硫酸软骨素滴眼液抑菌剂选择研究(可编辑)

硫酸软骨素滴眼液抑菌剂选择研究(可编辑) 硫酸软骨素滴眼液抑菌剂选择研究 分类号: 单位代码 密 级: 学 号: ◎厶茧办署 硕士学位论文 论文题目:硫酸软骨素滴眼液抑菌剂的选择研究 作 专 导 合作导师 年月日原创性声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独 立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论 文不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文 的研 究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本 声明 的法律责任由本人承担。 日 期:这丛 论文作者签名:彝丝左 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学 校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允 许论 文被查阅和借阅;本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或 部分 内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复制 手段 ‘ 保存论文和汇编本学位论文。 保密论文在解密后应遵守此规定 期: 论文作者签名:猛丝盔导师签名:.鸳么日山东大学硕士学位论文 目 录 摘要 ............... ..... 符号说明? 第一章前言??。 ......硫酸软骨素 ..理化性质 ..药理作用 ...降脂、抗血栓、抗动辣骺样硬化作用? 『.,.巍关秒炎绣用『..疣镶洫黝罗 ...抗氧化、清除自由基和延缓衰老作用? ...巍黼尹彩应用? ...藐擞蓬崩应用『.,..膈稃乒脱砌罗..硫酸软骨素的制备? ..硫酸软骨素的临床应用??. ..硫酸软骨素滴眼液介绍 ..硫酸软骨素的市场?。 .眼用制剂抑菌剂 『..磁伤馐历彩循勃移? ,.眼甬翩韵中影响抑菌效果的作甬因素~? ...『茄菌辔 .屁蹴屠.,彳 ... 蘑. ...增删??, 『...多矽应多方‖黻? ...灭剪艺., 『...擞 .抑菌效力试验介绍??.. ..进行抑菌效力试验的产品分类?山东大学硕士学位论文 ..嫠移缴笙物功迸帮 ..缓笙物岌霭呦劾多励咨??.船 ..发两嘧蝴丢孝匆?一 『..移存编彩增埸毛湿度. ..段萨蹦觑存及兮移粝管? ..卉谣易瓤移乒移方法? .研究目的与内容 .砑芄臼矽? 『..劢蝴廖??.刀 第二章处方筛选及抑菌试验结果 .材料与仪器??。 .抑菌试验步骤?。 .处方筛选? .试验结果 .包装容器对抑菌剂的影响研究 .影响因素试验? 第三章质量研究 .硫酸软骨素滴眼液质量? .中和剂验证结果? .抑菌剂含量测定? .标准修订 第四章稳定性考察研究?。??. .稳定性试验长期试验和加速试验 .结果分析? 第五章全文结论 ?。。 本课题的创新点 致谢 攻读硕士学位期间发表的论文 山东大学硕十学位论文 硫酸软骨素滴眼液抑菌剂的选择研究 研究生:张世磊 导师:贺艳丽研究员 摘要 眼睛是人体的重要感觉器官,是人类与外界交流的重要工具。眼用制剂作为 直接用于眼部发挥治疗作用的无菌制剂,它的安全性、质量可控性一直为人们所 关注。美国要求多剂量包装的眼用制剂要能够防止指定微生物的污染。