高效液相梯度洗脱法同时测定复方诺氟沙星滴耳液中3组分的含量

高效液相梯度洗脱法同时测定复方诺氟沙星滴耳液中3组分的含量 高效液相梯度洗脱法同时测定复方诺氟沙 星滴耳液中3组分的含量 ? l618?HeraldofMedicineVo1.28No.12December2009 高效液相梯度洗脱法同时测定 复方诺氟沙星滴耳液中3组分的含量 朱雪松,黄雪靖,廖婧,郑芳 (1.郧阳医学院附属东风总医院药剂部,湖北十堰442008;2.湖北中医学院药学院,武汉 430060;3.华中科技 大学同济医学院附属协和医院药剂科,武汉430022) [摘要]目的建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定复方诺氟沙星滴耳液中诺氟沙星,甲硝唑 和丙酸倍氯米 松的含量.方法KromasilC.柱(4.6mm×250mm,5txm),流动相为甲醇一乙腈-0.025mol?L.磷酸 溶液(用三乙胺调 至pH至3.O)一注射用水,梯度洗脱.结果诺氟沙星,甲硝唑和丙酸倍氯米松的线性范围分别 为15.0,150.0beg?mL (r=0.9994),l5.1,151.0txg?mL(r:0.9993)和2.6—26.0Ixg?mL.(r=0.9994);平均回收率分别为 99.5%, 99.7%和99.5%;RSD分别为0.80%,0.78%和0.92%(=9).结论该方法操作简便,快速,准确度较 高,适合复方诺 氟沙星滴耳液含量测定. [关键词]诺氟沙星滴耳液,复方;色谱法,高效液相;诺氟沙星;甲硝唑;丙酸倍氯米松 [中图分类号]R978;R927.2[文献标识码]A[文章编号]1004-0781(2009)12—1618-03 SimultaneousContentsDeterminationofThreeConstituentsinCompoundNorfloxacin Ear.DropsbyHPLCfGradientE|ution) ZHUXue?song,HUANGXue—jing,LIAOJing,ZHENGFang(1.DepartmentofPharmacy,theGeneral HospitalofDongfengMotorCorporation,Shiyan442008,China;2.SchoolofPharmacy,HabeiTraditio nal ChineseMedicalUniversity,Wuhan430060,China;3.DepartmentofPharmacy,UnionHospitalAffilia tedwith theTongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandTechnology,Wuhan430022,China) ABSTRACTObjectiveToestablishaHPLCanalysismethodforcontentsdeterminationofnorfloxacin, metronidazole andbeclomethasonepropionateincompoundnorfloxacinear—drops.MethodsThekromasilC18column(4.6mm×250mm, 5m)wasused,themethanol—acetonitrile-0.025mol?Lphosphoricacidsolution(adjustedtopH3.0withtriethylamine)一 waterforinjectionwasappliedasmobilephase,andthesamplewaselutedingradient.ResultsThelinearr angesof norfloxacin,metronidazoleandbeclomethasonepropionatewereat15.0,150.0tzg?mL(r=0.9994),15.I, 151.0txg’mL(r=0.9993)and2.6,26.0Ixg?mL(r=0.9994),respectively,andtheaveragerecoveryrate(n:9) were99,5%,99.7%and99.5%withRSDas0.80%,0.78%and0.92%,respectively.ConclusionThemeth odis simple,rapidandsensitivity,whichissuitableforthecontentdeterminationofcompoundnorfloxacinear —drops. KEYWORDSNomoxacinear—drops,compound;HPLC;Norfloxacin:Metronidazole;Beclomethas onepropionate 复方诺氟沙星滴耳液是郧阳医学院附属东风总医 院研制的用于治疗急慢性化脓性中耳炎的药物,主要 成分为诺氟沙星,甲硝唑和丙酸倍氯米松.