莱克多巴胺检测方法

莱克多巴胺方法 化学名称:1-(4-羟基苯基)-2[1-甲基-3-(4-羟基苯基)-丙氨基]-乙醇盐酸盐 理化性质:可溶于水,微溶于丙酮,可溶于乙醇;PH值:6,7,呈中性,熔点:159.8?;质量标准:最低含量99%(高压液相法)... 莱克多巴胺检测方法 1(分析目标化合物 莱克多巴胺 2、仪器设备 高效液相色谱-质谱仪(LC-MS)。 3、试剂 除下列试剂外，使用附录2所列试剂。 莱克多巴胺:含莱克多巴胺99,以上，熔点为163.9?,164.6?。 4(试验溶液的制备 1)肌肉、肝脏、肾脏和其它可食用部分 肌肉:尽可能除去脂肪层，搅碎混合均匀后，称取其5.00g。 肝脏、肾脏和其它可食用部分:搅碎混合均匀后，称取其5.00g。加入20mL乙酸乙酯和1mL4mol,L碳酸钾溶液，均质后，以每分钟3000转离心分离10分钟，收集乙酸乙酯层。离心管内残留物中加入20mL乙酸乙酯，振荡5分钟后，按上述同样条件离心分离，合并所得的乙酸乙酯层，40?以下浓缩，除去乙酸乙酯。 残留物中加入30mL乙腈溶解，移入分液漏斗中。加入30mL乙腈饱和正己烷，振荡，弃去正己烷层，重复操作2次。乙腈层在40?以下浓缩，除去乙腈。残留物中加入1.0mL甲醇溶解，此为试验溶液。 2)脂肪 尽可能除去肌肉层，搅碎混合均匀后，称取其5.00g。加入30mL乙腈和30mL乙腈饱和正己烷，均质后，以每分钟3000转离心分离10分钟，乙腈层移入分液漏斗中。离心管内的正己烷层和残留物中加入30mL乙腈，振荡5分钟，按上述同样条件离心分离。合并所得的乙腈层于前面的分液漏斗中，加入30mL乙腈饱和正己烷。激烈振荡5分钟后，静置，收集乙腈层， 40?以下浓缩，除去乙腈。残留物中加入1.0mL甲醇溶解，此为试验溶液。 5(标准曲线的制作 将盐酸莱克多巴胺标准品配制成0.025,0.5mg(以莱克多巴胺计)/L的甲醇溶液数点，分别注入GC-MS中，用峰高法或面积法绘制成标准曲线。 6(定量试验 注入试验溶液于GC-MS中，根据5的标准曲线求出莱克多巴胺的含量。 7(测定条件 LC-MS柱:十八烷基甲硅烷基化硅胶(粒径2,5μm)，内径2.0,6.0mm、100,250 mm的不锈钢管。 柱温:40?。 流动相:乙腈:0.05%三氟乙酸(1:4)混合溶液。 主离子( m/z): ESI+ 302 保持时间标准: 4 , 6 分钟 8(定量界 0.01 mg/kg 9(注意事项 1) 检测方法概述 本方法用乙酸乙酯或乙腈从样品提取中莱克多巴胺，用乙腈,正己烷分配脱脂后，LC/MS测定和确证。 2) 注意点 ?莱克多巴胺存在4 种光学异构体。由于用柱子分离光学异构体，确认有复数峰时，应以各峰高或峰面积的和计算。 ?采用主离子的仪器设备，因最佳离子化方法、生成的离子有不同，所以要研究仪器的最佳条件。对于主离子之外的确证离子，ESI+为284( m/z)。