我公 司的硫酸软骨素滴眼液现有处方以.%的羟苯乙酯为抑菌剂,其用量以经验常 规用量为确定依据,未进行相关系统的抑菌剂效力验证试验。 本课题研究的目的是根据美国药典第版抑菌效力试验的有关规 定,通过抑菌效力试验、包装材料相容性试验、中和剂验证实验 以及样品稳定性 考察试验等,以抑菌效力及其他各项质量指标为依据,筛选出合适的抑菌剂种类 及其用量,在满足制剂产品抑菌效力需求的前提下,尽可能减少对眼表的刺激和 毒性,保证产品质量的可靠性。 通过本课题,主要进行了如下研究: 制定了合理的抑菌效力试验的步骤,包括接种微生物的制备、培养温度、 菌液的制备方法及接种液体积的选择、取样点及合格标准、中和剂的验证方法等, 确保方法的科学性、合理性和可操作性; 因现处方抑菌效力试验不符合的有关规定,对处方的渗透压调节剂、 抑菌剂进行了筛选,拟定以硼酸为渗透压调节剂、羟苯酯类为抑菌剂; 考查包装材质对抑菌剂的影响; 开发和优化了羟苯酯类抑菌剂的含量测定方法,并进行了方法学验证; 对拟定处方进行影响因素、加速和长期稳定性考察; 修订质量标准。 本课题制定的抑菌效力试验方法,符合标准,筛选的抑菌剂处方 性质稳定, 达到了课题设计的目的。对今后眼用制剂的抑菌剂效力试验和抑 菌剂筛选试验具 有一定的实用价值。山东大学硕士学位论文 关键词:抑菌效力;抑菌剂;硫酸软骨素滴眼液. 山东大学硕十学位论文 ? : :. ,.,弱,. ..% . , . , , .’,. 雒:,, ,, , ,. ’. . . 山东大学硕士学位论文 .., 圮 .. 廿 , . ? . : ;; . 山东大学硕十学位论文 山东大学硕士学位论文 第一章前言 .硫酸软骨素 ..理化性质 硫酸软骨素 ,是广泛存在动物和人软骨组织中的一 种酸性黏多糖,商品硫酸软骨素是从猪、牛、鱼和鸡等软骨中提 取的,不同品种、 ~ 年龄的动物软骨中硫酸软骨素的含量不同,坼在 之间。 硫酸软骨素是由口葡萄糖醛酸与肛乙酰半乳糖胺形成的共聚物, 有、、 、、、、等多种异构体,硫酸软骨素、、都是由.葡萄糖醛酸和 肛乙酰坷.氨基半乳糖组成,只是硫酸基位置不同。药用制剂中主 要含有硫酸软 骨素和硫酸软骨素两种异构体。 硫酸软骨素为白色或类白色粉末;无臭;有引湿性.水溶液具有黏 稠性,加 热不凝结。在水中易溶,在乙醇、冰醋酸、丙酮中不溶。其盐类对热比较稳定, 受热到不被破坏,在酸性溶液中容易水解成单糖或较小的多糖体。 ..药理作用 硫酸软骨素是结缔组织的重要组成部分,具有多种药理和生理活性。 ...降脂、抗血栓、抗动脉粥样硬化作用 硫酸软骨素可以清除心脏周围血管的胆固醇,清除血液中的脂质和脂蛋白, 预防动脉粥样硬化,同时增加脂质和脂肪酸在细胞内的转换率。在氯化亚铁诱导 动脉受伤的鼠模型中发现,硫酸软骨素具有抗血栓形成的活性【。硫酸软骨素可 以有效防治冠心病。在试验性动脉硬化模型中具有抗动脉粥样硬化及抗致粥样斑 块形成作用;增加动脉粥样硬化的冠状动脉分枝或侧支循环,并可以加速试验性 冠状动脉硬化或栓塞所引起的心肌坏死或变性的愈合、再生和修复。孙丰梅等 】采用羊的软骨作为添加物,选择体重、年龄相近的只系雄性小 白鼠作 为试验动物,高脂饲料中添加硫酸软骨素,随着添加量的增加,能够降低小鼠血 液中的总胆固醇、低密度脂蛋白、甘油三酯、并有升高高密 度脂蛋白的趋势。高同型半胱氨酸血症 是动脉硬化的一个独立危险因子。宋光熠等】研究发现硫酸软骨素具有抑制 所致的平滑肌增生作用,作用机制或许与增加超氧化物歧化酶活性,降 山东大学硕士学位论文 低体内丙二醛含量的抗过氧化作用有关。