【doc】大鼠胸腺的神经分布—银染色和乙酰胆碱酯酶组织化学的研究

【doc】大鼠胸腺的神经分布—银染色和乙酰胆碱酯酶组织化学的研究 大鼠胸腺的神经分布—银染色和乙酰胆碱 酯酶组织化学的研究 4=一7 第24卷第4期 l993年l0月 解剖 ACTAANATOMICASINlCA VO1.24.No4 0ctl993 大鼠胸腺的神经分布——银染色和 乙酰胆碱酯酶组织化学的研究 学院组研.徐?/岁2.一 A摘要用银染色法和乙酰胆碱酯酶(AChE)组织化学法,观察大鼠胸腺的神经纤维分布.银染 色法显示.在胸腺髓质中神经纤维构成复杂的网络状结构在胸腺皮质和髓质中,均存在AChE 阳性神经纤维,其分支终止或环绕于胸腺细胞的附近. 此外,AChE阳性神经纤维与肥大细胞可形成紧密邻接.有些肥大细胞含有AChE阳性反应 物.作者认为.胸腺皮质和髓质都接受副交感的胆碱能神经纤维的支配.后者对胸腺细胞和肥大细 胞等可能起调节作用. 关键词:丝堡奎!塑银染色乙酰胆碱酯酶组织化学 胸腺既是一个中枢淋巴器官,又是一个内分泌器官,它在神经内分泌免疫网络中发挥着 重要的作用.神经系统可通过神经分布,神经递质和活性因子,直接或间接地调节胸腺的功 能….胸腺的神经分布较复杂,主要受植物性神经支配"'".迷走神经,膈神经,喉下 神经和舌下神经降支均发出纤维到胸腺.在胸腺中也发现了肾上腺素能,胆碱能和肽能 神经纤维的分布",并认为发育中的胸腺细胞是神经的靶细胞".交感神经对胸腺细胞 起抑制作用,副交感神经则对胸腺细胞起兴奋作用.本研究用银染色法和乙酰胆碱酯酶 (ACHE)组织化学方法,观察大鼠胸腺的神经纤维分布,试图进一步揭示胸腺的神经分布规 律,为探讨胸腺的免疫调节提供新的资料. 材料和方法 健康成年Wistar大鼠8只,雌雄各半,体重200250g,断头处死,立即取出胸腺. 一 部分固定于1O%甲醛钙液中,4?,8h.在含20%蔗糖的0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.2) 中于4?过夜.次日经恒冷箱切片机制作厚2m的连续切片.另一部分胸腺人Carnoy液 中,固定l2h,制作厚m的石蜡连续切片 AChE组织化学法采用Hedmen"的改良法,以碘化乙酰硫胆碱(acet)rlthiocholine iodide,Sigma产品1作底物,将冰冻切片在孵育液中于37?孵育2,3h,再经0.1mol/L硝 酸钠洗5次,1%硫化铵1min,0.1mol/L硝酸钠洗5次,0_l一1%硝酸银2min.1%甲基 绿复染,用以显示胸腺的胆碱能神经纤维.AChE法的对照,用相邻切片经免底物的孵育液 ,随即在含孵育和10tool/L硫酸毒扁豆碱(physostigminesulfate,Sigma产品)预孵育底 物的孵育液中孵育.其余步骤同前. 按Linder银染色改良法,显示胸腺的神经纤维.我们对本法作了改进,按Linder 4期王新亭等大鼠胸腺的神经分布——银染色和乙酰胆碱醑酶组织化学的研究.407. 银染法作浸银处理,其还原按Grimefius银染法步骤进行.切片脱蜡至水,入Linder三甲 基吡啶稀释缓冲液4o?,10-30rain,八Linder银浸液40?,浸染10--30rain,水冼,八 Grimelius还原液1,5rain还原. 结果 AChE组织化学法显示,AChE阳性神经纤维于被膜和小隔中紧贴皮质分布,并与多个 肥大细胞紧密相依(图1).在皮质浅层,AChE阳性神经纤维伴随肥大细胞分布,并有多个 分支分布于皮质中,其末梢终止于朐腺细胞附近(图2).AChE阳性神经纤维还分布于皮质 的小血管壁上,并沿着它走行(图3).有的分支还纵行穿过皮质(图4).由小隔延伸至皮髓质 交界区的AChE阳性神经纤维分支伸入髓质,构成神经纤维网,其末梢终止干胸腺细胞附 近(图5).在髓质中有些分支呈环状包绕几个胸腺细胞(图6)在皮髓质交界区由皮质伸来的 AChE阳性神经纤维,一部分伸入髓质,另一部分分支末梢与此区的肥大细胞紧密相依(圈 7).此外,有些肥大细胞含有AChE阳性反应物(图8).对照切片均为阴性.银染色法显示, 神经纤维沿着被膜和小隔分布,并伸入皮质,延伸至髓质(图9).在髓质中,其分支形成密集 的神经纤维网,分支的末梢终止于朐腺细胞附近(图l01.在髓质的小血管周围,神经纤维形成 血管周神经丛(图l0).在皮质中,直接由被膜和小隔来的神经纤维,一部分延伸至髓质,加入 髓质纤维网,另一部分分布于皮质中,但不构成像髓质那样的纤维网(图9,10) , 讨论 本研究观察发现,在胸腺皮质,皮髓质交界区和髓质中,均有AChE阳性神经纤维分 布.以往的研究表明,AChE阳性神经纤维主要分布于胸腺的皮质和皮髓质交界区"". 而本研究表明,除皮质和皮髓质交界区外,在髓质中也存在AChE阳性神经纤维,其分支 末梢终止或环绕干胸腺细胞附近由此我们认为,胸腺的皮质和髓质都接受副交感的胆碱能 神经的支配,后者对胸腺细胞和上皮性网状细胞可能起调节作用.现已证明,胸腺的上皮性 网状细胞和胸腺细胞的胞膜上具有乙酰胆碱受体.有人认为,神经递质和神经肽都 能与免疫细胞上的相应受体结合,通过改变细胞内cAMP的含量,影响细胞的代谢活性和 早期激活过程"….