鉴定出的挥发油成分有44种,主要是反式石竹烯,柠 檬烯和匙叶桉油烯醇等. 2.1.4其他成分除上述成分外,从风轮菜中还分离出了 B.谷甾醇,氨基酸,香豆精和鞣质等成分;从荫风轮中还分离 出香豆酸,树脂,蛋白质等成分. 2.2有效成分的提取与分离 2.2.1风轮菜皂苷A的提取分离纯化一乙醇回流柱层析法 风轮菜干燥全草粗粉,80%乙醇(EtOH)回流提取,提取液减 压回收EtOH至干,得浸膏.(10kg粗粉:1.2kg浸膏),转溶 于50?热水中,过滤,水溶液用EtOAc提尽黄酮类成分,继用 水饱和得n—BuOH萃取,合并n—BuOH萃取液,减压回收溶剂, 得浸膏10.8g,将10.8g浸膏进行低压柱层析(硅胶H500 g),CHC13.MeOH.H2O(7:3:0.3)洗脱,每份收集100ml,薄层 检测,20—28份合并,用硅胶H200g再进行常压柱层析, CHC1.EtOAc.MeOH(2:1:2)洗脱得粗皂苷,MeOH重结晶得 风轮菜皂苷A(10kg粗粉:60Omg皂苷A). 2.2.2大孔吸附树脂纯化断血流总皂苷该方法是将断血 流粉末通过乙醇回流,得断血流总皂苷提取液,回收乙醇,加 水溶解后用水饱和的醋酸乙酯萃取,取含断血流总皂苷的水 层溶液用D101大孔吸附树脂进行富集,纯化断血流总皂苷. 洗脱时,用蒸馏水,30%乙醇,70%乙醇各以3BV(BV为柱床 沉降体积)以1BV/h的速度依次洗脱,收集70%乙醇洗脱部 位,70%乙醇洗脱部位总皂苷洗脱率为86.8%.本法具有较 好的纯化效果J. 3断血流的质量控制 随着对断血流活性成分研究的不断深入,用于鉴别和测 定其含量的方法也有了较大的提高.最初报道的是采用分光 光度法测定断血流皂苷的含量,目前2005版《中国药典》中, 断血流鉴别项下规定的是采用薄层色谱法用醉鱼草皂苷IVb (曾用名:断血流皂苷A)作为对照品,进行有效成分的鉴定. 3,1断血流制剂质量控制针对断血流不同剂型,包括片 剂,颗粒剂,口服液,胶囊等,均有采用HPLC法进行含量测定 的研究报道-9J,其色谱条件,对照品,供试品溶液准备及测定 方法基本与2005版《中国药典》中断血流片项下含量测定相 同. 3,2断血流原药材的质量控制梁爱君等选择断血流皂苷 A作为指标成分,采用反相高效液相色谱法(HPLC),首次对 断血流药材进行了含量测定”,本法色谱柱为DISCOVERY C8(4.6mm×250mm×5Ixm),流动相为甲醇一水(73:27),流 速0.8ml?min,,检测波长250nm.结果断血流皂苷A在 15,0,39.0mm?L范围内呈良好的线性关系,平均加样回 收率为98.5%,RSD为1.3%(,z=9).该试验结果明, HPLC法测定断血流皂苷A含量的方法简便,灵敏,重现性 好.2005版《中国药典》中,断血流项下没有含量测定项.为 使其质量更加科学可靠,有必要为原药材建立含量测定 指标,并依此更好地控制原药材的质量.本法实测得断血流 皂苷A在断血流药材干品中的含量约为0.03%,0.07%,已 超过万分之一,按国家食品药品监督管理局的新药质量标准 研究技术要求,此成分可独立作为含量测定指标. 4药理作用 4.1一般药理学试验研究彭代银等进行了断血流皂苷的 一 般药理学研究,其目的是为了进一步探讨断血流在药用基 础上的安全性.该研究结果表明,在药效剂量下断血流总苷 对大鼠,小鼠的神经系统,家猫的呼吸系统及狗的心血管系统 均无明显影响,体现了本品有较高的安全性.在子宫活动试 验中发现,断血流皂苷对正常子宫有兴奋作用,但这一作用有 利于止血药效发挥. 