给予老鼠高脂肪饮食,发现 硫酸软骨素抑制胰脂肪酶活性和棕榈酸进入空肠绒毛膜囊内,使老鼠体重和子宫 周边脂肪组织减少【】。硫酸软骨素可通过降低血清胆固醇来治疗心绞痛等疾病 【】 ? ...抗关节炎作用 骨关节炎,是骨科临床常见疾病,膝关节是身体重要的负 重关节,也是最常累及的关节之一。膝关节容易导致患者严重的功能障碍。 硫酸软骨素具有明显的亲软骨性,可以优先进入软骨组织从而保护软骨。同时, 硫酸软骨素通过刺激软骨细胞合成 、和胶原进而促进新的软骨组织的形 成【。欧洲风湿病防治联合会年发表的了对的治疗建议,推荐硫酸软 骨素是一种治疗膝的有效药物【。口服硫酸软骨素用于治疗关节疾病,可缓 解症状,减少非甾体抗炎药的用量【引。等【研究不同药物对关节炎的 疗效,对例患者进行随机双盲试验,结果发现服用硫酸软骨素出现新侵蚀 性关节炎的患者明显减少,有效地缓解了关节疼痛。在观察硫酸软骨素治 疗时发现,每次口服 ,每日次,连续服用个月以后,%的患 者症状明显改善,服用安慰剂仅有%患者改善【们。硫酸软骨素可以提高猪软 骨细胞培养液中型胶原的表达与软骨的再生【?】。研究发现,硫酸软 骨素口服后吸收良好,浓集于软骨基质,无毒性,无致畸性【。等【】采用 安慰剂和塞来考昔对照进行的氨基葡萄糖和硫酸软骨素复合治疗膝试验,研 究发现后者对中重度膝痛亚组患者有效,不良反应少。在同非甾体抗炎药 对比研究中,硫酸软骨素起效温和,作用持久,长期服用副作用小【】。 等【”】汇总项试验结果表明,服用硫酸软骨素个月的效果要好于安慰 剂,与抗炎镇痛类药物的疗效相近。剂量研究表示,每同口服 与 , 疗效相差无几。每年个疗程,每个疗程个月与全年连续服用效果相同。 ...抗凝血作用 硫酸软骨素的抗凝血作用较为缓和,每 的硫酸软骨素相当于. 肝素的抗凝活性。其抗凝活性并不依赖抗凝血酶来发挥作用,而是通过纤维蛋 白原系统来发挥抗凝血活性。从海参的体壁中提取的岩藻糖化硫酸软骨素注入老 鼠血管,产生强烈的抗凝血活性【】。 山东大学硕十学位论文 ...抗氧化、清除自由基和延缓衰老作用 通过蛙皮缩胆囊肽诱导鼠急性胰脏炎模型,发现硫酸软骨素可以改善胰 脏细胞状况,缓解水肿,减少谷胱甘肽、过氧化物岐化酶和过氧化氢酶的消耗, 抑制脂质过氧化反应,降低嗜中性粒细胞的活化【。硫酸软骨素对酒精性脂肪肝 大鼠模型产生影响,降低和活性,降低肝脏中的丙二醛、甘油三酯及 总胆固醇含量,改善肝脏炎症和脂肪性变化,此作用与阻断线粒体氧化损伤有关 】 ...抗肿瘤中的应用 用鲨鱼骨为原料,优化提取工艺,制备较高纯度的鲨鱼软骨多糖帅, 荧光探针法证实与分子相互作用,具有量效关系,或许是抗肿瘤作 用的原因【嘲。硫酸软骨素.顺铂复合物?,可以抑制血浆和肾脏中顺 铂和蛋白质的聚积,最大限度降低进入正常肾组织的顺铂药量,减少对肾脏的损 害,硫酸软骨素可作为减少顺铂对肾脏损害的保护剂【。 ...抗粘连的应用 在兔足趾腱鞘外科手术修复过程中,运用硫酸软骨素.多羟基异丁烯酸酯膜 处理,粘连减少,愈合效果良好】。 ...眼科中的应用 组织学上将角膜由外向内分为上皮细胞层 、前弹力层 、基质层、后弹力层和内皮细胞 层 【列。角膜位于眼球最『部,直接与外界接触,受 感染和损伤的几率大,同时,角膜本身没有血管,抗体产生少,营养供应差。从 上世纪年代开始硫酸软骨素了作为渗透剂和膜稳定剂用于保存角膜。角膜中 期保存法证明,保存液中含有硫酸软骨素,对角膜内皮细胞具有较好的保护作用 【矧。 硫酸软骨素能改善深低温保存的角膜内皮细胞活性【。硫酸软骨素促进眼 部血液循环,加快新陈代谢,增加渗出液的吸收及促进炎症的消失。