由此我们推测,神经末梢释放乙酰胆碱,可能作用于上皮性网状细 胞和胸腺细胞膜上的相应受体,影响胸腺的内分泌功能和胸腺细胞的分化与成熟".本 研究还发现,在胸腺内的小血管壁上有AChE阳性神经纤维的分布,提示神经还可支配血 管系统,通过改变器官中的血流量,调节进入或迁出器官淋巴细胞的速度或免疫活性物质的 含量" Hammar"用银染色法研究了人胚胎胸腺的神经分布,发现在l6,2O周的人胚胎胸 腺髓质中已形成神经丛.我们用银染色法观察到,大鼠胸腺皮质和髓质的神经纤维分布存在 着明显的差异.髓质的神经纤维可形成复杂的纤维网.由此推测,这可能与胸腺不同区域中 的T细胞发育的微环境不同有关,其微环境的变化可能受神经的调节.此外,与AChE组 织化学的结果相比较,两者所显示的神经纤维分布大致相似.如髓质的AChE阳性神经纤 维分支也多,成网状.然而,AChE阳性神经纤维可能仅是神经纤维的一部分,其余可能为 肾上腺素能和肽能神经纤维". 已有研究报道,周围神经纤维与肥大细胞在形态学上存在着密切的关系在免 疫器官的交感神经支配区域有肥大细胞存在"".但尚未见AChE阳性神经纤维与肥大细 ? 408解剖24卷 胞存在紧密邻接的报道.有研究证明乙酰胆碱可诱导大鼠肥大细胞释放组织胺逆行刺 激皮肤神经和轴突反射,可使肥大细胞脱颗粒",提示神经与肥大细胞之间存在着功能的 关系,井认为肥大细胞可作为神经纤维的刺激器和神经冲动的靶细胞.由此我们推测, 胸腺的副交感神经可能通过释放乙酰胆碱,以调节肥大细胞释放组织胺和前列腺素等活性物 质,井调节胸腺的功能".但是某些肥大细胞本身具有AChE反应性,关于这一点, 尚未见类似报道同时,其又接受乙酰胆碱的调节,其意义有待研究. 罔版说明 收精I992—08倍回1993MM 本文图】,lO见插图第l2页 圈1滑被睦紧贴皮质分布的AChE~性神经纤维(NF)与几个肥大细胞(M)紧密相依(箭头示)×400 圉2皮质浅星AChEm性神经纤雏'NF1伴随肥大细胞(~【)分布有多个分支分布 千皮质中,其末梢终止干胸腺 细胞附近箭头示肥大细胞与神经纤维紧相依×400 圈3皮质AChE阳性神经纤维fNF)分布于小血管壁上,井沿着它走行箭头示有分支伸^皮质中×400 图4AChE阳性神经纤维fNF)敏秆穿过度质×400 图5AChE阳性神经纤维(NF)在皮髓质交界区(cMz)分支伸人髓质,成树枝状.其柬梢终止于胸腺细胞附近 x400 图6在世质中,AChE阳性{经纤维(NF)的分支呈环状包绕几个胸糠细胞(箭头示)×400 圉7由皮质伸来的多个AchE阳性神经纤维tNFm分支分布于皮髓质壹界匠tcMz1.并伸八髓质,终止于胸腺 细胞附近,箭头示其分支末梢与肥大细胞(M)紧密相依×400 圈8箭头示含有AChE附性反应物的肥大细胞x400 囤9神经纤维(NF)fl~被膜(ca)伸^皮质(c),延伸至髓质(M)×400 图10髓质神经纤维{NF)分支形成神经纤维网,分支的柬梢终止于胸腺细胞附近.在小血管(Bv炯围.神经纤维 膨虚血管局神经丛×400 阍】,8为AChE组织化学祛,圈9,lO为银染色法) 参考文献 【】】李柏青胸腺——神经内分泌网络的研究国外医学免疫学舟册.1989.12(I):25 f2】MagniF.BruschiF,KastiMTheafferentinnervationofthethymusgMndintherat.BrainRes,1 987.424(2):379 【FelteP.DL.FeBct~SY,CadsonSL,etatNor~dtgnetgicandpep~dergicinntrvan0noflymp hoidfisme.J1mmuno1 l985.135(2):755s 【41FataniJA.QayyumMA,MehtaL,eta1.Parasympatheticinnervationofthethymus:Ahi stochemicaland- immunocytochemica[study.JAnat.1986,147:l15 5】HedreenJC.BaconSJ,PriceDL.Amodifiedhistochemicaltechniquetovisualize axons.JHistOehemCytocheml985,33(2):l34 f6】 LinderJE.Asimpleandreliablemethodrthesilverimpergnationofnervesinparaffinsectionsofsoftand mineralizedtissu'esJAnat.1978.127(3):543 『71BuIiochK.PomerantzWAutonomicne1%'OUSsysteminnervafionofthymic— rel~ttedtymphoidtissueinwild—typeand nudemiceJCompNeurol,l984,228(]):57 f8】Et',ge】 wK.TrotterJLMcfarlinDE,etatThymicepithelialodlcontainsaeetylcholinereceptorLancet一 】977【(8025):13【0 f91Reymot',dF.MorelE.BachJEEvidencef0rthprese力 ceofimmunoreactiveaoetyleholinereceptoronhumanthymus oe】tsJNeuroimmuno1.1984,6(1):3l 4期_E新亭等.