高效液相色谱_离子阱质谱法测定生物体液中的痕量敌鼠和氯敌鼠

高效液相色谱_离子阱质谱法测定生物体液中的痕量敌鼠和氯敌鼠 2010年 2 月V o l. 28 N o. 2 C h in ese J ou rn a l of C h rom a tog ra ph y 197～203 F e b ru a ry 2010 DO I: 10. 3724 / S P. J. 1123. 2010. 00197 研究论文 高效液相色谱 2离子阱质谱法测定生物体液中的 痕量敌鼠和氯敌鼠 3 陈晓红金米聪 , ()宁波市疾病预防控制中心 宁波市毒物研究不控制重点实验室 , 浙江 宁波 315010 摘要 :建立了中毒应急检测样品生物体液内痕量敌鼠和氯敌鼠的高效液相色谱 2离子阱质谱定性定量检测 。 ( )全血样品由甲醇 /乙腈 50 / 50, v / v 沉淀蛋白后再经 O a s is HLB 固相萃取小柱净化富集 , 尿液样品直接经同类小 ( ) ( ) 柱净化富集 。采用 E x te n d C 18柱分离 , 以乙酸铵 2乙酸 0102 m o l /L , p H 515 缓冲溶液和甲醇 15 / 85, v / v 溶液 为流动相 , 使用电喷雾电离负离子多反应监测模式检测敌鼠和氯敌鼠 。对全血样品 , 敌鼠和氯敌鼠分别在 110 ～ μμ20010 g /L 和 015～10010 g /L 范围内呈良好的线性关系 , 回收率分别在 9011%～9212 %和 8716%～9314 %范围 ( )μ内 , 日内相对偏差 RSD 分别小于 618%和 711%, 日间 RSD 分别小于 919%和 1019 %, 定量限分别为 110g /L μμμ和 015 g /L。对尿液样品 , 敌鼠和氯敌鼠分别在 012～ 4010 g /L 和 011 ～2010 g /L 范围内呈良好的线性关系 , 回收率分别在 9011%～9415%和 9010%～ 9810%范围内 , 日内 RSD 分别小于 611%和 713 %, 日间 RSD 分别小于 μμ819 %和 1112%, 定量限分别为 012 g /L 和 011 g /L。本方法简便 、灵敏 , 能满足敌鼠和氯敌鼠中毒病人的临床快 速诊断 。 关键词 :高效液相色谱 2离子阱质谱法 ; 敌鼠 ; 氯敌鼠 ; 全血 ; 尿液 ( ) 文章编号 : 100028713 201002 20197 207 中图分类号 : O 658 文献标识码 : A S im u l t a n e o u s d e t e rm in a t io n o f t r a c e d ip h a c in o n e a n d c h lo r o p h a c in o n e in b io lo g ic a l s am p le s b y h ig h p e r f o rm a n c e l iq u id c h r om a t o g r a p h y c o u p le d w i t h io n t r a p m a s s sp e c t r om e t r y 3 J I N M ic o n g , CH EN X ia o h o n g ( N i n gbo K ey L a bo r a to r y of P o i s on R es ea r ch a n d C on t r o l, N i n gbo M u n i c ip a l C en te r fo r )D i s ea s e C on t r o l a n d P r even t i on , N i n gbo 315010, C h i n a A b s t r a c t : A rap id qu a lita t ive a n d qu a n t ita t ive m e th o d fo r th e s im u lta n e o u s d e te rm in a t io n o f t ra c e d ip h a c in o n e a n d c h lo rop h a c in o n e in b io lo g ic a l s am p le s h a s b e e n e s ta b lis h e d. Th e m e th o d m a in ly s e rve s fo r th e em e rge n t p o is o n in g d e te c t io n. Th e w h o le b lo o d w a s t