硫酸软骨素 还可以稳定细胞代谢的微环境,为细胞的移行提供构架,促进角膜上皮的移行, 有益于角膜创伤的愈合,使眼的瘢痕组织软化吸收。崔巍掣】采用硫酸软骨素注 射液. 与维生素注射液 结膜下注射治疗早期角膜碱烧伤例 眼,结果表明能有效促进角膜代谢,改善微循环,防止角膜溃疡与穿孔, 角膜上皮恢复时间缩短,不发生睑球粘连。 黏弹剂目『已成为眼科手术中必不可少的工具之一,在白内障手术、角膜手 山东大学硕士学位论文 术、青光眼手术、外伤手术、整形手术等具有重要的作用。硫酸软骨素与透明质 酸钠作为复合黏弹剂用于眼科显微手术。常用的眼科黏弹剂包括玻璃酸钠、 羟丙甲基纤维素 ,、硫酸软骨素、聚丙烯酰胺、胶原等。硫酸软骨素化学性质稳定,无 抗原性,可以中和眼组织、手术器械、人工晶体带的正电荷,比其他黏弹剂具有 更好的覆盖和包裹的特性【,由于是角膜中本身含有的物质,无毒副作用。 硫酸软骨素配合人工泪液用于治疗干眼症【。临床研究表明,干眼症严重的 患者单用人工泪液疗效不能持久,同时使用硫酸软骨素软膏或者采用其他效 果较好。硫酸软骨素还可与其他药物制成复方滴眼液,山东博士伦福瑞达制药有 限公司生产的复方硫酸软骨素滴眼液,由硫酸软骨素、维生素、维生素、牛 磺酸等组成,用于眼疲劳、结膜充血等症状,疗效确切,市场容量大。 ..硫酸软骨素的制备 硫酸软骨素通常采用降解法提取,降解法包括碱提取法和蛋白酶提取法两 种。碱提取法由于使用大量的氢氧化钠和盐酸,对环境影响大。酶提取法,采用 的酶是关键,根据原料不同,选用一种或多种酶。从酶解提取物中分离硫酸软骨 素有乙醇沉淀法、季铵盐化合物沉淀法、阴离子交换剂法和阳离子交换剂法。从 酶解提取物中分离硫酸软骨素时,同时会得到其他糖胺聚糖,需进行分级分离。 分级分离方法有乙醇分级分离法、丙酮分级分离法、阴离子交换剂分级分离法和 凝胶层析法。 ..硫酸软骨素的临床应用 硫酸软骨素可以用于治疗神经痛、神经性偏头痛、关节炎、肩关节痛和腹腔 手术后疼痛等,用于角膜炎、角膜溃疡及损伤,预防和治疗链霉素引起的听觉障 碍及各种噪声引起的听力下降、耳鸣等症状。在美国硫酸软骨素作为膳食补充剂 使用,在欧洲许多国家,作为处方或非处方药物使用。在澳大利亚作为营养保健 品。美国药典.处方集.收载硫酸软骨素原料及硫酸软骨素与氨基葡萄 糖的复合片剂。长期应用可防止冠心病、心绞痛、心肌缺血等疾病,无明显的毒 副作用。作为重要的添加剂用于保健品、食品、饲料、化妆品等。 ..硫酸软骨素滴眼液介绍 用于角膜炎、角膜溃疡、角膜损伤等的治疗,具有促进角膜上皮损伤,缓解山东大学硕士学位论文 眼睛干燥等作用。使用硫酸软骨素滴眼液治疗翼状胬肉术后角膜上皮愈合不良的 患者,有效缓解眼部刺激症状,促进角膜上皮修复【引。 ..硫酸软骨素的市场 硫酸软骨素于年由布雷成功分离出来,年戴维森、迈耶确定其化 学结构。年我国由重庆市西南制药厂率先投产. 硫酸软骨素由提取法生产,受原料来源所限,多年来我国硫酸软骨素生产企 业产量和规模都比较小,一般年生产能力仅为数百公斤。上世纪年代中期, 我国原料药产量仅有余公斤。自上世纪年代后期起,硫酸软骨素的新功 能、新用途不断开发,应用范围也逐步从医药领域扩展到了其他领域,国际市场 需求量日益增加。特别是进入世纪,国内外对硫酸软骨素的需求量大增,其 市场价格也不断上升。 随着市场需求的增加,我国硫酸软骨素产量也逐年大幅增长。不少企业上马 新的生产线进行扩产,硫酸软骨素成为炙手可热的投资品种。年,我国硫 酸软骨素产量达到吨,比上年增长了%。