【精品文献】巨细胞病毒特异性IgG抗体检测方法的建立及应用

【精品文献】巨细胞病毒特异性IgG抗体检测的建立及应用 论文范文 目:巨细胞病毒特异性IgG抗体检测方法 的建立及应用 编辑:司马小 作者:张萌 安利莎 侯林浦 牛向兰 谷学英 何欢 马旭 【摘要】 目的 为了建立一种快速、简便、实用的可用于育龄妇女血清中巨细胞病毒抗体的筛查方法～并初步探索其应用价值。 方法 建立重组CMV(pp150+52)抗原;以国家人口和生育委员会科学技术研究所(简称本所)建立的重组CMV(pp150+52)抗原作为包被抗原～700 IU/L作为临界值～用间接ELISA方法～对深圳宝安区1 024例血清标本进行抗体的检测。 结果 该方法灵敏度为13 IU/L～批内变异系数4.7 %，7.0 %～批间变异系数7.6 %，14.4 %～并与SORIN公司生产的试剂盒进行了比较～2种方法呈最度相关～Kappa值为0.82;深圳宝安区1 024例血清标本抗体阳性率为93.3 %(955 /1 024)～阴性率为6.7 %( 69/1 024)。 结论 本所建立的ELISA方法快速、简便和实用～可用于育龄妇女抗体的筛查。 【关键词】 巨细胞病毒;IgG抗体;ELISA;筛查;育龄妇女 【Abstract】 Objective To establish a rapid, serum and convenient method for the screening of cytomegalovirus (CMV) specific IgG antibody in sera samples of women of childbearing age, and to evaluate the preliminary significance of application.MethodsThe measurement of coating antigen women of childbearing age in Shenzhen, by using the method established by our study and the ELISA assay kid provided by Diasorin Co. The positive rate, negative rate, sensitivity of our method was 93.3 %, 6.7 %, and 13 IU/L, respectively. The intraassay coefficient of variation was between 4.7 %-7.0 % and the interassay coefficient of variation was between 7.6%-14.4 %. The Kappa value between our method and ELISA assay kid provided by Diasorin Co. was 0.82, indicating a good relativity.ConclusionOur ELISA assay is a rapid, easy and convenient method and could be used for screening the CMV-IgG specific antibodies among premarital women. 【Key words】 Cytomegalovirus; IgG antibody; ELISA; Screening; Women of childbearing age 孕妇巨细胞病毒(cytomegaloviurs, CMV)原发感染有32 %可感染 胎儿～继发或再感染只有1.4 %感染胎儿。有严重临床症状的先天性 CMV感染儿多为孕妇原发感染造成[2,3]。Fowler等的研究表明～母亲 感染过CMV后再妊娠～先天性CMV感染的危险性可降低69 %。因此～ 对准备妊娠的育龄妇女进行抗体的筛查～通过这种安全无 害、且简便便宜的检测～了解育龄妇女的免疫状况～可使约90 %以上 的阳性者不必担心孕后会发生原发CMV感染～也可使小于 10 %的阴性者孕后作为重点监测对象。对于妊娠的育龄妇女 进行筛查是预防先天性CMV感染一级预防措施～这对防止和 减少有严重出生缺陷的先天性CMV感染儿的降生有重要意义。 