re a te d w ith m e th a 2 ) ( / v a n d th e u r in e w a s c le a n e d 2up b y W a te rs O a s is HLB S P E c a r t r id 2 v n o l2a c e to n it r ile 50 / 50, ge s. Th e s am p le s w e re ( μ) s ep a ra te d o n a n E x te n d C 18 c o lum n 150 m m ×416 m m , 5 m b y ) ( u s in g th e m o b ile p h a s e o f am m o n ium a c e ta te 2a c e t ic a c id 0102 m o l /L , p H 515 2 c o n s is te d ( ) m e th a n o l 15 / 85, v / v . Th e d e te rm in a t io n w a s p e rfo rm e d b y h igh p e rfo rm a n c e liqu id c h rom a 2 ( ) to g rap h y c o up le d w ith io n t rap m a s s sp e c t rom e t ry H PLC 2IT 2M S u s in g a n e ga t ive e le c t ro sp ra y () io n iza t io n in te rfa c e in th e m u lt ip le re a c t io n m o n ito r in g M RM m o d e. Th e t ra n s it io n s o f m / z 339 ?167 fo r d ip h a c in o n e a n d m / z 373 ?201 fo r c h lo rop h a c in o n e w e re s e le c te d fo r th e qu a n t if i2c a n t io n s. F o r th e w h o le b lo o d s am p le s, th e c a lib ra t io n c u rve s w e re lin e a r w ith in th e ra n ge s o f μμμ110 - 20010 g /L a n d 015 - 10010 g /L; th e lim its o f qu a n t if ic a t io n w e re 110 g /L a n d 015 μg /L; th e sp ik e re c o ve r ie s w e re 9011 % - 9212 % a n d 8716 % - 9314 %, th e in t ra 2d a y re la t ive ( )w e re le s s th a n 618 % a n d 714 %, a n d th e in te r2d a y RSD s w e re le s s s ta n d a rd d e v ia t io n s RSD s 2m a il: jm c jc @163. c om . E 3 通讯联系人 : 金米聪 , 博士 , 主任技师. ( ) ( ) 基金项目 : 浙江省医药卫生优秀青年科技人才与项基金 2007QN 014 、宁波市自然科学基金 2007A 610072 、宁波市农业不社会发 ( )( ) 展基金 2007C 10084 和宁波市医学科技计划 2008017 项目. 收稿日期 : 2009 207 230 th a n 919 % a n d 1019 % fo r d ip h a c in o n e a n d c h lo rop h a c in o n e, re sp e c t ive ly. F o r th e u r in e s am 2 p μμle s, th e c a lib ra t io n c u rve s w e re lin e a r w ith in th e ra n ge s o f 012 - 4010 g /L a n d 011 - 2010 g μμ/L; th e lim its o f qu a n t if ic a t io n w e re 012 g /L a n d 011 g /L; th e sp ik e re c o ve