随着国内外保健的需求,硫酸软 骨素销量持续增长,世纪初,我国硫酸软骨素产量为几十吨,目『随着市场 需求的增加,产量已达数干吨,大部分用于出口,硫酸软骨素目前已成为我国生 化药物第三大出口品种,排在氨基酸和肝素钠之后。年硫酸软骨素出口总 额.亿美元,总出口量吨,出口原料药金额排名第,美国是第一大消 费国。 目前,我国共有多个企业拥有硫酸软骨素原料的生产文号,个制剂 生产文号,包括个片剂,个胶囊剂,个眼用制剂,个注射剂。在医药 市场上,硫酸软骨素以片剂和针剂为主。 在眼科药物领域,硫酸软骨素具有保护眼角膜、帮助眼角膜损伤恢复等功能。 近年来,随着电视、电脑的大量普及,及互联网的迅速发展,学生用眼强度不断 增加,眼疲劳患者日益增多,眼用制剂市场销售良好,山东博士伦福瑞达制药有 限公司生产的复方硫酸软骨素滴眼液及硫酸软骨素滴眼液每年销售额在亿元 以上。 我国企业以前大多以生产硫酸软骨素原料药粗品为主,目前,随着企业实力 的增加,不少企业正在加大研发投入,提高科研水平,生产也从第一代的硫酸软 山东大学硕士学位论文 骨素钠,到第二代的硫酸软骨素钙,甚至第三代的低分子硫酸软骨素钙等高附加 值的产品。部分企业采用最新的生物工程技术开发硫酸软骨素系列产品。 .眼用制剂抑菌剂 ..眼用制剂抑菌剂 抑菌剂是指防止或抑制病原性微生物生长发育的化学物质。根据化学结构和 性质通常分为以下几类:季胺盐类,如苯扎溴铵、苯扎氯铵等阳离子表面活性剂; 有机汞类,如硫柳汞、醋酸苯汞;醇类,如三氯叔丁醇、苯甲醇等;对羟基苯甲 酸酯类,羟苯乙酯、羟苯甲酯等;酸及其盐类,山梨酸等;脒类,醋酸氯己定等。 不同种类的抑菌剂作用机制不同,阳离子表面活性剂主要作用于细菌的细胞膜或 竞争其辅酶,降低表面张力作用,增加菌体胞浆膜的通透性,使细胞破裂、溶解; 醇类抑菌剂主要使病原微生物蛋白质变性、沉淀或凝固;酸类主要与病原微生物 酶系统结合,影响或阻断其新陈代谢的过程。 理想的抑菌剂应具有以下特点: 具有广谱的抑菌活性,在一定的范围内具有有效抑菌活性; 起效迅速,防止微生物适应制剂产品环境,否则污染的微生物会产生 抵抗性,将发生基因、生化等方面的变化: 自身理化性质稳定,可长期保持抑菌能力; 与制剂中的其他组分及包装材料具有良好的相容性: 不影响药物的药理毒理性质,如药物的药效、药代动力学、安全性等; 不影响产品质量,如制剂稳定性、渗透压、颜色、可见异物、黏度等; 使用浓度范围内安全无毒,无刺激性。 理想的状况是,使用一种抑菌剂即可达到以上效果,不但降低成本,又可降 低产品刺激性和潜在毒性,同时也降低了处方组分问配伍禁忌的风险。目前很难 找到同时满足以上条件的抑菌剂,因此,在具体制剂处方设计时,选择可尽可能 多地满足以上要求的抑菌剂。 目前,国内上市的眼用制剂大多为多剂量包装,制剂在生产、贮藏、运输、 使用过程中易受到微生物污染。因此,为了最大限度地减少眼用 制剂的污染概率, 一般需在组方中加入抑菌剂,预防使用过程中微生物的污染。抑菌剂在眼用制刺 的有效期内必须保证足够的效力。同时,为减少其在使用过程中的污染,英国及 欧洲药典及规定眼用制剂不启后使用时限不得过周。 山东大学硕士学位论文 然而,抑菌剂对眼表损害已逐渐引起临床医师和药物研发人员的关注。蚓 等人研究表明,苯扎氯铵浓度即使在.%以下,如果经常使用或超过 长时间的使用,可以引起角膜上皮细胞功能障碍,破坏角膜上皮的屏障。张泺【】 采用组织培养的方法研究不同种类的抑菌剂对角膜上皮细胞的毒性,.%的羟 苯乙酯毒性最低,.%硫柳汞和.%氧氰化汞次之,.%苯扎氯铵和.% 苯扎溴铵毒性最大。