尽管检测抗体的ELISA方法在实验室中早已建立～1995年WHO也建立了IgG的国际标准～但至今～中国国内外尚无统一的临界值～中国也未有国家批准的可供筛查用的试剂盒。为此～本研究建立了用重组的ELISA检测方法～并提出了以700 IU/L作为国内育龄妇女抗体筛查的临界值的建议。 材料与方法 一、材料 1.标本来源: 1 024例血清标本～2008年1月至5月～来源于深圳市宝安区和深圳市计划生育专科门诊的20，40岁的育龄妇女。 2.抗原来源:8种CMV抗原分别来源于下列机构及个人。(1)国家人口和计划生育委员会科学技术研究所(简称本所)制备的CMV重组抗原。(2)本所制备的CMV全病毒纯化抗原。(3)购自Fitzgerald公司的全病毒纯化抗原。(4)购自深圳菲鹏公司的重组抗原。(5)购自深圳菲鹏公司的重组抗原。(6)购自深圳菲鹏公司的重组抗原。(7)购自Devatal公司的重组抗原。(8)李欣老师赠送的重组抗原。 3.主要试剂和仪器:辣根过氧化物酶标记的兔抗人IgG(丹麦DAKO公司)～TMB底物;Thermo Labsystems酶标仪(MultiskanAscent, Thermo Fisher Scientific公司)。 4.实验条件的选择:经预实验对固相载体(国产与进口Costar板)、抗原浓度、封闭条件(脱脂奶粉～小牛血清～BSA～PEG)、标本稀释液、稳定性试验等的试验～确定了应用吸附力强而均匀的进口Coning Costar板作为固相载体～本批抗原为1?2000～用3 %脱脂奶粉封闭～采用本所特制的有血清指示剂的变色标本稀释液对标本进行稀释。该稀释液加入血清前为黄色～加入血清后变为蓝色～可避免孔内漏加标本。本稀释液与国外(意大利Sorin和德国试剂)试剂盒提供的标本稀释液比较无差异。 二、本所重组pp150+52)的制备 由上海英俊生物技术有限公司合成的3种嵌合 pp150?氨基酸氨基酸～gp52?氨基酸氨基酸～ ～gp52?氨基酸并构建于克隆载体中～将此构建好的3个克隆载体和质粒载体转化入 感受态细胞中～然后重新抽提质粒～分别用限制性内切酶XhoI和NdeI进行双酶切～得到线性化的质粒载体和3个嵌合DNA片段。再将DNA片段接入质粒载体并转化入感受态细胞～再将克隆于37 ?培养8 h后～经由聚合酶链反应～polymerase chain reaction～PCR)和测序(由北京三博公司完成)的菌按1?50接入LB培养基中培养～再经1 mmol/L的IPTG诱导8 h～经聚丙烯酰胺凝胶电泳 考染和蛋白质印迹(western blot)的方法确定蛋白的表达。将富集诱导表达的重组抗原菌体超声破碎、离心得上清后～通过PVDF膜分别收集主峰～再经Amicon 超滤脱盐浓缩后～贮存于pH 7.4的磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline～PBS)中。 三、检验程序 1.8种敏感性比较与选择:各种抗原按常规方法包被于固载体～经封闭洗涤后应用。用1份混合血清经浓缩后作为检测样品～从1?100开始倍比稀释至1?6 400。取100 μl标本稀释液加入包被孔内～再加1 μl待测血清混匀～37 ?孵育1 h;洗液清洗5次～再加入100 μl酶结合物37 ?孵育1 h;再次清洗5次～加入显色剂 ～室温显色30 min;加入终止液200 μl～于酶标仪上(450 nm /620 nm)测样品OD值。选择CMV重组抗原pp52+pp150作为包被抗原。最佳变异系数(coefficient of variation, CV)分别为3.3 %，5.4 %。 的最低检出量:以400 IU/L和0 IU/L两份标本～分别重复检测12次和16次～分别取其平均值减去和加上2个标准差为最低稀释度标准。 3.精密度:任意选择不同抗体含量的3份标本(10 800 IU/L、3 600 IU/L、1 200 IU/L)～每份标本重复12次试验～计算其变异系数。 4.稳定性试验:将同一批试剂分别放37 ?存放3、5、7 d后～取出与存放4 ?的试剂比较其检测所得的OD。 5.对比试验:以Sorin公司生产的方法为参比方法～与本法进行比较～计算2种方法的相关性Kappa值。 K=N(a+b)-(r1〃c1+r2〃c2)N2-(r1c1+r2c2) a为真阳性～b为假阳性～c为假阴性～d为真阴性～a+c=c1～b+d=c2～N=a+b+c+d～a+b=r1～c+d=r2 抗体临界值的确定:用意大利Sorin公司生产的 抗体检测试剂盒～筛出38份抗体阴性血清～再用本所研制的抗体检测试剂盒进行定量检测。