高效液相色谱法测定六味地黄胶囊中丹皮酚含量[指南]

高效液相色谱法测定六味地黄胶囊中丹皮酚含量[] 高效液相色谱法测定六味地黄胶囊中丹皮酚含量 高效液相色谱法测定六味地黄胶囊中丹皮酚含量 更新日期:2010-12-22 点击: 张忠春 管玉民 王 健 王官连 提要 采用HPLC法测定六味地黄胶囊中丹皮酚的含量，流动相 为70%甲醇，波长274 nm，平均回收率99.48%。方法简便，准 确，重现性好。 关键词 六味地黄胶囊; 丹皮酚; 高效液相色谱法 Determination of Paeonol in Liuweidihuang Capsule by HPLC Zhang Zhongchun, Guan Yumin, Wang Jian, et al Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250012 Abstract HPLC method has been used for the determination of paeonol in Liuweidihuang capsule with 70% methanol as mobile phase and detecting wavelength of 274 nm. The average recovery is 99.48%. The method is simple and accurate. Key words Liuweidihuang capsule; Paeonol; HPLC 六味地黄胶囊是传统名中药六味地黄丸的改革剂型品种，有滋阴 补肾之功效，由熟地黄、牡丹皮、山茱萸、泽泻、茯苓、山药组成， 收载于部颁第8册。标准中是水蒸气蒸馏—紫外分光光度法测定 样品中丹皮酚的含量。我们在实验中发现该方法操作繁琐费时，且结 果不准确，而改用HPLC法测定，方法简便，快速，准确，重现性好。 1 仪器与试药 SP-8800高效液相色谱仪，Spectra 200型UV检测器，Chromfet积分仪，标准10 μl进样环。 丹皮酚对照品(购于中国药品生物制品检定所，HPLC归一化法测定纯度99.628%)，水为双重蒸馏水，甲醇为色谱纯。样品由济南中药厂及济南利蒙中药厂提供。 2 方法与结果 2.1 色谱条件:色谱柱KroC184.6×250 mm 10 μm;流动相70%甲醇;检测波长274 nm;流速0.7 ml/min;进样量10 μl。在此条件下丹皮酚的保留时间为6.65 min，与样品中其他成分达到较好分离。见图1。 图1 样品、对照品及空白色谱图 2.2 标准曲线的制备:精密称取丹皮酚适量(约10 mg)，用甲醇溶解并定容至50 ml作为对照品贮备液，再分别吸取上述贮备液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml置10 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，然后分别准确吸取各10 μl注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以丹皮酚的峰面积对浓度进行直线回归计算，得回归方程为: A=1.42×105C,2.24×10×4， γ=0.9998。由此可见丹皮酚浓度在4,20 μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系。 2.3 样品测定:精密称取样品0.3 g加甲醇适量，超声处理30 min，加甲醇稀释至100 ml，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，分别吸取供试品和对照品溶液各10 μl注入高效液相色谱仪，测定计算，测得济南中药厂3批样品含量分别为:(970812)0.40%，(970818)0.42%，(970819)0.39%;济南利蒙中药厂3批样品含量分别为:(971126)0.37%，(971128)0.38%，(971130)0.36%。 n=3， RSD=0.82%。 2.4 回收率试验:精密称取样品(970812)0.15 g加含丹皮酚对照品60 μg/ml甲醇溶液10 ml和甲醇适量，照样品测定方法进行测定，计算回收率，见表1。 表1 回收率试验结果 样品号 称取样品量 (g) 样品中含丹 皮酚的量 (mg) 加入丹皮酚 对照品的量 (mg) 测得量 (mg) 回收率 (%) 1 0.1512 0.6048 0.60 1.2040 99.87 2 0.1498 0.5992 0.60 1.1890 98.30 3 0.1532 0.6128 0.60 1.2089 99.35 4 0.1487 0.5948 0.60 1.2001 100.88 5 0.1544 0.6176 0.60 1.2101 98.75 6 0.1552 0.6208 0.60 1.2192 99.73 平均回收率99.48%， RSD=0.912%。 2.5 精密度试验:对同一浓度的丹皮酚对照品溶液，连续进样6次，结果峰面积 RSD=0.66%，仪器精密度良好。 2.6 重现性试验:按样品测定方法对同一样品进行5次平行试验，结果 RSD=1.32%，说明本方法重现性良好。 3 讨论 3.1 照原标准测得济南中药厂3批样品含量分别为:0.45%，0.46%，0.45%;济南利蒙中药厂3批样品含量分别为:0.39%，0.40%，0.41%，略高于本文方法测定结果。而用水蒸气蒸馏液作为供试品溶液，用高效液相色谱法测定，结果又明显低于本文方法测定结果，说明原标准测得值不是单一丹皮酚的含量，有杂质干扰;收集水蒸气蒸馏液450 ml，丹皮酚提取不完全。 3.2 原标准含量限度规定为0.07%，而我们用两种方法测定结果均高出限度的5倍以上，《中国药典》中六味地黄丸限度为0.07%，但是六味地黄丸每g含牡丹皮0.054 g，六味地黄胶囊每g含牡丹皮0.22 g，是六味地黄丸的4倍，说明此标准制定的限度有误，建议限度为0.28%，与《中国药典》比例一致。