山慈姑体外抑菌活性的初步研究

山慈姑体外抑菌活性的初步研究 山慈姑体外抑菌活性的初步研究 作者:郭东贵 王寒 朱晓鹤 周英【摘要】 目的探讨山慈姑的体外抑菌活性。方法将山慈姑提取物经大孔树脂(D-101)分离得到4个组分A，B，C和D，用倍比稀释法测定其抑菌活性。 结果金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)对组分D有很强的敏感性，MIC?.5 mg/ml，对组分B有中等强度的敏感性，MIC为.5,25 mg/ml;白色念珠菌(Candida albicans，ATCC-10231)对组分B和组分D有中等强度的敏感性，MIC为.5,25 mg/ml，大肠杆菌(Escherichia coli)对各组分的敏感性都较低，MIC,50 mg/ml。结论山慈姑提取物B和D对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌具有较强的抑菌效果。 【关键词】 山慈姑 体外抑菌 倍比稀释法 最低抑菌浓度山慈姑为兰科植物杜鹃兰Cremastra appendiculata(D.Don)Makino，独蒜兰Pleione bulbocodioides(Franch.)Rolfe或云南独蒜兰Pleione yun-nanensis Rolfe的干燥假鳞茎，前者习称“毛慈姑”，后二者习称“冰球子”,1, ，主产于贵州、四川、云南等长江以南各省区。作为传统的中药材，山慈姑始载于唐《本草拾遗》，具有清热解毒、消肿散结的功效。本文旨在探讨山慈姑的体外抑菌作用，为进一步开发利用山慈姑奠定基础。 1 材料与仪器1 材料 山慈姑由贵州信邦中药发展有限公司GAP种植基地提供。大孔树脂(D-101，天津化学试剂公司)。2 试剂 氯仿(AR，四川鸿鹤精细化工有限公司)，醋酸乙酯(AR，四川鸿鹤精细化工有限责任公司)，95,乙醇(AR，重庆川江化学试剂厂)，蒸馏水(自制)，无菌水(自制)等。3 菌种金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia coli)由中国微生物菌种保藏中心提供，白色念珠菌(Candida albicans)由广东省微生物研究所微生物菌种保藏中心提供。4 培养基 营养肉汤固体培养基:蛋白胨 10 g，牛肉膏 3 g，氯化钠 5 g，琼脂 15 g，定容至1 000 ml，pH值调至7.0;沙氏固体培养基:葡萄糖20 g，蛋白胨10 g，酵母膏5 g，琼脂15 g，定容至1 000 ml， pH调节5.0。液体培养基组成除了不加琼脂外，与相应的固体培养基相同。5 仪器 高低温恒温培养箱(上海一恒科技有限公司)，旋转蒸 发仪(BUCHIR-200)，SHZ-D(III)循环水式真空泵(河南省巩义市予华仪器有限公司)，电子天平(OHAUS)，净化工作台(上海市纯昱科学仪器有限公司)，真空冷冻干燥机(LABCONCO)，超低温冰箱(海尔)，双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司 TU-1901)。 2 方法 2.1 样品的制备 取粉碎后的山慈姑100 g，用70%乙醇浸提3次，72 h/次，合并提取液，减压浓缩至适量，依次用氯仿、醋酸乙酯萃取后，取水层减压浓缩，浓缩液用95%乙醇溶解，过滤，滤渣以蒸馏水、25%乙醇、50%乙醇、75%乙醇为流动相，D-101为固定相得到四组分，分别减压浓缩、冷冻干燥后得组分A(水洗脱物)，B(25%乙醇洗脱物)，C(50%乙醇洗脱物)和D(75%乙醇洗脱物)。 2.2 菌种培养 金黄色葡萄球菌、大肠杆菌用营养肉汤培养基(组成成分见上)活化培养，白色念珠菌采用沙氏培养基(组成成分见上)活化培养，分别将各菌种浓度调至OD600?1,2,，备用。