以的2.1倍、+2SD、+4SD、+0.3作为临界值～从标准曲线求得的IU/L值。 结 果 一、本所重组52)的制备 本所重组经由PCR和测序～再经考染和WESTERN确定蛋白的表达～证明工程菌重组构建成功。 二、重组的质量检测 1.8种敏感性比较与选择:第4和第5种～即CMV重组抗原pp150+pp52和pp150的敏感性较好。同时对8种抗原作了精密性分析～结果显示～第4和第5种抗原的CV %值分别为3.3 %和5.4 %～优于其他6种抗原(CV %值为6.1 %，11.3 %),见表1。表1 8种抗原检测不同稀释度血清学OD值 2.最低检出量:最低检出量为13，290 IU/L。 3.精密度:批内变异系数为4.7 %，7.0 %～批间变异系数则为7.6 %，14.4 %～符合ELISA试验<15 %的要求。 4.稳定性试验:将同一批试剂分别放37 ?存放3、5、7 d后～取出与存放4 ?的试剂用24份标本进行检测～比较所测OD值变化均在10 %以内。 5.对比试验:本研究建立的方法与意大利Sorin公司生产的 检测试剂盒比较～其敏感性为92.3 %～特异性为82.2 %～诊断效率为97 %～ Kappa值为0.82～2种方法呈高度相关。 抗体临界值的确定:38份抗体阴性血清平均OD值为0.199～SD为0.076。若用的2.1倍作为临界值～从标准曲线求得抗体含量为440 IU/L;若以+2SD作为临界值～则为340 IU/L;若以+4SD则临界值为700 IU/L;若以+0.3为临界值～从标准曲线求得的结果为700 IU/L。根据本所建立抗体检测的目的是对育龄妇女进行筛查～要求一个不漏的筛查出阴性者～认为用700 IU/L作为临界值比用400 IU/L作临界值效果更好。 表2 本研究建立的方法与参比方法检测结果比较 本研究方法Sorin方法(参比方法)阳性 阴性阳性444(a)7(b)阴性8(c)37(d) 三、临床应用 深圳育龄妇女血清中抗体检测～不同的值标准～其和(+)的比例～见表3。表3 1 024例育龄妇女血清中抗体检测结果 讨 论 在用ELISA方法检测相应抗体时应用的相应的包被抗原是决定方法的敏感性和特异性最重要的因素。Weber等,通过不同的CMV重组抗原与全病毒纯化抗原对抗体检测的比较发现～其敏感性和特异性没有差别。但是～国内外也有[7，9]认为～重组抗原要比全病毒纯化抗原效果好。因为～天然的全病毒纯化抗原存在难于标准化 和培养中潜在细胞蛋白污染和与其他病毒交叉污染等问题～而且多个重组抗原组合比单一的重组抗原效果好。本所的试验结果也显示～用CMV重组抗原效果比全病毒纯化抗原要好。因此～本所选择了CMV重组抗原pp150+pp52作为包被抗原。 关于检测CMV抗体时所用的临界值～目前国内外尚无统一标准～尽管1995年WHO已发布了的国际标准～但至今尚未提供有关标准品～各国实验室仍是用自己的标准。如～意大利Sorin公司的产品用400 IU/L作为临界值;而罗氏公司则定为700 IU/L～把500，700 IU/L作为可疑;而Biotest公司则将临界值定为阴性平均OD值加0.3作为临界值;而国内实验室则多用阴性平均OD值加2SD或均值的2.1倍。国外尚有将阴性平均OD值加4个SD作为临界值的～本所认为～选择700 IU/L作为中国育龄妇女筛查时的临界值较好。因为～这种筛查是尽量不要漏掉阴性者而不是筛查阳性者～所以用700 IU/L比用400 IU/L更好。 本所建立的方法应用意大利Sorin公司(FDA认证)的标准品标定本所的标准品。通过对检测方法各个环节的优化选择～特别是采用了独特的变色稀释液和用滤纸片保存标准品～使其保存更加稳定。本研究检测的结果与用Sorin试剂对长春地区的1 879例育龄妇女检测结果比较～若以400 IU/L作临界值～则阴性检出率为2.9 %～本法为3.8 %;若以700 IU/L作临界值～阴性检出率为4.9 %～本法为6.7 %。本法阴性率略高。该方法经与FDA认证的DiaSorin公司 方法比较呈高度相关～方法的精密性、灵敏度、稳定性均符合ELISA方法的要求。目前～由于进口试剂价格较昂贵～限制了在人群中推广应用～本研究建立的方法价格低廉～操作简便适宜大人群的育龄妇女中进行抗体的筛查之用。 