该制剂处 方规格为:每8mL样品中含诺氟沙星,甲硝唑均为 24mg和丙酸倍氯米松4mg.关于诺氟沙星,甲硝唑 和丙酸倍氯米松单方或双方药物的含量测定已有文献 报道?,但笔者尚未见同时测定该制剂3组分含量 的方法报道.为了控制药品质量,确保临床用药安全 有效,笔者采用高效液相多步梯度洗脱法,同时测定该 制剂中诺氟沙星,甲硝唑和丙酸倍氯米松3种组分的 含量,现报道如下. 【收稿日期]2008—1028 [作者简介]朱雪松(1974一),男,湖北t堰人,副主任 药师,硕士,主要从事药物新制剂研究和临床药学工作.电话: 0719—8272347,E—mail:dfpharmacy@163.con. 1仪器与试药 1.1仪器Uhimate3000高效液相色谱仪 (Uhimate3000泵,Uhimate3000二极管阵列检测器,四 元低压混合系统,chromeleon工作站),HS.2060.超声 仪,岛津AEU-210电子天平. 1.2试药诺氟沙星对照品(中国药品生物制品检 定所,批号:130450-200304,含量:97.8%),甲硝唑对 照品(中国药品生物制品检定所,批号:100191.200305 供含量测定用),丙酸倍氯米松对照品(中国药品生物 制品检定所,批号:100119—200603,供含量测定用);复 方诺氟沙星滴耳液(东风总医院自制,批号:080726, 080825,080924);甲醇,乙腈,三乙胺均为色谱纯,其他 试剂为纯;水为注射用水. 2方法与结果 2.1色谱条件与系统适用性实验色谱柱:Kromasil 医药导报2009年12月第28卷第12期卷终?l619? C柱(4.6mmx250mm,5m);流动相A相为甲醇, B相为乙腈,C相为0.025tool?L磷酸溶液(用三乙 胺调节pH至3.0),D相为注射用水,梯度洗脱(梯度 洗脱程序见1);检测波长:241nm;流速: 0.7mL?min,;柱温:室温;进样量:20.在该色谱 条件下,在诺氟沙星,甲硝唑和丙酸倍氯米松的保留时 间处,杂质没有吸收,表明样品中的辅料与溶剂峰不干 扰主药峰,它们之间的分离度均>1.5.见图l. 表1流动相梯度洗脱程序 .— JL O5lO1520250 ,/mm 阴性样品 51Ol520250 ,/mm 对照品 5l0152O25 ,/mm 供试样品 图13种溶液的高效液相色谱图 1.甲硝唑;2.诺氟沙星;3.丙酸倍氯米松 2.2混合对照品溶液的制备分别精密称取诺氟沙 星对照品61.4mg和甲硝唑对照品60.2mg,置同一个 10mL量瓶中,加0.1mol?L盐酸溶液5mL,超声溶 解,加水稀释至刻度,作为对照品贮备液I;另精密称 取丙酸倍氯米松对照品10.2mg置10mL量瓶中,加 甲醇溶解并稀释至刻度,作为对照品贮备液?.分别 精密量取对照品贮备液I,对照品贮备液?5mL,置 同一个100mL量瓶中加稀释溶剂至刻度,摇匀,作为 混合对照品溶液(其中诺氟沙星,甲硝唑和丙酸倍氯 米松浓度分别为0.300,0.301和0.051mg?mL). 2.3线性关系考察精密量取”2.2”项下的混合对 照品溶液0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0mL,分别置于 10mL量瓶中,加稀释溶剂稀释至刻度,摇匀,即得对 照品系列溶液.分别取上述溶液20,依次注入液 相色谱仪,记录色谱图,以峰面积(A)对浓度(C, g?mL)进行线性回归,得三者回归方程分别为:诺 氟沙星:A=0.6591C+7.286,r=0.9994;甲硝唑: A=0.5543C+7.286,r=0.9993;丙酸倍氯米松:A= 0.4363C+0.9464,r=0.9994;结果表明:诺氟沙星 在15.0,150.0g?m,甲硝唑在15.1, 151.0g?mL,,丙酸倍氯米松在2.6,26.0g?mL 范围内呈良好的线性关系. 2.4精密度实验精密量取”2.3”项下的诺氟沙星 浓度为60g?mL的对照品溶液,连续进样6次,测 定峰面积,诺氟沙星,甲硝唑和丙酸倍氯米松峰面积的 RSD分别为0.62%,0.57%,0.71%(n=6). 