舒肝顺气丸质量标准研究.doc

舒肝顺气丸质量标准研究.doc 舒肝顺气丸质量标准研究 【摘要】 目的 建立舒肝顺气丸的质量标准。方法采用薄层色 谱(TLC)、显微镜对处方中的药材进行了鉴别;用高效液相色谱 (HPLC)测定制剂中的厚朴酚与和厚朴酚的含量。结果可鉴别出白 芍、枳实、木香、延胡索、佛手、甘草、香附;厚朴酚与和厚朴酚 分别在0.109 6,0.822 0，0.117 6,0.882 0μg内色谱峰面积与含量呈 线性关系(r=0.999 7，0.999 6)，平均回收率为96.1%。结论所建 方法可行，专属性、重复性好，可用于舒肝顺气丸的质量控制。 【关键词】 舒肝顺气丸;质量标准;厚朴酚;和厚朴酚 Abstract:ObjectiveTo establish the quality stanbard for Shugan Shunqi Pill.MethodsThe herbs in Shugan Shunqi Pill were identified by TLC or microscope,and the contents of magnolol and honokiol were determined by HPLC.Results Radix Paeoniae Alba,Fructus Aurantii Immaturus,Radix Aucklandiae,Rhizoma Corydalis,Fructus Citri Sarcodactylis,Radix Et Rhizoma Glycyrrhizae,Rhizoma Cyperi could be determined. Magnolol and honokiol showed a good linear relationship within the range of 0.1096,0.822 0μg(r=0.999 7), 0.117 6,0.882 0 μg(r=0.9996). The average recovery was 96.1%.ConclusionThe method is available ,reproducible and can be used for quality control of this misturae. Key words:Shugan Shunqi Pill; Quality standard; Magnolol; Honokiol 舒肝顺气丸系由厚朴、香附、白芍、柴胡、枳实、木香、延胡 索、佛手、甘草组成，具有舒肝、理气、止痛的功效，主治两胁胀 满，胃脘刺痛，呕逆嘈杂，嗳气泛酸属肝郁气滞证。为控制产品质 量，本文建立了香附、白芍、枳实、木香、延胡索、佛手、甘草的 鉴别方法，及厚朴酚与和厚朴酚HPLC含量测定方法。 1 仪器与试药 1.1 仪器 AgiLent-1100高效液相色谱仪，VDW紫外检测器。ZF-?四 用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂);定量毛细管(Drummond Scientific Co.);分析天平(1/10万，Mettler Toledo AG135)。 1.2 对照品及对照药材 延胡索、芍药苷、厚朴酚、和厚朴酚对照品，枳实、木香、 佛手、甘草对照药材，由中国药品生物制品检定所提供。 1.3 试剂 溶剂为色谱纯与分析纯;薄层色谱用硅胶G，H(烟台汇友硅 胶开发有限公司)。 1.4 舒肝顺气丸由重庆希尔安药业有限公司提供。 2 方法与结果 2.1 定性鉴别 2.1.1 香附显微鉴别 取本品，置显微镜下观察:分泌细胞类圆形，内含黄棕色至红棕色分泌物，其周围5,8个细胞作放射状环列。见图1。 2.1.2 木香TLC鉴别,1, 取本品45 g，剪碎，加水10 ml分散成浆状，加硅藻土30 g拌匀、摊开，80?干燥15 min，用乙醚回流两次(100，80 ml)，30 min/次，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯2 ml使溶解，作为供试品溶液。另取木香对照药材1 g，加醋酸乙酯10 ml，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯2 ml使溶解，作为对照药材溶液。吸取上述两种溶液各3,5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环已烷,丙酮 (10?3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，80?加热至斑点清晰，日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图2。 2.1.3 枳实TLC鉴别(2) 取2.1.2项下供试品溶液。另取枳实对照药材1 g，加甲醇10 ml，回流30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为对照药材溶液。吸取供试品溶液5 μl，对照药材溶液2 μl，分别点于同一以0.3%CMC-Na溶液为黏合剂的硅胶H薄层板上，以氯仿,丙酮,甲醇,浓氨试液(13?4?3?0.5)为展开剂，预平衡15 min，展开，取出，晾干，喷以0.5%茚三酮乙醇溶液，80?加热至斑点显色清晰，日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图3。 2.1.4 佛手TLC鉴别,1, 取“2.1.2”项下供试品溶液。另取佛手对照药材1 g，加无水乙醇10 ml，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1 ml使溶解，作为对照药材溶液。吸取供试品溶液5 μl，对照药材溶液2 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯,醋酸乙酯(9?1)为展开剂，预平衡15 min，展开，取出，晾干，置紫外灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图4。 2.1.5 延胡索TLC鉴别 取本品45 g，剪碎，加水10 ml分散成浆状，加硅藻土30 g拌匀、摊开，100?