【参考文献】 epidemiology of congenital cytomegalovirus (CMV) infection[J]. Rev Med Virol～ secondary cytomegalovirus infection in pregnancy[J]. Reproductive Toxicology～ 3Adler SP, Nigro G, Pereira L. Recent advances in the prevention and treatment of congenital cytomegalovirus infections[J]. Semin Perinatol～ 4Fowler KB, Stagno S, Pass RF. Maternal immunity and prevention of congenital cytomegalovirus infection[J]. JAMA～ 2003, 289(8 5Booth JC, Hannington G, Aziz TA, et al. Comparison of IgG antibody[J]. J Clin Pathol～ 6Weber B, Berger A, Rabenau H. Human cytomegalovirus infection: diagnostic potential of recombinant antigens for cytomegalovirus antibody detection[J]. J Virol Methods～ 2001～ markers of HCMV infection[J]. J Clin Virol～ 8孙立人. 人巨细胞病毒感染的实验室诊断研究进展[J]. 检验医 学～ 9Landini MP, Lazzarotto T, Maine GT, et al. Recombinant immunoglobulin M in human sera by enzyme immunoassay[J]. J Clin Microbiol～ 1995～ 【摘要】 目的 为了建立一种快速、简便、实用的可用于育龄妇女血 清中巨细胞病毒抗体的筛查方法～并初步探索其应用价 值。 方法 建立重组CMV(pp150+52)抗原;以国家人口和计划生育委员 会科学技术研究所(简称本所)建立的重组CMV(pp150+52)抗原作为包被 抗原～700 IU/L作为临界值～用间接ELISA方法～对深圳宝安区1 024例血清标本进行抗体的检测。 结果 该方法灵敏度为13 IU/L～批内变异系数4.7 %，7.0 %～批间变异系数7.6 %，14.4 %～ 并与SORIN公司生产的试剂盒进行了比较～2种方法呈最度相关～ Kappa值为0.82;深圳宝安区1 024例血清标本抗体阳性率 为93.3 %(955 /1 024)～阴性率为6.7 %( 69/1 024)。 结论 本所建 立的ELISA方法快速、简便和实用～可用于育龄妇女抗体的 筛查。 【关键词】 巨细胞病毒;IgG抗体;ELISA;筛查;育龄妇女 Establishment and application of novel method for detecting specific cytomegalovirus IgG antibody ZHANG Meng, AN Lisha, HOU Linpu, et al. NingXia Medical University, Yinchuan 750004, China 【Abstract】 Objective To establish a rapid, serum and convenient method for the screening of cytomegalovirus (CMV) specific IgG antibody in sera samples of women of childbearing age, and to evaluate the preliminary significance of application.MethodsThe measurement of immunosorbent women of childbearing age in Shenzhen, by using the method established by our study and the ELISA assay kid provided