4.2药效 4.2.1止血作用断血流的止血作用主要表现在直接(创 安徽医药AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal2007May;11(5)?455? 伤)止血,间接促进凝血,收缩血管三个方面.(1)家兔颈动 脉切口,股动脉切口,家兔肝脏,后肢皮肤,肌肉切割,外敷断 血流粉,止血作用均强于淀粉P<0.ol,止血时间均比云南白 药明显缩短(P<0.01).(2)对进行了6d断血流醇提液灌 胃的小鼠进行断尾出血时间,出血量和凝血时间测定(毛细 玻璃管法)试验.结果经方差分析,断血流缩短出血时间,减 少出血量比生理盐水(阴性对比)作用明显(P<0.o1),断血 流缩短出血时间,减少出血量与云南白药(阳性对比)相比差 异无显着性(P<0.o1),而凝血时间试验表明断血流与生理 盐水组的凝血时间差异无显着性(P<0.05),凝血时间分别 为:生理盐水183.04-57.35S,云南白药126.04-46.7s,断血 流为165.04-51.47S.此结果提示断血流的止血作用不在于 促进凝血.但有相反结果文献报道,断血流总苷剂量20mg ? kg和大剂量40mg?kg(相当临床试用量按体重计6. 67倍和13.33倍)用于小鼠,可明显缩短小鼠断尾出血时间, 减少出血量,并缩短凝血时间.家兔大剂量10mg?kg和中 剂量5mg?kg(相当临床试用量3.34倍和1.67倍)可使血 浆复钙凝血时间(PRT)缩短;10mg?kg也可明显缩短凝血 酶原时间(SPT)和白陶土部分凝血活酶时间(KfyITF),但对大 鼠优球蛋白溶解时间无明显影响,表明本品可通过激活凝血 系统,促进纤维蛋白形成而凝血,从而发挥止血药效.(3)取 家兔8只,用断血流醇提物20%水溶液进行离体兔耳血管灌 流法试验,每次给药0.5ml,测定20rain内血流量变化,与给 药前比较.结果经F检验,风轮菜可使灌流量明显减少,取 大鼠24只分成4组,断血流醇提物配成0.8%水溶液进行大 鼠在体肾脏灌流试验,每次给药0.1ml,观察给药前后灌流压 差值和灌流压提高值.结果经F检验,风轮菜明显提高灌流 压,给药前后灌流压差值为78.66?13.04mmHg,流量压提高 118.4%.此实验结果提示风轮菜止血作用主要在于收缩血 管.刘青云等研究发现醇提风轮菜提取物能比水提物更好的 提高家兔离体胸主动脉,肺主动脉,子宫动脉,肾动脉,门静脉 等血管的收缩力,其中对子宫动脉作用最强,其次为肾动脉, 胸主动脉,肺主动脉.起作用于去甲肾上腺素比,作用缓慢, 温和而持久,硝普钠可拮抗风轮菜提取物的收缩血管作用. 4.2.2抗菌作用采用平皿稀释法,对风轮菜和荫风轮进 行不同浓度抗菌作用测定,培养观察48h,结果显示风轮菜和 荫风轮的水提取液对金色葡萄球菌,绿脓杆菌,痢疾杆菌,肺 炎双球菌,大肠杆菌有一定的抑制作用,且最小抑菌浓度为 1:10—1:20. 4.2.3抗炎及免疫作用荫风轮总皂苷对大鼠足趾肿胀,大 鼠炎性肉芽肿,小鼠皮肤及腹腔毛细血管通透性增高有抑制 作用,并可兴奋大鼠肾上腺皮质,表现出抗炎作用.荫风 轮总皂苷能抑制巨噬细胞吞噬功能,升高小鼠血清IgG水平, 降低血清补体总量.荫风轮浸膏对大鼠蛋白性关节肿,甲醛 性关节肿,小鼠耳壳炎症,毛细血管通透性增高有明显抑制作 用. 4.2.4缩子宫作用断血流总苷浓度0.075,0.15g?L可 显着提高离体大鼠子宫收缩幅度,10,5,2.5mg?kg可使家 兔在体子宫收缩幅度增加,并增加子宫活动力.由于子宫收 缩,可压迫子宫血管,利于子宫血管闭合.