r ie s w e re 9011 % - 9415 % a n d 9010 % - 9810 %, th e in t ra 2d a y RSD s w e re le s s th a n 611 % a n d 713 %, a n d th e in te r2d a y RSD s w e re le s s th a n 819 % a n d 1112 % fo r d ip h a c in o n e a n d c h lo rop h a c in o n e, re sp e c 2 t ive ly. T h is m e th o d is s im p le a n d s e n s it ive fo r th e s a t is fa c to ry d e te rm in a t io n o f t ra c e d ip h a c i2 n o n e a n d c h lo rop h a c in o n e re s id u e s in p o is o n e d p a t ie n ts fo r th e c lin ic a l d ia gn o s is. ( K e y w o r d s : h igh p e rfo rm a n c e liqu id c h rom a to g rap h y 2io n t rap m a s s sp e c t rom e t ry H PLC 2IT 2 ) M S ; d ip h a c in o n e; c h lo rop h a c in o n e; w h o le b lo o d; u r in e ( 敌鼠和氯敌鼠是近几年国内外使用较多的抗凝W a te rs O a s is HLB 固 相 萃 取 小 柱 3 m L / 60 ) 血灭鼠剂 。常有人 、畜敌鼠和氯敌鼠中毒的恶性事 m g, 美国 W a te rs 公司 。 甲醇 、乙腈 、乙酸 、乙酸乙[ 1, 2 ] 件报道 。为及时 、准确地查明中毒原因 , 抢救中 酯 、乙醇均为 H PLC 级 () (毒病人 , 建立生物体液中微量敌鼠和氯敌鼠的快速 、 德国 M e rc k 公司 ; 水为超纯水 所有的溶剂使用 μ) 准确 、灵敏的检测方法具有非常重要的实际意义 。 前均经 0145 m 滤 膜过 滤 ; 乙酸 铵 、氨水 为分 析 (文献报道的敌鼠和氯敌鼠的检测方法主要有分光光 纯 ; 敌 鼠 含 量 9910 %, 德 国 D r. E h re n s to rfe r 公 [ 3, 4 ] [ 5 ] ) (度法 、气相色谱法 、高效液相色谱 2紫外检测法 司 ; 氯敌鼠 含量 9810 %, 德国 D r. E h re n s to rfe r公 [ 6 - 11 ] (( ) ) LC 2UV 、高 效 液 相 色 谱 2质 谱 联 用 法 LC 2 司 。 ) ( ( ) M S 以 及 高 效 液 相 色 谱 2串 联 质 谱 法 LC 2M S / 敌 鼠和 氯 敌鼠 标准 工作 溶 液 110 g /L 的 制 [ 11 - 13 ] ) M S 等 。针对生物体液样品 , 前 3种方法由于 备 :分别准确称取 1010 m g 敌鼠和氯敌鼠标准品置 检测灵敏度低戒操作繁琐 , 难以满足中毒应急快速 于两个 10 m L 容量瓶中 , 用少量甲醇溶解后再定容 μ检测要求 ; 而 L C 2M S 和 LC 2M S /M S 具有较强的定 至刻度 。实验前分别取敌鼠标准储备液 10L 及氯 μ性和定量能力 , 在生物样本的毒物检测中已得到了 敌鼠标准储备液 5 L 置于 50 m L 容量瓶中进行混 [ 13 ] 广泛的应用 。杨士云等 报道了生物检材中氯敌 合 , 用甲醇稀释并定容至刻度 , 配制成质量浓度分别 [ 11 ]鼠的 LC 2M S 法检测 ; M e sm e r等 报道了市售鼠药 为敌鼠 0120 m g /L、氯敌鼠 0110 m g /L 的标准工作 中敌鼠和氯敌鼠的 LC 2U V 和 LC 2M S 检测 ; B ra s e l2 溶液 。 [ 12 ]( ) to n 等 报道了中毒死亡的动物样品中敌鼠和氯敌 乙酸 2乙酸铵缓冲溶液 0102 m o l /L , p H 515 : 鼠的电喷雾正离子模式串联质谱检测方法 , 但因其 准确称取 0177 g 乙酸铵置于 500 m L 量瓶中 , 用纯 检测灵敏度较差 , 难以在生物样本的痕量检测中发 水溶解并稀释至刻度以下少许 , 然后用体积分数为 挥作用 。