新生隐球菌新生隐球菌
1检验目的:从病损中分离隐球菌。
2标本来源:脑脊液、痰、尿、脓液、活体组织及尸检标本等。 3标本收集和制备:
脑脊液:?常规腰椎穿刺,抽取3~5ml脑脊液。
?脑脊液离心,2500r/min,15min。
?以无菌吸管吸取离心沉淀1ml。
?直接检查取脑脊液离心沉淀物做印度墨水涂片,发现隐球
菌即可诊断为隐球菌性脑脊液。
痰液:标本取晨痰,起床后刷牙,并用无菌蒸馏水漱口数次,包括仰头深刷喉咙,也可在饭后3~4h刷牙漱口后取痰。取痰时应用力咳嗽,咳出肺部深处痰,吐入广口有盖的无菌玻璃瓶中,盖紧,吐痰时...
新生隐球菌
1检验目的:从病损中分离隐球菌。
2标本来源:脑脊液、痰、尿、脓液、活体组织及尸检标本等。 3标本收集和制备:
脑脊液:?常规腰椎穿刺,抽取3~5ml脑脊液。
?脑脊液离心,2500r/min,15min。
?以无菌吸管吸取离心沉淀1ml。
?直接检查取脑脊液离心沉淀物做印度墨水涂片,发现隐球
菌即可诊断为隐球菌性脑脊液。
痰液:标本取晨痰,起床后刷牙,并用无菌蒸馏水漱口数次,包括仰头深刷喉咙,也可在饭后3~4h刷牙漱口后取痰。取痰时应用力咳嗽,咳出肺部深处痰,吐入广口有盖的无菌玻璃瓶中,盖紧,吐痰时尽量不要有唾液,痰量宜3~5ml,立即送检。
尿液:?标本应取晨尿。
?男性取标本前应先彻底清洗双手,并用肥皂清洗龟头盒包皮
数次,再用无菌蒸馏水冲洗数次。开始排尿应接中断尿,完
后立即送检。
?女性则先清洗双手,用肥皂、纱布垫清洗外阴数次,应自前
向后,再用无菌整流说冲洗数次,然后开始排尿,当排尿至
一半是,另一手持广口无菌玻璃瓶收集尿液。
?尿液标本应立即受检,先离心,2500r/min,10min。然后用无
菌吸管移去上清液,余液接种于沙氏琼脂培养基。37度培
养4周
脓液:取标本时损害周围应先用70%酒精消毒,对溃破的皮损可刮取脓液,若窦道和瘘道则应刮取窦道和瘘道壁,尽量从较深部位获取标本,应包括部分管壁周围组织,未溃破的脓肿最好使用无菌注射器穿刺抽吸。
组织:组织标本包括尸检和活检
。标本可来源于皮肤、淋巴结、息肉、溃疡、伤口或其他损害,也可以自于全身任何组织器官。 4检测步骤:
(1)直接镜检:取脑脊液离心沉淀物一滴加一小滴印度墨水混合均匀,盖上盖玻片,置镜下检查。 (2)培养检查:取脑脊液、痰、尿、脓液、活体组织及尸检标本加入沙氏培养基内(培养基内可加抗生素,但不能加放线菌酮。放线菌酮对新生隐球菌有抑制作用)。25?-37?培养3-12天。 5.结果判断:
直接镜检:墨水涂片可见典型隐球菌形态。一般新生隐球菌呈圆形或椭圆形的双层厚壁孢子,外有一层宽阔荚膜,边缘清楚完整,菌体内可见单个出芽。若脑脊液直接制片未发现菌体,可离心沉淀后重检查。菌体计数:对中枢神经系统隐球菌病患者,脑脊液菌体计数是判断预后及疗效的重要指标。用血细胞计数板计数,在低倍镜下观察,按白细胞计数法计数。
培养检查:
?在沙氏培养基室温及37?培养2~3天即可生长;少数菌10天后生
长。
?室温下,新生隐球菌在咖啡酸琼脂培养基上3天内会产生棕色色素,具有鉴别意义;
?新生隐球菌可产生尿素酶,使尿素琼脂培养基内酚红变色,可初步判断是否为隐球菌;
?在BHIA培养基上37?反复培养可使荚膜逐渐增厚。 6.临床意义:直接镜检阳性说明有隐球菌感染,但阴性不能除外诊断。
培养的意义:从临床标本中分离新生隐球菌孢子菌,以确定是否
有真菌感染。
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