此作用可能是断血 流总苷对子宫异常出血疗效显着的因素之一. 4.2.5抗辐射作用小鼠灌胃荫风轮浸膏1.2g?kg可明 显提高钴60照射后的存活率. 4.3毒性作用荫风轮,风轮菜用体积分数为75%的乙醇 提取,提取物配成体积分数为50%的水溶液,其LD.>20g? 一 .风轮菜,荫风轮用体积分数为27%的乙醇提取.提取 物配成体积分数为50%的水溶液,可使家兔耳出现红肿,坏 死等现象,但短时间内即可恢复正常.小鼠灌胃风轮菜及荫 风轮用体积分数为27%的乙醇提取,提取物配成体积分数为 50%的水溶液.其LD.均大于20g?kg,.小鼠灌胃给予不 同剂量的断血流浸膏,其LD.为(14.64-2.4)g?kg,.0.6g ? kg断血流浸膏对小鼠的发育有一定促进作用,而3.6g? kg一断血流浸膏则对小鼠的发育有一定的抑制作用,但无明 显差异,且断血流浸膏对小鼠的血象及肝肾功能无明显不良 影响.剂量在20,100mg?kg内的断血流浸膏不会影响家 兔心电图波形及心电传导时间,只有超过120mg?kg时,才 会产生致命的影响.断血流浸膏对家兔血压也有相似的作 用. 5临床应用 断血流为70年代从民间验方筛选,经临床验证后被国家 药典录入的少数几个单味药之一,其疗效确切,安全性高,被 公认为中医临床首选口服妇科止血药.临床上断血流制剂广 泛用于治疗各种出血,单纯性紫癜,原发性血小板减少性紫癜 等症. 5.1治疗子宫出血100例使用宫内节育器后的妇女服用 断血流颗粒,月经量减少95例,无效5例.未服断血流颗粒 的100例妇女中有效7O例,无效30例.分析认为断血流颗 粒减少月经量的机制可能与减少子宫内膜的各种生化介质如 纤溶原激活物,前列腺素和溶酶体等的释放有关.1:3服米 索后服用复方断血流胶囊组与不服复方断血流胶囊组比较流 产效果,转经时间(月经恢复的平均天数),胚囊排出的平均 时间无显着差异,而两组比较阴道出血时间,阴道出血量少于 自身月经量或相似的患者比例,12—24h胚囊排出时间等均 有显着性差异.米非司酮,米索前列醇配伍断血流胶囊用 于终止早孕可明显减少出血量l】.服用断血流片的49例功 能性子宫出血患者中有效39例,服用安络血片的20例患者 中仅4例有效.说明断血流片治疗功能性子宫出血有良好疗 效. 5.2治疗血友病服用荫风轮片可治疗血友病,防止或减少 出血. 5.3治疗宫外孕有人试用单味断血流(荫风轮)治疗宫外 孕取得了较好效果,开创了单味草药治疗宫外孕的先例. 5.4治疗其他疾病断血流片对遗传性毛细管扩张,过敏性 紫癜,单纯性紫癜等病症也有较好的疗效.民间还用断血流 治疗感冒头痛,乳腺炎,痢疾,荨麻疹,过敏性皮炎,黄胆型肝 炎,胆囊炎等症. 5.5不良反应少数患者有轻度恶心,腹泻现象,但减量或 停药后即愈,无其它不良反应. 6结论与讨论 断血流原植物定性分析,表明其中含有黄酮,皂苷,氨基 酸,多糖,酚性成分和挥发油等,且具有生理活性多样性.目 前研究主要集中于断血流皂苷及其药理作用上,缺乏一个连 续的综合研究体系.笔者认为,考虑到断血流的药用发展前 景,应对以下内容进行深入研究.(1)化学成分及其药理作 ? 456?安徽医药AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal2007May;11(5) 中药注射液静滴的安全性问题及其防范 陈亚媚 (浙江省绍兴市中医院,浙江绍兴312000) 关键词:中药注射液;安全性;药物不良反应 近十余年来可以静脉滴注的中药注射液品种不断增多, 为临床治疗疾病提供了更多的选择,并取得了较好疗效.