2.5稳定性实验取供试品溶液,于0,2,4,6,8, 10h各进样20,分别测定诺氟沙星,甲硝唑诺和丙 酸倍氯米松的峰面积,RSD分别为0.69%,0.83%和 0.72%(=6). 2.6重复性实验取样品(批号:080924)6份,按含 量测定项下方法测定含量.结果:诺氟沙星,甲硝唑和 丙酸倍氯米松标示含量的RSD分别为0.82%, 0.74%,0.88%(n=6). 2.7样品含量测定精密量取样品1mL置50mL量 瓶中,加稀释溶剂稀释至刻度,摇匀,经孔径0.45m 滤膜滤过,取20依次注入液相色谱仪,记录甲硝 唑,诺氟沙星,丙酸倍氯米松的色谱峰面积,按外标法 计算含量,结果见表2. 表2样品测定结果% 2.8回收率实验分别精密量取已知含量的样品 (批号:080924)1.0mL9份,分别置9个50mL量瓶 中;分别精密量取混合对照品溶液4,5,6mL各3份, 分别置上述量瓶中,充分混匀,加稀释溶剂稀释至刻 度,摇匀,按”2.7”项方法测定.分别取上述溶液 20,依次注人液相色谱仪,记录色谱图,计算回收 率,结果见表3. 2.9干扰性实验按处方配制除诺氟沙星,甲硝唑和 丙酸倍氯米松以外的空白样品,照样品的含量测定项 下的方法测定,结果显示辅料对样品的测定无影响. 3讨论 3.1流动相的选择在诺氟沙星和甲硝唑流动相成 分的选择上,笔者参考文献[4]的流动相: 0.025tool?L..磷酸溶液(用三乙胺调节pH至3.0). 甲醇一乙腈(2:l:2),结果二者出峰太早(5rain内), 不能与杂质峰分开,这与文献报道不一致.在参考文 献[1]后,以表1中不同比例的流动相B,C实验,结果 当B:C=16:84时,R,R诺分别约为7,10rain,二 极管阵列图谱显示两峰的纯度都较高,由此可见,此配 比的流动相适合甲硝唑和诺氟沙星;但在此条件下,丙 ? 1620?HeraldofMedicineVo1.28No.12Deeember2009 酸倍氯米松40min内未出峰.当采用A:C=75:25 时,虽R丙适中,但R甲,R诺(<3min)太短,与试剂峰重 合,峰的纯度均不高.考虑到丙酸倍氯米松的极性太 小,与色谱柱的亲和力远大于前二者,用同样的流动相 很难将三者在同时满足系统试用性实验条件下达到分 离,故考虑使用梯度洗脱.经过多次实验,最终选择如 表1中的条件,结果三主峰不仅峰形好,各峰之间分离 效果也令人满意. 表3诺氟沙星,甲硝唑,丙酸倍氯米松回收率测定结果 3.2溶剂的选择本制剂中甲硝唑和诺氟沙星均能 溶于酸性溶液而难直接溶于水,故本实验在制备混合 对照品溶液时,甲硝唑和诺氟沙星同时采用 0.1mol?L.盐酸溶液先溶解;丙酸倍氯米松因不溶于 水,先用甲醇溶解;因诺氟沙星在pH>6时,易从溶液 中析出,而丙酸倍氯米松虽易溶于甲醇,但稀释时水相 稍多,就易析出,因此,三者继续稀释所采用的溶剂至 关重要.为了防止在样品稀释和在色谱柱中出现沉 淀,综合考虑以上因素,并且尽量保持与流动相的相似 性,笔者尝试了流动相组分中A和C的各种比例的配 伍,最后选取A:c=1:1作为本实验的稀释溶剂, 结果表明,在整个实验过程中,没有出现沉淀的现象. 3.3检测波长的选择采用二极管阵列检测器,在 200,350nlTl波长范围内对”重复性实验”项下的样品 溶液进行光谱扫描,结果诺氟沙星,甲硝唑和丙酸倍氯 米松最大吸收波长分别为280,320,241nm,且在各自 的最大吸收波长处,三者的峰面积比值约为20:10: 1;而在241nm波长处,其比值约为5:4:1,为了减 少实验误差,故将该实验三者的检测波长定为241nm. 实验结果表明,该方法灵敏,准确,重复性较好,可 用于复方诺氟沙星滴耳液质量控制. [DOI]10.3870/yydb.2009.12.036 [参考文献】 [1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[Z].北 京:化学工业出版社,2005:79—80,123—124,641. [2]王海红,骆瑛.高效液相色谱法测定复方甲硝唑及诺氟 沙星的含量[J].中国医院药学杂志,2008,28(1):79— 8O. [3]杜国安,孙仲葆,王槐武,等.高效液相色谱法测定诺甲 滴耳液的含量[J].医药导报,2005,24(5):444—445. [4]朱雪松,郑芳,李志浩.高效液相色谱法同时测定滴耳 液中氧氟沙星与丙酸倍氯米松含量[J].中国医院药学杂 志.2007,27(7):993—995.