正确选择、合理使用抑菌剂是保证眼用制剂安全性、稳定性、 有效性的关键因素之一。 眼用制剂中,由于主药、缓冲体系各不相同,不同产品需选择不同的抑菌剂 及适当的浓度,使之产生良好的抑菌效力,并且在整个贮藏和消 费者使用过程中 保持效力,同时最大限度地降低抑菌剂对眼睛的伤害。在实际处方筛选中,可依 据的实验方法及要求,选择不同的抑菌剂系统。通过抑菌效力测定实验, 确定抑菌剂的类型及最低有效浓度。抑菌剂研究贯穿到产品处方设计、生产、包 装、稳定性考察一直到消费者使用期间。 ..眼用制剂中影响抑菌效果的作用因素 ...抗菌谱 一个理想的抑菌剂应具有广谱抗菌活性,其对革兰阳性菌、革兰阴性菌、霉 菌、酵母菌均应有良好的抗菌性。实际情况是,很少有抑菌剂同时具备这种能力, 此外,由于需要符合配方设计和产品种类规定参数的要求,在一种制剂中往往只 能应用一种抑菌剂,其抗菌谱就受到了进一步的限制。因此,必须进行详细的考 量,以确保抑菌剂的抗菌效力,具体见表.。 表.抑菌剂常用浓度的抗菌活性范围 活性最强:中等活性;弱活性:?对于假单胞菌属抑制作用弱。 山东大学硕十学位论文 ...配伍禁忌 由于每种抑菌剂都有一定的局限性,因此在处方筛选过程中避免抑菌剂与组 方成分有配伍禁忌。眼用制剂中常用的抑菌剂的配伍禁忌见表.。 表.眼用制剂抑菌剂配伍禁忌 抑菌剂 配伍禁忌 与阴离子表面活性剂、肥皂、柠檬酸盐、硝酸盐、碘化物、重金属包 括银盐、羟丙甲纤维素【】、碱金属、羊毛脂、磺胺药、硫酸锌、氧化 苯扎氯铵 锌、一些氧化剂和某些商业橡胶混合物、蛋白质不相容。会被塑料和多 种滤膜吸收,特别是疏水性或阴离子性滤膜【。 与铁盐、碱、重金属盐、非离子表面活性剂、季铵盐类和凝胶不相 苯甲酸及其盐 容,在蛋白质、甘油和高岭土的存在下降低活性。 与氧化剂、强酸、甲基纤维素不相容,非离子表面活性刺存在下活 苯甲醇 性降低,被某些橡胶包装材料吸附。 与非离子表面活性剂、碱性物质不相容;能够被聚乙烯、聚乙烯容器、 三氯叔丁醇 苯硝酸盐和三硅酸镁、皂土瞰】吸收。 与皂类、其他阴离子试剂、氯霉素、硫酸铜、荧光素钠、甲醛、硫 洗必泰氯己定 酸锌,各种树胶和海藻酸钠不相容;.%浓度易与各种盐类如硼酸盐, 盐酸盐、碳酸盐、氯化物、柠檬酸盐、磷酸盐和硫酸盐等形成不溶盐。 羟苯酯类甲基、 在阴离子、非离子表面活性剂、甲基纤维素、聚乙烯吡啶酮、明胶 乙基、丙基、丁 和蛋白质的存在下会抗菌效力会降低;与碱及铁盐不相容;某些色素能 基以及苄基及其 够吸收羟苯酯类降低其抗菌活性。 盐 遇菲离子表面活性剂和塑料时抑菌活性降低。能够与糊精、蛋白质、 山梨酸 明胶相容:与碱,氧化剂和还原剂不相容。 与强酸、强碱、强氧化剂、氯化钠溶液、碘、重金属盐包括苯汞 硫柳汞 化合物、季铵盐类、卵磷脂和巯基醋酸盐、以及蛋白质不相容:依地酸 和焦弧硫酸钠能够降低其抗国效力。会被聚乙烯包装材料吸附。 ... 值 正常泪液的为.【”,具有一定缓冲容量,眼用制剂滴入眼后被泪液稀 释,可以减轻明显的不适感。为保持眼用制剂合适的范围,一般采用缓冲溶 液配制制剂,常用的缓冲溶液有磷酸盐缓冲液和硼酸盐缓冲液。眼用制剂的 值范围一般是..,过高或过低都会对眼部产生刺激,因此,限定了部分抑 菌剂的使用范围。设计眼用制剂处方时,的变化对抑菌剂的效力影响很大, 如苯扎氯铵在 ~具有抗菌活性,其活性随的增高而增强。羟苯乙酯 ~范围 在很大的范围内发挥作用,且具有广谱抗菌活性,其水溶液在 以上 内可以热压灭菌,而不发生降解【】。苯甲醇在 以下活性最强,在 山东大学硕士学位论文 几乎没有活性。三氯叔丁醇在高于.时,活性及稳定性下降。