但 随着临床药学和药物不良反应(ADR)监测工作的深入,安全 使用中药注射液已越来越引起人们的重视.本文通过查阅文 献,结合临床使用情况,分析中药注射液静滴引发安全性问题 的原因及其防范措施,希望引起药品生产厂家和临床工作者 的重视. 1产生安全性问题的原因 1.1机体因素药物在体内的吸收,分布,代谢,排泄的过程 与患者的年龄,性别及病理生理状态等有关.女性对药物敏 感度及耐受性较男性差,导致ADR发生率较高.老年人的 ADR发生率较高,可能与多种因素有关,如老年人肝肾功能 减退,靶器官对某些药物的敏感度增高,另外,老年人一般病 种较多,合并用药也多,因此ADR的发生率也较高. 1.2药物因素中药注射液成分复杂,多数含有酶,皂苷(一 般为有效成分),鞣质,角质蛋白等大分子物质,静滴给药后, 这些大分子物质作为抗原,与蛋白结合物有高度致敏活性,导 致变态反应;多种药物并用,药物问相互作用可使ADR发 生增加,而中药注射剂常有多种成分组成,与其他药物配伍易 发生ADR;中药注射剂生产厂家不同,药物提纯不过关,稀释 剂选择不当或浓度过高均可导致输液中不溶性微粒增多,可 引起静脉炎,过敏反应等,严重的导致过敏性休克或死亡. I.3操作因素中药输液的配置顺序,加药方法及放置时间 等均影响其稳定性,尤其是粉针剂应注意药物充分溶解后再 加入输液中,控制滴注速度等. 1.4对中药注射液静滴认识的局限经查阅许多中药注射 剂说明书后发现:(1)众多的说明书很少提及可能发生的 ADR,更多的是用”偶见”或”偶有”来表述;对中药注射剂中 各成分的吸收,分布,代谢,血浆蛋白结合率不很清楚.(2) 中药注射剂的理化性质,pH值,配伍禁忌大部分不能明确提 示.(3)药物的相互作用不是十分清楚,对一些禁忌症未予 明确阐明.这些都是药物生产厂家和临床工作者在今后的工 作中应重视的问题. 2防范对策 2.1询问过敏史,并作王晓瑜等在对413例中药静 脉滴注引起的ADR统计后得出结论,既往有ADR或家 族ADR史37例,占9%,说明这部分患者使用中药注射剂更 易发生ADR.对于此类患者,在用药前应详细了解其本人和 家族的ADR史,除避免应用曾引起过ADR的药物外,还应在 用药过程中加强ADR的观察. 用方面,提取单一有效成分,进行定性定量研究,并确定其作 用机制;(2)药材种植方面,按照GAP规范种植的研究;(3) 质量控制方面,运用新的研究技术建立完善的断血流中药指 纹图谱,统一控制断血流提取物的质量标准;(4)剂型和药效 方面:初步调研发现目前断血流制剂品种多达12种,包括片, 胶囊,颗粒剂,口服液,糖衣片,薄膜衣片,分散片,滴丸,泡腾 片,口崩片,软胶囊,胶丸等,应对各种剂型与药效的关系进行 研究,以便为临床正确用药提供帮助;(5)开展与本品相关的 药物经济学方面的研究. 参考文献: [1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S],一部.北京:化学工 业出版社,2005:228. [2]蒋凌云,刘圣.断血流研究进展[J].基层中药杂志,1999,13 50. (3):48— [3]戴敏,刘青云.断血流总苷对药物流产模型大鼠子宫出血量 的影响[J].中药材,2002,25(5):342. [4]KuoYH,LeeSHM,LaiJsH.ChemicalstudyofC.gracile[J].Chin PharmJ.(TaiPei),2000,52(1):27—34. 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