催产素对大鼠胃缺血-再灌注损伤的作用（医学论文）

催产素对大鼠胃缺血-再灌注损伤的作用（医学论文） 催产素对大鼠胃缺血-再灌注损伤的作用 作者:张文文 张建福 徐明 张咏梅 观察腹腔注射催产素,oxytocin，OT,对胃缺血- 【摘要】 目的 再灌注损伤 (gastric ischemia-reperfusion injury，GI-RI )的作用及其可能的机制。方法 采用夹闭大鼠腹腔动脉30 min，松开动脉夹血流复灌1 h，制备胃缺血-再灌注损伤模型,将SD大鼠随机分为12组，每组6只,4组腹腔注射0.5 ml生理盐水和0.5 ml 4, 20, 100 μg / 0.5 ml剂量的OT,1组腹腔注射200 μg / 0.5 ml 阿托西班,atosiban，OT特异性阻断剂,，1组等剂量atosiban注射10 min后给予100 μg / 0.5 ml OT,另取4组分别进行迷走神经切除、交感神经切除以及迷走神经切断+100 μg / 0.5 ml OT腹腔注射和交感神经切除+100 μg / 0.5 ml OT腹腔注射,这10组均进行缺血再灌注，计数胃黏膜损伤指数,gastric mucosal damage index，GMDI,。剩余2组分别给予0.5 ml生理盐水和100 μg / 0.5 ml OT，采用幽门结扎法收集胃液，测定所得胃液体积和pH值。结果 与对照组相比，腹腔注射OT,20, 100 μg / 0.5 ml,后, GI-RI明显减轻，GMDI减少，并能减少胃液排出量和胃酸度,P,0.05,,特异性拮抗剂atosiban能够翻转OT的保护作用,切断膈下迷走神经或切除腹腔交感神经节后再给予OT, 可进一步减轻GI-RI。结论 腹腔注射OT对大鼠GI-RI 具有保护作用; 这种作用可能是由迷走更多精品文档,欢迎来我主页查询 和交感神经介导，通过OT受体发挥的。 【关键词】 催产素,胃缺血-再灌注损伤,胃黏膜损伤指数,迷走神经切断术,交感神经切除术 催产素,oxytocin，OT,主要是在下丘脑视上核和室旁核的大细胞神经元中合成的, 除了使妊娠末期子宫收缩和促进哺乳期排乳的经典作用外, 还具有多种生理功能,1~3,。近年来,OT对于胃肠道的作用受到渐多的关注，有些研究证明微量注射OT至室旁核能够减少胃酸分泌,4,,在外周，反复皮下注射OT能够减少血浆中胃泌素、胆囊收缩素和胰岛素的浓度,5,。 但是脑室注射OT,10 mg/kg,能加重乙醇导致的胃溃疡，而对吲哚美辛导致的胃溃疡没有任何作用,4,,在迷走神经背核外源性注射OT能够增加胃酸分泌,6,。综上所述，看来催产素对于胃肠道功能的调节是很复杂的。 临床上各种原因(诸如门脉高压血管破裂、消化道溃疡及创伤出血等) 都能导致胃缺血-再灌注损伤,GI-RI, , 外周注射催产素对胃缺血-再灌注,GI-R,造成的胃黏膜损伤是否有保护或加重作用，其机制如何，这是值得研究的问。对此问题的研究有助于为器官缺血-再灌注损伤的临床防治提供新的理论和实验依据,对于拓宽多器官缺血-再灌注损伤的认识也具有一定意义。 1 材料和方法 1.1 实验动物 成年健康的Sprague-Dawley,SD, 雌性大鼠(220:240 g) , 由徐州医学院实验动物中心,使用许可号:SYXK,su, 2002-0038,提供。