因而关于敌鼠和氯敌鼠中毒的快速定性定 1 %的乙酸调节 p H 到 515, 再用纯水稀释至刻度 。 (量检测方法还有待于进一步发展 。本文参考有关文 空白全血 : 采自健康志愿者静脉 年龄 20 ～25 [ 6 - 12 ] ) 献 , 利用高效液相色谱 2离子阱质谱法 , 通过对 岁 , 经肝素抗凝 , 于 - 20 ?保存 。空白尿液 : 采自 () 提取 、净化 、洗脱及质谱检测条件的优化 , 建立了同 健康志愿者 年龄 20～25 岁 , 于 - 20 ?下保存 。 时定性定量测定生物体液样品中痕量敌鼠和氯敌鼠 1. 2 分析条件 的方法 , 获得了较为满意的结果 。 1. 2. 1 色谱条件 ( 色谱柱 : Zo rb a x E x te n d C 18 色谱柱 150 m m1 实验部分 μ) μ×416 m m , 5 m ; 柱温 : 30 ?; 进样量 : 10 L; 流 1. 1 仪器 、材料与试剂 ( ) 动相 : 乙酸 铵 2乙酸 0102 m o l /L , p H 515 缓 冲 溶 ( ) 型高效T rap SL A g ile n t 1100 s e r ie s LC /M SD 液 /甲醇 15 / 85, v / v ; 流速 : 013 m L /m in。 () 1. 2. 2 质谱条件液相色 谱 2质 谱 联 用 仪 美 国 A g ile n t 公 司 ; KQ 2 () ( ) 2200型超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司 ; 离子源 : 电喷雾离子源 ES I; 扫描方式 : 负离 - () ( )() 全玻璃溶 剂 过 滤 器 美 国 W a te rs 公 司 ; H GC 224 子 ES I扫描 ; 扫描范围 m / z : 50 ～450; 毛细管 () 型氮吹仪 天津恒奥科技有限公司 ; M illi2Q 纯水 电压 : 2 800 V; 毛细管出口电压 : 185 V; 干燥温度 : () (系统 美国 M illip o re 公司 ; 12 孔固相萃取仪 美 325 ?; 干燥气流速 : 910 L /m in; 喷雾压力 : 378195 ( ) ) k P a 5510 p s i。敌鼠的定量离子对为 m / z 339 ?国 S up e lc o 公司 。 ?199?第 2期 金米聪 , 等 : 高效液相色谱 2离子阱质谱法测定生物体液中的痕量敌鼠和氯敌鼠 167, 确证离子对为 m / z 339 ?145, 其 碰撞 电压 为 :准确吸取尿液 510 m L 于 10 m L 尿液样品处理 具塞比色管中 , 用乙酸调节 p H 到 410, 混匀 , 全部注1125 V; 氯敌鼠的定量离子对为 m / z 373 ?201, 确 入 O a s is HLB 固相萃取小柱 , 其余操作同血液样品 。证离子对为 m / z 373 ?145, 其碰撞电压为 1100 V。 1. 3 样品处理2 结果与讨论 2 m L : 准确吸取 015 m L 全血到 全血样品处理 2. 1 沉淀剂的选择 ( 具塞聚丙烯离心管中 , 加入甲醇 /乙腈 50 / 50,)v / v 混合沉淀剂 1 m L , 在旋涡混合仪上混合 10 m in , 接 取 2 m L 具塞聚丙烯离心管 15 支 , 分别加入敌 μ着使用离心机以 10 000 r /m in 速率离心 5 m in, 吸 鼠 、氯敌鼠标准工作液 25 L , 在 40 ?水浴上用氮 取上清液于另一离心管中 , 下层部分用混合沉淀剂 吹仪浓缩至干 , 再分别添加健康人空白全血 015 m L 于旋涡混合仪上混合 10 m in , 静置 2 h 后 , 按 113节1 m L 重复沉淀 1次 , 最后合并上清液 。所得溶液在 ( ) , 分别采用甲醇 、甲醇 /乙腈 50 / 50, v / v 、方法处理 40 ?水 浴 上 用 氮 吹 仪 浓 缩 至 干 , 残 渣 用 甲 醇 /水 [ 5 - 11 ] ( ) ( )乙腈 、乙酸乙酯 、乙酸乙酯 /乙醇 90 / 10,v / v 70 / 30, v / v 溶液 1 m L 溶解并旋涡混合 2 m in , 然 ( ) (进行蛋白沉淀后测定 n = 3 , 以相应质量浓度的敌后全 部 注 入 O a s is HLB 固 相 萃 取 小 柱 预 先 以 ) (鼠和氯敌鼠标准溶液在质谱上的响应为 100 % 敌 2 m L 甲醇和 2 m L 水活化 ; 依次用 2 %乙酸 /甲醇5 ( ) ( 鼠和氯敌鼠的峰面积分别为 2105 ×10和 8140 × 55 / 45, v / v 溶液 1 m L 和 2 %氨水 /甲醇 55 / 45, 5 )( ) ) v / v 溶液 1 m L 淋洗 , 最后用甲醇 /水 90 / 10, v / v 10, 经不同蛋白沉淀剂处理的结果见 1。