by Diasorin Co. The positive rate, negative rate, sensitivity of our method was 93.3 %, 6.7 %, and 13 IU/L, respectively. The intraassay coefficient of variation was between 4.7 %-7.0 % and the interassay coefficient of variation was between 7.6%-14.4 %. The Kappa value between our method and ELISA assay kid provided by Diasorin Co. was 0.82, indicating a good relativity.ConclusionOur ELISA assay is a rapid, easy and convenient method and could be used for screening the CMV-IgG specific antibodies among premarital women. 【Key words】 Cytomegalovirus; IgG antibody; ELISA; Screening; Women of childbearing age 孕妇巨细胞病毒(cytomegaloviurs, CMV)原发感染有32 %可感染胎儿～继发或再感染只有1.4 %感染胎儿。有严重临床症状的先天性CMV感染儿多为孕妇原发感染造成[2,3]。Fowler等的研究表明～母亲感染过CMV后再妊娠～先天性CMV感染的危险性可降低69 %。因此～对准备妊娠的育龄妇女进行抗体的筛查～通过这种安全无害、且简便便宜的检测～了解育龄妇女的免疫状况～可使约90 %以上的阳性者不必担心孕后会发生原发CMV感染～也可使小于10 %的阴性者孕后作为重点监测对象。对于妊娠的育龄妇女进行筛查是预防先天性CMV感染一级预防措施～这对防止和减少有严重出生缺陷的先天性CMV感染儿的降生有重要意义。 尽管检测抗体的ELISA方法在实验室中早已建立～1995年WHO也建立了IgG的国际标准～但至今～中国国内外尚无统一的临界值～中国也未有国家批准的可供筛查用的试剂盒。为此～本研究建立了用重组的ELISA检测方法～并提出了以700 IU/L作为国内育龄妇女抗体筛查的临界值的建议。 材料与方法 一、材料 1.标本来源: 1 024例血清标本～2008年1月至5月～来源于深圳市宝安区和深圳市计划生育专科门诊的20，40岁的育龄妇女。 2.抗原来源:8种CMV抗原分别来源于下列机构及个人。(1)国家人口和计划生育委员会科学技术研究所(简称本所)制备的CMV重组抗原。(2)本所制备的CMV全病毒纯化抗原。(3)购自Fitzgerald公司的全病毒纯化抗原。(4)购自深圳菲鹏公司的重组抗原。(5)购自深圳菲鹏公司的重组抗原。(6)购自深圳菲鹏公司的重组抗原。(7)购自Devatal公司的重组抗原。(8)李欣老师赠送的重组抗原。 3.主要试剂和仪器:辣根过氧化物酶标记的兔抗人IgG(丹麦DAKO公司)～TMB底物;Thermo Labsystems酶标仪(MultiskanAscent, Thermo Fisher Scientific公司)。 4.实验条件的选择:经预实验对固相载体(国产与进口Costar板)、抗原浓度、封闭条件(脱脂奶粉～小牛血清～BSA～PEG)、标本稀释液、稳定性试验等的试验～确定了应用吸附力强而均匀的进口Coning Costar板作为固相载体～本批抗原为1?2000～用3 %脱脂奶粉封闭～采用本所特制的有血清指示剂的变色标本稀释液对标本进行稀释。该稀释液加入血清前为黄色～加入血清后变为蓝色～可避免孔内漏加标本。本稀释液与国外(意大利Sorin和德国试剂)试剂盒提供的标本稀释液比较无差异。 二、本所重组的制备 由上海英俊生物技术有限公司合成的3种嵌合 pp150?氨基酸氨基酸～gp52?氨基酸氨基酸～ ～gp52?氨基酸并构建于克隆载体中～将此构建好的3个克隆载体和a(+)质粒载体转化入 感受态细胞中～然后重新抽提质粒～分别用限制性内切酶XhoI和NdeI进行双酶切～得到线性化的质粒载体和3个嵌合DNA片段。再将DNA片段接入质粒载体并转化入感受态细胞～再将克隆于37 ?