将SD大鼠随机分为12组，每组6只,更多精品文档,欢迎来我主页查询 4组腹腔注射0.5 ml生理盐水和0.5 ml 4, 20, 100 μg / 0.5 ml 剂量的OT,1组腹腔注射200 μg / 0.5 ml 阿托西班,atosiban，OT特异性阻断剂,，1组等剂量atosiban注射10 min后给予100 μg / 0.5 ml OT,另取4组分别进行迷走神经切除、交感神经切除以及迷走神经切除+100 μg / 0.5 ml OT腹腔注射和交感神经切除 +100 μg / 0.5 ml OT腹腔注射,这10组均进行缺血-再灌注，计数胃黏膜损伤指数,gastric mucosal damage index，GMDI,。剩余2组分别给予0.5 ml生理盐水和100 μg / 0.5 ml OT，采用幽 门结扎法收集胃液，测定所得胃液体积和pH值。 1.2 试剂 OT: 上海第一生化药业有限公司,atosiban:深圳翰宇生物有限公司,其他试剂均为国产纯。 1.3 方法 1.3.1 GI-RI动物模型的制备 按Wada等,7,方法进行。实验大鼠戊巴比妥钠麻醉后, 仔细分离腹腔动脉与周围组织后, 用小动脉夹夹闭腹腔动脉，30 min 后去除动脉夹恢复血流再灌注60 min。实验结束后取胃，行GMDI的测量，并保留组织，以进行后续指标测定。 1.3.2 膈下迷走神经切断 参照Mordes等,8,方法, 打开腹腔后, 在距贲门5 mm 处的食管前后壁,切断迷走神经前、后支。手术结束进行缺血-再灌注。 1.3.3 腹腔交感神经节切除 采用Alm 等,9,方法, 将胃肠推向腹腔右上方, 在腹腔动脉、腹主动脉和肠系膜上动脉间可见灰白色的更多精品文档,欢迎来我主页查询 交感神经节, 用有齿眼科小镊钝性分离并去除之, 并对切除的组织作组织学鉴定; 假手术组仅开腹, 尔后缝合。手术结束进行缺血-再灌注。 1.3.4 胃液收集与测定 参照张建福等方法,10,，即采用幽门结扎法收集胃液，记录胃液量，用pH计,上海雷磁仪器厂,测定胃液pH值。 1.3.5 GMDI的测量 将胃沿大弯侧剪开,冲洗,展平,采用Guth 等,11,方法略作改进测量计算GMDI 作为GI-RI的指标。具体做法是以局限于胃上皮的点状糜烂、溃疡或出血灶的损伤长度累积计分:0 分为正常,1 分?1 mm ,2 分?2 mm ,3 分?3 mm ,余类推;损伤宽度超过1 mm 时加倍计分。每组大鼠损伤分数的平均值即为GMDI。整个测量与计算由不直接参与实验工作的专人进行。 1.3.6 统计学处理 实验数据以〒s 示, 多组间比较采用完全随机方差分析法(ANOVA) 。检验水准α=0.05。 2 结 果 2.1 不同浓度催产素对大鼠GI-RI影响 分别用生理盐水,NS,0.5 ml, 催产素 (OT) 4, 20, 100 μg / 0.5 ml腹腔注射后，进行 GI-R。与对照组相比，20, 100 μg / 0.5 ml OT组GMDI有显著性降低,P<0.05,，表明腹腔注射催产素对胃黏膜损伤具有保护作用,表1,。表1 不同剂量OT腹腔注射对大鼠GI-RI的影响 表2 阿托西班对大鼠胃缺血再灌注损伤的影响 2.2 迷走神经在OT对GI-RI调控中的作用 在切断膈下迷走神经更多精品文档,欢迎来我主页查询 (vagotomy) +GI-R组，与对照组相比, 胃黏膜损伤明显减轻, 组间差别具有显著性; 切断膈下迷走神经后, 用100 μg / 0.5 ml OT,以 下实验均采用此剂量OT，体积不变,腹腔注射，与迷走神经切断 + GI-R组及腹腔注射OT+GI-R组相比, GMDI显著减轻，差异均有统计学意义(P<0.01), 表明迷走神经可能参与OT对GI-RI 的保护作用,表3,。