由表 1 ( )溶液 2 m L 洗脱 ; 收集洗脱液 , 在 40 ?水浴上用氮 可知以甲醇 /乙腈 50 / 50, v / v 作为蛋白沉淀剂 , 目 吹仪浓缩至干 ; 残渣用甲醇 1 m L 溶解并旋涡混合 标物的回收率明显高于使用其他蛋白沉淀剂所得的 μ 2 m in, 然后过 0145 m 滤膜 , 待测 。结果 。 ( )表 1 使用不同蛋白沉淀剂时敌鼠和氯敌鼠的回收率 n = 3 T a b le 1 R e c o v e r ie s o f d ip h a c in o n e a n d c h lo r o p h a c in o n e w i t h d if f e r e n t p r o t e in p r e c ip i t a t o r s D ip h a c in o n e C h lo rop h a c in o n e P re c ip ita to r A re a R e c o ve ry / % A re a R e c o ve ry / % 55M e th a n o l 85. 8 . 7 831. 76 ×10 7. 03 ×10 55( ) M e th a n o l / a c e to n it r ile 50 / 50, v / v95. 1 95. 9 1. 95 ×108. 06 ×1045E th y l a c e ta te 48. 4 43. 1 9. 93 ×103. 62 ×105585. 5 93. 6 A c e to n it r ile 1. 76 ×107. 86 ×1045 ( )E th y l a c e ta te / e th a n o l 90 / 10, v / v 43. 4 53. 0 8. 89 ×104. 45 ×10 2. 2 固相萃取条件的优化, 对全血及尿液样品 , 尽管 O a s is M CX和 结果表明 2. 2. 1 固相萃取小柱类型的选择 本 研 究 S up e lc o LC 18 两种小柱都能得到较好的回收率 , 但 比 较 了 O a s is HLB 、M CX 和 HLB 小柱的杂质分离能力明显优于前两种小柱 , 而 S up e lc o () LC 18固相萃取小柱 均为 3 m L / 60 m g 对尿液和丏回收率最高 。图 1 a 和 b 分别给出了空白尿液和 血液中的痕量敌鼠和氯敌鼠的富集净化效果 。试验空白血液中添加不同浓度的敌鼠后采用不同类型的 ( )( )图 1 使用不同固相萃取小柱萃取时 a 尿液和 b 血液中敌鼠的回收率 ( ) ( ) F ig. 1 R e c o v e r ie s o f d ip h a c in o n e in a u r in e a n d b w h o le b lo o d w i t h d if f e r e n t s o l id 2p h a s e e x t r a c t io n c a r t r id g e s μμμμμμ C o n c e n t ra t io n o f d ip h a c in o n e: 1. 210 g /L; 2. 1010 g /L; 3. 3010 g /L; 4. 1010 g /L; 5. 4010 g /L; 6. 8010 g /L. S P E 小柱净化的回收率情况 。当添加氯敌鼠进行 011 敌鼠 和 氯 敌 鼠 的 质 谱 信 号 。通 过 注 射 泵 将 试验时 , 也 得 到 了 相 似 的 结 果 。因 而 本 研 究 选 择m g /L 的敌鼠和氯敌鼠标准溶液以 015 m L / h 的流 ( ) HLB 固相萃取柱进行样品处理 。速 , 以及将乙酸铵 2乙酸 0102 m o l /L , p H 515 缓冲 ( ) 2. 2. 2 固相萃取淋洗和洗脱条件的优化 淋洗和洗溶液 /甲醇 15 / 85, v / v 的 流 动 相 以 012 m L /m in 脱是固相萃取的关键步骤之一 。本试 的流速同时通过 T 型管而引入质谱雾化室 , 利用仪 ( ) 验采用 2 % 乙酸 /甲醇溶液 55 / 45, v / v 和 2 % 氨 器自动优化程序优化质谱条件 , 得到强而稳定的待 - ( ) 水 /甲醇 55 / 45, v / v 溶液对目标物进行酸洗和碱 测物的准分子离子峰 [M - H ] 信号 。