培养8 h后～经由聚合酶链反应～polymerase chain reaction～PCR)和测序(由北京三博公司完成)的工程菌按1?50接入LB培养基中培养～再经1 mmol/L的IPTG诱导8 h～经聚丙烯酰胺凝胶电泳crylamide gel 考染和蛋白质印迹(western blot)的方法确定蛋白的表达。将富集诱导表达的重组抗原菌体超声破碎、离心得上清后～通过PVDF膜分别收集主峰～再经Amicon 超滤脱盐浓缩后～贮存于pH 7.4的磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline～PBS)中。 三、检验程序 1.8种敏感性比较与选择:各种抗原按常规方法包被于固载体～经封闭洗涤后应用。用1份混合血清经浓缩后作为检测样品～从1?100开始倍比稀释至1?6 400。取100 μl标本稀释液加入包被孔内～再加1 μl待测血清混匀～37 ?孵育1 h;洗液清洗5次～再加入100 μl酶结合物37 ?孵育1 h;再次清洗5次～加入显色剂 ～室温显色30 min;加入终止液200 μl～于酶标仪上(450 nm /620 nm)测样品OD值。选择CMV重组抗原pp52+pp150作为包被抗原。最佳变异系数(coefficient of variation, CV)分别为3.3 %，5.4 %。 的最低检出量:以400 IU/L和0 IU/L两份标本～分别重复检测12次和16次～分别取其平均值减去和加上2个标准差为最低稀释度标准。 3.精密度:任意选择不同抗体含量的3份标本(10 800 IU/L、3 600 IU/L、1 200 IU/L)～每份标本重复12次试验～计算其变异系数。 4.稳定性试验:将同一批试剂分别放37 ?存放3、5、7 d后～取出与存放4 ?的试剂比较其检测所得的OD。 5.对比试验:以Sorin公司生产的G ELISA方法为参比方法～与本法进行比较～计算2种方法的相关性Kappa值。 K=N(a+b)-(r1〃c1+r2〃c2)N2-(r1c1+r2c2) a为真阳性～b为假阳性～c为假阴性～d为真阴性～a+c=c1～b+d=c2～N=a+b+c+d～a+b=r1～c+d=r2 抗体临界值的确定:用意大利Sorin公司生产的 抗体检测试剂盒～筛出38份抗体阴性血清～再用本所研制的抗体检测试剂盒进行定量检测。以的2.1倍、+2SD、+4SD、+0.3作为临界值～从标准曲线求得的IU/L值。 结 果 一、本所重组的制备 本所重组经由PCR和测序～再经考染和WESTERN确定蛋白的表达～证明工程菌重组构建成功。 二、重组的质量检测 1.8种敏感性比较与选择:第4和第5种～即CMV重组抗原pp150+pp52和pp150的敏感性较好。同时对8种抗原作了精密性分析～结果显示～第4和第5种抗原的CV %值分别为3.3 %和5.4 %～优于其他6种抗原(CV %值为6.1 %，11.3 %),见表1。表1 8种抗原检测不同稀释度血清学OD值 2.最低检出量:最低检出量为13，290 IU/L。 3.精密度:批内变异系数为4.7 %，7.0 %～批间变异系数则为7.6 %，14.4 %～符合ELISA试验<15 %的要求。 4.稳定性试验:将同一批试剂分别放37 ?存放3、5、7 d后～取出与存放4 ?的试剂用24份标本进行检测～比较所测OD值变化均在10 %以内。 5.对比试验:本研究建立的方法与意大利Sorin公司生产的 检测试剂盒比较～其敏感性为92.3 %～特异性为82.2 %～诊断效率为97 %～ Kappa值为0.82～2种方法呈高度相关。 抗体临界值的确定:38份抗体阴性血清平均OD值为0.199～SD为0.076。若用的2.1倍作为临界值～从标准曲线求得抗体含量为440 IU/L;若以+2SD作为临界值～则为340 IU/L;若以+4SD则临界值为700 IU/L;若以+0.3为临界值～从标准曲线求得的结果为700 IU/L。根据本所建立抗体检测的目的是对育龄妇女进行筛查～要求一个不漏的筛查出阴性者～认为用700 IU/L作为临界值比用400 IU/L作临界值效果更好。 表2 本研究建立的方法与参比方法检测结果比较 本研究方法Sorin方法(参比方法)阳性 阴性阳性444(a)7(b)阴性8(c)37(d) 三、临床应用 深圳育龄妇女血清中抗体检测～不同的值标准～其和(+)的比例～见表3。