大鼠胸腺的神经分布——银染色和乙酰胆碱酯酶组织化学的研 究?409 【10】 BockmanDE,KirbyML.NeuralcrestinteractionsinthedevelopmentoftheimmunesystemJlmmuno1. 】985135f2766s 【1】】 StromTB.LundinAP,CarpenterCBTkroleofcyclicnueleotidesinlymphocyteactivationandfunctionProgClin Immuno].】977.3f】:t】5 [】2】苏吕张玉生疑棱在中脑导水管周围袭质(PAG)调节细胞免疫机能中的作用 免疫学杂志,I992.8t】):】8 __3】SmithEM,Harbour— McmenaminD.BIalockJELymphocyteproductionofendorpbinsandendorphin-mediated immunoregulatoryactivityJlmmuno1.】985.t35(2):77% [】4】 HammarJAKonstitutionsanatomiscbeStudien0berdieNeuf0tislerungdesMenschenembryoszMIkroskAnat Forsch,】935.38(2):253 【】5】 HeineH,F6rsterFJ.Relationshipsbetweenmastcellsandpretermina]ne1%'efiberszMikroskAnatForseh. 】975.89f5):934 _]61Wiesner-MenzelL,SchulzB,VakilzadehF.etatElectronmicroscopicalevidencefofadlrec【contactbetweennerve flbresandmastcellsActaDermatovenero1(Stockholm).t98I,6t(3):465 【】7】 WilliamsJM,FeltenDLSympathedcinnervationofmurinethymilsandspleen:Acomparativehistofluoresoence studyAnatRec,】98I.t99f4:53I 【】8】 FantozziR,MasiniEBlandinaP,etatReLeaseofhistaminefromratmastcellsbyacety]cho[ineNatule, 】978.273f5662:473 [】9】 KiernanJADegranulationofmastcellsfollowingantidromicstimulationofcutaneousnervesJAnat, 】97】.t1_f2l:349 INNERVAT10NINTHERATTHYMUS——AN INVESTIGAT10NBYSILVERSTAINAND ACETYLCH0LINESTERASEHIST0CHEMICAL METH0D WangXin-ting,XuYi-ming (DepartmentHistolog,.. andEmbrvotog.XuzhouMedicalCollegeXuzhou) Theinnervationinthethymuswasobservedbysilverstainandacetylcholinesterase (AChE)histochemicaImethod.Itwasshownbysilverstainthatnervefibersconstituteda complexnetworkinthethymicmedulla.InthecortexandmedullatherewereAChE-con. tainingnervefibers.whichterminatednearorencircledthethymocytes.AChE—containing nervefiberscontactedwithmastcellsSomemastcellshadAChB_containingsubstance.This studysuggeststhatthecortexandmedullaofthymusareinnervatedbyparasympathetic chofinergicnervefibers,whichmayregulatethethymocytesandmastcells. KEYw0RDSInnervation;Thymus;Silversta-n:Acetylchofinesterase(ACHE);Hist~aemistry; Rat