选择其准分 - 洗 , 可除去尿液和血液中部分游离的脂肪酸等酸性 子离子峰 [M - H ] 为母离子进行碎裂 , 优化裂解电 物质和部分嘌呤等碱性物质 , 并丏效果较好 。增大 压 , 获得强而稳定的碎片离子作为定量监测离子和 甲醇含量 , 当体积分数达到 50 % 时 , 只有少量的目 确证离子 。结果表明 , 分别以敌鼠和氯敌鼠的准分 - 标物被洗脱 。随着甲醇含量的进一步增加 , 洗脱能 子离子 [M - H ] 为母离子 , 碎裂得到对应 m / z 167 ( )力随之增强 , 甲醇 /水 90 / 10, v / v 溶液可达到较好 和 201 的离子丰度为最强丏稳定的碎片离子 , 同时 ( 的洗脱效果 。为此 , 选择含 2 % 乙酸 /甲醇 55 / 45, 还得到较丰富的其他碎片离子 。本文分别选择 m / )( ) v / v 溶液和 2 %氨水 /甲醇 55 / 45, v / v 溶液作淋 z 339 ?167和 m / z 373 ?201 为敌鼠和氯敌鼠的定 ( )洗液 , 甲醇 /水 90 / 10, v / v 溶液作洗脱液。 量离子对 , 以 m / z 167和 m / z 201的峰面积分别定 量 ; 选择 m / z 339 ?145 和 m / z 373 ?145 为相应的 2. 3 质谱条件的优化 为了获得最佳的质谱检测条件 , 参考文献 [ 11,确证离子对 , 以三离子原则进行定性 , 其 M S /M S 图 ( ) 13 ]利用电喷雾电离源 ES I, 在负离子模式下优化见图 2, 特征碎片离子裂解图见图 3。 图 2 敌鼠和氯敌鼠的 M S /M S 图 F ig. 2 M S /M S sp e c t r a f o r d ip h a c in o n e a n d c h lo r o p h a c in o n e μ2. 4 线性范围和定量限 012, 015, 110, 210, 1010, 4010 g /L , 氯敌鼠的质 μ量浓度为 011, 012, 110, 210, 1010, 2010g /L , 然 在 6份健康人空白全血中分别添加不同量的敌 后按 113节方法处理 , 进样分析 。分别以敌鼠和氯 鼠 、氯敌鼠标准储备液 , 使血液中敌鼠的质量浓度为 ()( μ)μ敌鼠的峰面积 A 对其质量浓度 C , g /L 进行线 110, 210, 1010, 5010, 10010, 20010 g /L , 氯敌鼠 的质量浓 度为 015, 110, 510, 1010, 5010, 10010 性回归 , 考察其线性范围 。结果表明 , 敌鼠在 012 ～ μg /L , 然后按 113 节方法处理 , 进样分析 。分别以 μμ4010 g /L , 氯敌鼠在 011 ～2010 g /L 的范围内呈 ( ) ( 敌鼠 和 氯 敌 鼠 的 峰 面 积 A 对 其 质 量 浓 度 C , 现良好的线性关系 , r ?01999。以 S /N = 10 进行计 μ)g /L 进行线性回归 , 考察其线性范围 。结果表明 , μ算 , 敌鼠和氯敌鼠的定量限分别为 012 g /L 和 011 μ敌鼠在 110 ～ 20010 g /L、氯 敌 鼠 在 015 ～ 10010 μ g /L , 结果见表 2。 μ( ) 2. 5 方法的回收率和精密度g /L 的范围内呈现良好的线性关系 , 相关系数 r ( ) 均不小于 01999。以信噪比 S /N 为 10 进行计算 , 分别在 6份健康人空白全血中加入一定量的敌 μ敌鼠 和 氯 敌 鼠 的 定 量 限 分 别 为 110 g /L 和 015 鼠 、氯敌鼠标准储备液 , 使血液中敌鼠的质量浓度为 μμg /L , 结果见表 2。 1010, 5010 和 10010 g /L , 氯 敌 鼠 的 质 量 浓 度 为 μ 510, 1010 和 5010 g /L , 然后按 113 节方法处理 ,在 6份健康人空白尿液中分别添加不同量的敌 进样分析 , 计 算 其回 收 率 , 结 果 见 表 3。由 表 3 可鼠 、氯敌鼠标准储备液 , 使尿液中敌鼠的质量浓度为 ?201?