表3 1 024例育龄妇女血清中抗体检测结果 讨 论 在用ELISA方法检测相应抗体时应用的相应的包被抗原是决定方法的敏感性和特异性最重要的因素。Weber等,通过不同的CMV重组抗原与全病毒纯化抗原对抗体检测的比较发现～其敏感性和特异性没有差别。但是～国内外也有报告[7，9]认为～重组抗原要比全病毒纯化抗原效果好。因为～天然的全病毒纯化抗原存在难于标准化和培养中潜在细胞蛋白污染和与其他病毒交叉污染等问题～而且多个重组抗原组合比单一的重组抗原效果好。本所的试验结果也显示～用CMV重组抗原效果比全病毒纯化抗原要好。因此～本所选择了CMV重组抗原pp150+pp52作为包被抗原。 关于检测抗体时所用的临界值～目前国内外尚无统一标准～尽管1995年WHO已发布了的国际标准～但至今尚未提供有关标准品～各国实验室仍是用自己的标准。如～意大利Sorin公司的产品用400 IU/L作为临界值;而罗氏公司则定为700 IU/L～把500，700 IU/L作为可疑;而Biotest公司则将临界值定为阴性平均OD值加0.3作为临界值;而国内实验室则多用阴性平均OD值加2SD或均值的2.1倍。国外尚有将阴性平均OD值加4个SD作为临界值的～本所认为～选择700 IU/L作为中国育龄妇女筛查时的临界值较好。因为～这种筛查是尽量不要漏掉阴性者而不是筛查阳性者～所以用700 IU/L比用400 IU/L更好。 本所建立的方法应用意大利Sorin公司(FDA认证)的标准品标定本所的标准品。通过对检测方法各个环节的优化选择～特别是采用了独特的变色稀释液和用滤纸片保存标准品～使其保存更加稳定。本研究检测的结果与用Sorin试剂对长春地区的1 879例育龄妇女检测结果比较～若以400 IU/L作临界值～则阴性检出率为2.9 %～本法为 3.8 %;若以700 IU/L作临界值～阴性检出率为4.9 %～本法为 6.7 %。本法阴性率略高。该方法经与FDA认证的DiaSorin公司 方法比较呈高度相关～方法的精密性、灵敏度、稳定 性均符合ELISA方法的要求。目前～由于进口试剂价格较昂贵～限制 了在人群中推广应用～本研究建立的方法价格低廉～操作简便适宜大 人群的育龄妇女中进行抗体的筛查之用。 【参考文献】 1Kenneson A, Cannon MJ. Re epidemiology of congenital cytomegalovirus (CMV) infection[J]. Rev Med Virol～ secondary cytomegalovirus infection in pregnancy[J]. Reproductive Toxicology～ 3Adler SP, Nigro G, Pereira L. Recent advances in the prevention and treatment of congenital cytomegalovirus infections[J]. Semin Perinatol～ 4Fowler KB, Stagno S, Pass RF. Maternal immunity and prevention of congenital cytomegalovirus infection[J]. JAMA～ 5Booth JC, Hannington G, Aziz TA, et al. Comparison of IgG antibody[J]. J Clin Pathol～ 6Weber B, Berger A, Rabenau H. Human cytomegalovirus infection: diagnostic potential of recombinant antigens for cytomegalovirus antibody detection[J]. J Virol Methods～ 2001～ ointe D. Diagnosis and prognostic markers of HCMV infection[J]. J Clin Virol～ 8孙立人. 人巨细胞病毒感染的实验室诊断研究进展[J]. 检验医 学～ 9Landini MP, Lazzarotto T, Maine GT, et al. Recombinant immunoglobulin M in human sera by enzyme immunoassay[J]. J Clin Microbiol～ 1995～