表3 迷走神经在腹腔注射OT对GI-RI的保护中的作用 2.3 交感神经在OT对GI-RI 调控中的作用 在去除腹腔交感神 +GI-R组，与对照组相比, 胃黏膜损伤明经节,sympathectomy, 显减轻, 组间差别具有显著性( P < 0.01),去除腹腔交感神经节后, 腹腔注射OT，与交感神经切除+GI-R 组及腹腔注射OT相比, GMDI显著减轻，差异均有统计学意义( P < 0.01), 表明交感神经也可能参与OT对GI-RI 的保护作用,表4,。 表4 交感神经在腹腔注射OT对GI-RI的保护中的作用 2.4 腹腔注射OT对胃酸分泌及胃酸度的影响 NS+GI-R作为对照组，OT腹腔注射后，胃酸分泌量减少，酸度降低，与对照组相比有显著性差异,P<0.01,。提示OT对GI-RI的保护作用可能与减少胃酸分泌,降低胃液酸度有关,表5,。表5 腹腔注射OT对胃酸分泌及胃酸度的影响 3 讨 论 器官的缺血-再灌注损伤是生物学和医学中一个复杂而普遍存在的现象。自20世纪70 年代以来越来越受到人们的注意, 从而提出更多精品文档,欢迎来我主页查询 了再灌注损伤的概念。胃黏膜是人和动物体内最易受损伤的组织,各种严重的应激刺激,如出血性休克、心肺复苏、重大手术、严重感染等,均可引起不同程度的胃组织缺血-再灌注而造成胃黏膜损伤。因此人们对心、脑、肺、肾等器官的缺血-再灌注损伤有了较多的了解后,进一步研究GI-RI是非常必要的,具有一定的理论意义和实践价值。 OT是体内含量非常丰富的神经肽，具有多种生理功能。近年来，有研究发现OT对于各种急性胃黏膜损伤有一定影响。在这个实验中，我们比较系统地观察了腹腔注射OT对GI-RI的影响并对其作用机制进行了初步探讨。 腹腔注射不同浓度OT后，20, 100 μg / 0.5 ml两组都可以显 著减轻缺血-再灌注造成的胃黏膜损伤,注射OT 10 min前注射atosiban能够显著翻转OT对胃黏膜的保护作用，GMDI相对于单纯给予OT组大大提高，与对照组无明显差异。这些结果说明，OT对于缺血-再灌注引起的胃黏膜损伤有保护作用，并且这一作用是通过内源性OT受体实现的。 实验中观察到，腹腔注射OT组与对照组相比，胃酸分泌量减少，酸度降低，差异显著，由此可以推测，OT对于GR-RI的保护作用与其可以减少胃酸分泌和胃酸度有关。在本实验中，OT通过腹腔注射给予，有文献证实胃中不存在催产素受体,12,，而外源性OT可以通过血脑屏障进入脑内,13,,所以我们设想，OT通过腹腔注射后有可能透过血脑屏障进入脑内，作用于脑内的催产素受体，进而对缺血-再灌注造成的胃黏膜损伤产生保护作用，这与我们已经得到的室更多精品文档,欢迎来我主页查询 旁核微量注射OT对缺血-再灌注造成的胃黏膜损伤有保护作用的结果是一致的。 我们在研究外周神经对OT在GI-RI中的作用时发现,当分别切断膈下迷走神经及切除腹腔交感神经节后,再腹腔注射OT ,其GI-RI 的程度均比单纯注射OT减轻。因此可以得出结论，自主神经的完整性能够直接影响大鼠的GI-RI。如前言所述， OT能够减少迷走神经所调控的激素如胃泌素、胆囊收缩素和胰岛素等在血液中的浓度,因此，外周注射OT能够减少迷走神经控制的胃泌素，进一步引起胃酸排出减少和胃酸度的降低，这一作用在切断膈下迷走神经后被加强,而切除腹腔交感神经节后,由于胃黏膜血流量的改善,对胃黏膜损伤有细胞保护作用,14,, 这些因素都可能有助于加强OT对GI-RI 的保护作用。 从实验中我们可以得出以下结论，腹腔注射OT对于缺血-再灌注引起的大鼠胃黏膜损伤有显著保护作用，此作用是通过OT受体实现的，并且可能是由迷走或交感介导引起胃酸排出的减少及胃酸度的降低而产生。 【参考文献】 ,1, Gimpl G, Fahrenholz F. 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