第 2期 金米聪 , 等 : 高效液相色谱 2离子阱质谱法测定生物体液中的痕量敌鼠和氯敌鼠 ( )( )图 3 a 敌鼠和 b 氯敌鼠的质谱裂解机理 ( ) ( ) F ig. 3 F r a gm e n t a t io n m e c h a n ism s o f a d ip h a c in o n e a n d b c h lo r o p h a c in o n e μ知 , 敌鼠和 氯 敌 鼠 的 加 标 回 收 率 分 别 在 9011 % ～ 210, 1010和 2010g /L ,氯敌鼠质量浓度为 110, 210 μ 9212 %和 8716 %～9314 % 范围 , 日内测定的相对标和 1010g /L ,按 113 节方法处理 , 按 1. 2 节的色谱 2( ) RSD 质谱条件分析 ,计算其回收率, 结果见表 3。由表 3可 RSD 分别小于 618 % 和 711 %, 日 间 准偏差 分别小于 919 %和 1019 %。知 , 敌鼠 和 氯 敌 鼠 的 加 标 回 收 率 分 别 为 9011% ～ 分别在 6份健康人空白尿液中加入一定量的敌 9415%和 9010%～9810%, 日内 RSD 分别小于 611% 鼠 、氯敌鼠标准储备液 , 使尿液中敌鼠质量 浓度 为 和 713%,日间 RSD 分别小于 819%和 1112%。 ( )表 2 方法的回归方程 、线性范围 、定量限和相关系数 r ()T a b le 2 R e g r e s s io n e q u a t io n s , l in e a r r a n g e s , l im i t s o f q u a n t if ic a t io n LO Q a n d c o r r e la t io n ( ) c o e f f ic ie n t s r f o r t h e a n a ly t ic a l m e t h o d 3 μμS am p le C om p o u n d () () r L in e a r ra n ge / g /L LOQ / g /L R e g re s s io n e qu a t io n 4 3d ip h a c in o n e B lo o d 1. 0 - 200. 0 . 0 . 9990 10A = 7. 22 ×10C - 3. 45 ×10 4 3c h lo rop h a c in o n e 0. 5 - 100. 0 0. 5 0. 9993 A = 5. 61 ×10C - 1. 87 ×104 3d ip h a c in o n e U r in e 0. 2 - 40. 0 0. 2 0. 9991 A = 1. 47 ×10C - 2. 19 ×104 3 0. 1 - 20. 0 0. 1 0. 9994 c h lo rop h a c in o n e A = 1. 22 ×10C - 1. 29 ×10 μ3 A : p e a k a re a; C : m a s s c o n c e n t ra t io n, g /L. 表 3 方法的回收率与精密度 T a b le 3 R e c o v e r ie s a n d p r e c is io n s f o r t h e a n a ly t ic a l m e t h o d RSD / % ( ) A d d e d / R e c o ve ry / ?SD / F o u n d m e a n S am p le C om p o u n d (μ)g /L (μ) % ))) ( ( ( g /L n = 6 In t ra 2d a y n = 6 In te r2d a y n = 3 10. 0 . 2 . 8 . 9 9269B lo o d d ip h a c in o n e . 22 ?0. 63 9 50. 0 92. 2 3. 7 7. 4 46. 1 ?1. 72 100. 0 90. 1 6. 3 9. 6 90. 1 ?5. 68 5. 0 93. 4 7. 1 10. 9 c h lo rop h a c in o n e 4. 67 ?0. 33 10. 0 87. 6 5. 1 7. 9 8. 76 ?0. 45 50. 0 88. 2 5. 2 6. 9 44. 1 ?2. 31 2. 0 90. 5 5. 0 8. 2 U r in e d ip h a c in o n e 1. 81 ?0. 09 10. 0 90. 1 6. 1 8. 9 9. 01 ?0. 55 20. 0 94. 5 4. 7 6. 1 18. 9 ?0. 89 1. 0 90. 0 6. 5 9. 2 c h lo rop h a c in o n e 0. 90 ?0. 059 2. 0 98. 0 4. 0 6. 8 1. 96 ?0. 