干燥15 min，用浓氨水,乙醇(1?1)40 ml润湿，加乙醚回流两次(100，80 ml)，30 min/次，滤过，滤液用 20%盐酸溶液萃取两次(25，25 ml)，合并酸液，加浓氨试液调节pH值至10，用乙醚萃取两次(60，50 ml)，合并乙醚液，蒸干，残渣加乙醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液10 μl，对照品溶液2 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-氯仿-甲醇(7.5?4?1)为展开剂，浓氨蒸气预平衡15 min，展开，取出，晾干，用碘蒸气熏至斑点清晰，取出，在100?烘6,8 min，取出，日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色斑点。见图5。 2.1.6 白芍TLC鉴别 取“2.1.2”项下经乙醚提取后的药渣，用80%乙醇回流提取两次(80，80 ml)，30 min/次，滤过，滤液蒸干，残渣加水100 ml使溶解，再用水饱和的正丁醇萃取两次(60,50 ml)，合并正丁醇萃取液，蒸干，残渣加乙醇2 ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加乙醇制成每毫升含2 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液5 μl，对照品溶液2 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿, 醋酸乙酯,甲醇,甲酸(20?2.5?5?0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，80?加热至斑点清晰，日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点。见图6。2.1.7 甘草TLC鉴别 取“2.1.6”项下供试品溶液。另取甘草对照药材1 g，加甲醇20 ml，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 ml使溶解，再用水饱和的正丁醇萃取两次(20，20 ml)，合并正丁醇萃取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。吸取上述两种溶液各3 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿,醋酸乙酯,甲醇,水(15?40?20?10) 10?以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在70?加热至斑点清晰，日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图7。 2.2 含量测定,6, 2.2.1 色谱条件 色谱柱为迪马DiamonsilTMC18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5μm);流动相为甲醇-水(85:25);检测波长为294 nm;柱温30?;流速为1 ml?min-1;理论塔板数按厚朴酚峰计算应不低于8 000，厚朴酚与和厚朴酚的分离度约为12，缺厚朴阴性样品对检测无干扰。见图8。 2.2.2 对照品溶液制备 精密称取厚朴酚、和厚朴酚对照品适量，用甲醇制成每毫升 含厚朴酚54.8 μg，和厚朴酚58.8 μg的溶液，即得。 2.2.3 供试品溶液制备 取本品12 g，精确称定，剪碎，加水5 ml分散成浆状，加硅藻土5 g拌匀、摊开，硅胶干燥过夜，用乙醚回流3次(50，40，40 ml)，30 min/次，滤过，合并滤液，50?低温蒸干，残渣用乙醇溶解并转移至50 ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。 2.2.4 线性关系考察 精密吸取混合对照品溶液2，4，6，8，15μl，按上述色谱条件分别进样测定，以峰面积积分值为纵坐标，对照品量(μg)为横坐标，绘制标准曲线，厚朴酚回归方程为Y=1 689.3×C，r=0.999 7，线性范围为0.109 6,0.8220 μg;和厚朴酚回归方程为Y=1 730.0×C，r=0.999 6，线性范围为0.117 6,0.882 0 μg。 2.2.5 精密度实验 精密吸取混合对照品溶液重复进样6次，厚朴酚与和厚朴酚的峰面积积分值的RSD均为0.8%，结果表明精密度良好。 2.2.6 稳定性考察 取同一新制备的对照品溶液与供试品溶液，分别于0，2，4，6和8 h在上述色谱条件下进样检测，记录厚朴酚、和厚朴酚的峰面积积分值，结果表明对照品溶液与供试品溶液在8 h内保持稳定;对照品:厚朴酚RSD=1.2%，和厚朴酚RSD=1.3%;供试品:厚朴酚RSD=1.8%，和厚朴酚RSD=3.3%。 2.2.7 重复性实验 于同一批样品(050901)，精密称取，依法制备5份供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液10 ml与供试品溶液20 ml，注入液相色谱仪，测定，记录厚朴酚、和厚朴酚的峰面积积分值，测得厚朴与和厚朴酚含量之和的平均值为0.035%，RSD为0.85%。 2.2.8 回收率实验 从己知厚朴酚、和厚朴酚含量(0.035%)的样品(050901)，取6份供试品，精密称定，分别精确加入厚朴酚、和厚朴酚对照品，依法制备6份供试品溶液，依法测定，平均回收率为96.1%。结果见表1。表1 回收率实验(略) 2.2.9 样品含量测定 取样品5批，按上述色谱条件及方法，分别精密吸取对照品溶液10 μl与供试品溶液20 μl，测定厚朴酚、和厚朴酚含量。结果见表2。表2 样品含量测定结果(略) 3 讨论 本品含糖较高，在有机溶剂中无法分散，直接提取难以渗透、效 率低，采用硅藻土分散后可显著改善提取效果,4,。 木香薄层显色温度应控制在80?，至斑点清晰即可，加热时间过长至阴性样品色谱相应背景显色而影响鉴别。采用鉴别甘草酸的方法鉴别甘草，干扰严重，不及本法简便、灵敏。选用柴胡皂苷a，b及柴胡对照药材作柴胡薄层鉴别暂无法排除干扰。 本品中厚朴、白芍、柴胡为主药，其中厚朴所含厚朴酚、和厚朴酚含量相对较高，便于分离、检测，故本质量标准选择厚朴酚、和厚朴酚作为含量测定指标。 【