的变化可 以使抑菌剂的离子状态发生变化,改变与微生物细胞群的相互作用,山梨酸仅在 非解离状态下具有抗菌活性【。可能不仅影响抑菌剂的活性,还可以影响抑 菌剂的稳定性【引,影响抑菌剂的油水分配系数,或者造成抑菌剂同其他药用辅料 产生相互作用。常用的抑菌剂为弱有机酸类的化合物较多,在溶液中存在离子平 衡,可决定溶液中分子型和离子型间的比例,分子型比例越高,抑菌效果越 好.眼用制剂中常用的抑菌剂的最佳范围见表.。 表.眼用制剂抑菌剂最佳范围 ...增稠剂 等体外研究表明,由活性氧 ,的 过量生成显示出的氧化应激和线粒体的损伤,是加抑菌剂的滴眼剂诱导细胞凋亡 的主要机制【。玻璃酸钠作为一种广泛存在于动物组织的高分子物质,具有良好 的黏弹性和生物相容性,显著的亲水能力和润滑作用,可有效降低眼用制剂中抑 菌剂的毒性。聚阴离子的玻璃酸钠与多带正电荷的抑茵剂发生离子吸引,从而中 和抑菌剂对角膜上皮和结膜的毒性作用。在眼用制剂中添加玻璃酸钠,同时能有 效降低眼部刺激性,增加药物在结膜囊中的停留时间,减少通过鼻泪管流入口腔 造成的不适感,提高药物疗效,降低用药次数,一定程度上也降低了抑菌剂的累 积效应。 卡波姆为丙烯酸交联聚合物,用于治疗干眼综合征。研究表明,玻璃酸钠和 卡波姆在体外试验中无毒,且具有抗氧化性。这两种物质与苯扎氯铵联用 可降低抑菌剂的毒性删。张琛等【研究抑菌剂对兔角膜上皮细胞毒性及玻璃酸 钠对其毒性的降低作用,结果表明玻璃酸钠对羟苯乙酯和山梨酸所致细胞毒性均 山东大学硕十学位论文 有减轻,该作用随抑菌剂作用时间的增加而减弱。 ...抑菌剂浓度 中国药典版规定,在筛选制剂抑菌剂用量时,应使用抑菌剂的最低有 效浓度,保证药品在使用过程中和有效期内符合卫生学的要求,最大限度地降低 抑菌剂对眼表的刺激和损害。人用药品注册技术要求国际协会在 年版、欧盟药品管理机构、及英国药典均对抑菌剂的使用做 出了具体的规定和要求。处方中确定抑菌剂的合理用量后,制定合理限度并订入 质量标准。同时,在后续的稳定性研究中,增加了抑菌剂含量的测定,同时按照 药典的要求检测抑菌剂的抑菌作用,以全面评价药品的稳定性。 研究证明,抑菌剂浓度和微生物死亡率之间存在一定的指数关系【,可以用 以下公式进行计算: ? 和表示抗菌剂的两种浓度,和表示对于活菌计数获得同样的下降 水平所需的时间,指数用来衡量浓度变化或稀释水平对于微生物死亡率的 影响,又被称作浓度指数或稀释系数。这样,任何由于抑菌剂浓度改变而引起抑 菌效力的变化,都可以通过该抑菌剂的浓度指数来得出。 研究抑菌剂对眼表细胞的损伤,常采用活体角膜上皮细胞电阻 试验和体外细胞毒性试验。等【】 研究表明,.%和.%的苯扎氯铵,.%羟苯酯类,.%三氯叔丁醇, .%醋酸氯己定,不会引起试验电阻下降。在眼用制剂中,苯扎氯铵采 用低于.%的浓度,三氯叔丁醇采用.%的浓度,比较合理。体外试验表 明,对比.%~.%的苯扎氯铵和.%~.%的三氯叔丁醇,后者对家 兔角膜上皮细胞毒性更小【州。 ...灭菌工艺 眼用制剂由于其特殊的用药部位,版中国药典二部对各类眼用制剂规 定为无菌制剂。因此,眼用制剂需要按照无菌或无菌工艺生产,终产品为无菌产 品。制定合理的灭菌工艺是确保产品质量的重要组成部分,眼用制剂常用种工 艺,采用“百级环境下用.的微孔滤膜滤器过滤,检测合格后百级环境中 灌装的无菌制备工艺,或“湿热灭菌法灭菌后,百级环境中灌装,包装得成品 的无菌制备工艺”。因此,需要根据产品处方和抑菌剂的性质确定 其制备工艺, 山东大学硕士学位论文 避免滤器等因素对处方的影响. ...