078 10. 0 9. 21 ?0. 67 92. 1 7. 3 11. 2 μ2. 6 选择性和特异性 510, 1010和 5010g /L; 使尿液中敌鼠质量 浓度为 μ 选择 6份不同来源的空白血样和空白尿样 , 然 浓度为 210, 1010和 2010g /L , 氯敌鼠质量浓度为 μ) 后按 113节方法处理 , 按 1. 2 节的色谱 2质谱条件进 110, 210和 1010 g /L 不不含血样和尿样基质的 行分析 。结果发现 , 在血样和尿样基质中 , 敌鼠和氯 相同浓度的标准溶液的质谱响应信号的比较 , 发现 敌鼠色谱峰的附近均未出现其他杂峰 , 血样及尿样 在含有血液和尿液基质的样品不不含基质的标准溶 中的内源性物质对敌鼠和氯敌鼠的测定也无显著性 液样品中 , 目标物的质谱响应信号的相对偏差的绝 干扰 。同时我们通过在空白血样和空白尿样中添加 对值均小于 10 %。图 4给出了典型的血样加标样品 ((μ) 一定量的敌鼠和氯敌鼠标准溶液 使血液中敌鼠质 敌鼠 和 氯 敌 鼠 均 为 5010 g /L 和 空 白 血 样 的 μ 量浓度为 1010, 5010和 10010g /L , 氯敌鼠的质量M RM 色谱图 。 ( )(μ( ))图 4 a 加标血样 敌鼠和氯敌鼠添加水平为 5010 g /L 和 b 空白血样的 M RM 色谱图 μ( ) F ig. 4 M RM c h r om a t o g r am s o f a a b lo o d s am p le sp ik e d a t 5010 g /L o f d ip h a c in o n e ) ( ) a n d c h lo r o p h a c in o n e a n d b a b la n k b lo o d s am p le 1. d ip h a c in o n e; 2. c h lo rop h a c in o n e. ?203?第 2期 金米聪 , 等 : 高效液相色谱 2离子阱质谱法测定生物体液中的痕量敌鼠和氯敌鼠 ) (C h em is t ry 谭家镒 , 姜兆林 , 吴玉红. 分析化学 , 1998, 26 3 结论 ( ) 4 : 454 [ 5 ] R o ge r W B , G ilb e r t H , J am e s E P. J A g r ic F o o d C h em , ( ) 全血样品经甲醇 /乙腈 50 / 50, v / v 沉淀蛋白 ( ) 1975, 23 1 : 72 后进行固相萃取 , 尿液样品直接采用固相萃取小柱 [ 6 ] G u a n F Y, L iu L , L u o Y. C h in e s e J o u rn a l o f A n a ly t ic a l () ( ) C h em is t ry 关福玉 , 刘力 , 罗毅. 分析化学 , 1995, 23 2 :( 进行 净 化 浓 缩 , 以 乙 酸 铵 2乙 酸 0102 m o l /L , p H 159 )( ) 515 缓冲溶液 /甲醇 15 / 85, v / v 为流动相而建立 [ 7 ] P a la zo g lu M G , To r E R , H o ls te ge D M , e t a l. J A g r ic F o o d 的生物样品中敌鼠和氯敌鼠高效液相色谱 2离子阱 ( ) C h em , 1998, 46 10 : 4260 质谱检测方法 , 具有准确 、快速 、灵敏的优点 , 可满足 [ 8 ] Th o n gc h a i C , L aw re n c e J F , M ic h a n e l J M. J A n a l To x ic o l, ( ) 1993, 17 1 : 56 鼠药中毒临床快速诊断要求 。 [ 9 ] C h e n H Y, C h e n X H , J in M C , e t a l. J o u rn a l o f In s t rum e n 2 参考文献 : ) (ta l A n a lys is 陈海燕 , 陈晓红 , 金米聪 , 等. 分析测试学报 , ( ) 2008, 27 9 : 1008 [ 1 ] F a n Q L , D e n g P P. M e d ic a l J o u rn a l o f N a t io n a l D e fe n d in g ( ) H u n te r K. 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