温度 和许多的化学反应一样,抑菌剂的效力也会随着温度的增加而增加,往往由 于目标微生物对于温度的依赖性而变得复杂【】。在一个窄的温度范围内,如从冷 藏温度到人的体温,在有限的浓度范围内,可以用公式来阐述温度对于抑菌剂效 力的影响: 温度每变化?对于防腐效力产生的变化生 【 代表在温度?下微生物的死亡时间,。代表在温度?下微 生物的死亡时间。这表示通常情况下,在?温度差下,抑菌剂对于温度的敏 的值.而温度系数是指对于?下产生的变化同样可以进行近 感性 似的计算,的值一般为~.之间。 在表中列出了一些抑菌剂的温度系数值。从这些值中,可以看出抑 菌剂效力对于温度变化的响应,从而根据室温下完成的抑菌效率 试验数据来推断 产品的贮藏温度。温度系数值越大,温度变化对抑菌效力的影响 越大。 在特定情况下,这种试验方法可以用于推测那些使用期推荐冷藏 贮存的产品,温 度变化对其抑菌效果的影响,具体见表.。 表.温度对于抑菌效力的影响 抑菌剂 温度系数。 苯扎氯铵 苄基乙醇 .溴.硝基丙二醇 洗必泰 氯化甲酚 甲酚 乙醇 苯酚 山梨酸 一一曲~: : 够躬 抑菌效力试验介绍 抑菌效力试验作为眼用制剂处方设计工作的一部分,是在筛选药 物处方时评 山东大学硕士学位论文 判加入抑菌剂后的效力试验。中国药典年版未制定相关的试验指导原则, 已经实行的年版中国药典二部附录中,收载了抑菌剂效力检查法指导原则。 年版最早将抑菌剂抑菌效力测定作为产品的必检项目;欧洲药典 收载了抑菌剂抑菌效力测定的方法,在年前后欧洲各国也都依据该 方法进行了统一【。目前,各国药典已倾向于将试验的标准进行统一,包括样品 培养时间和温度,取样的量及验证程序等。 、对抑菌效力试验方法和原理的规定基本是一致的,但在 的取 样周期内,取样点和判断标准不同。检测微生物均选择制剂生产、贮藏及使用过 程中容易受到污染的微生物,包括革兰阳性菌、革兰阴性菌、酵母菌和霉菌的典 型代表。本课题选择作为试验参考标准。 .进行抑菌效力试验的产品分类 表.进行抑茵效力试验的产品分类 类别 产品描述 注射剂、其他非肠道制剂,包括乳剂、耳用制剂、无菌鼻用制剂及眼用制剂 局部给药制荆、非无菌鼻用制剂及用于黏膜的乳剂 口服固体制剂非抗酸制荆 非固体抗酸制剂 .接种微生物的选择 接种微生物需要选择在生产、贮藏、使用过程中可能产生污染的微生物的代 表,采用的菌种代表为革兰阳性菌、革兰阴性菌对多种抑菌剂具有耐药性 的铜绿假单胞菌、酵母菌和霉菌。 ..微生物接种物的制备 试验用菌株自购买后宜低温冷冻保存,对微生物进行有规律的传代,传代一 般不超过代,通常一个月一代。当试验需要时,细菌在试验前 传代,真菌, 如黑曲霉需要试验『. 传代,确保孢子的产生。具体接种物培养条件见表.。 表.接种物培养条件 山东大学硕士学位论文 ..接种菌液的体积 一般不超过供试品体积的.%%,具体接种体积见表.。 表.接种菌液量 规定,抑菌效力试验尽可能在原始包装中进行【引,产品从初始包 装转 移的过程中,容易导致微生物的污染和对抑菌剂效力的影响。但多数产品包装不 能顺利进行试验,需要将一定量的样品转移到无菌具塞容器中,同时需要验证该 容器,对抑菌剂不会吸附及产生其他影响。 ..种样品的培养温度 多数微生物【】都能在很宽的温度范围内生长,但最佳生长范围相对较窄,通 常细菌?,真菌 ,及通常采用?作为所有接 种微生物的生长温度,该温度与制剂实际贮藏和使用的温度接近。 ..取样时间点及合格标准 表. 抑菌效力的验收标准 注: 。相对于前一个测定值.菌浓度增加的对数值不得超过..指与初始菌落数对比 指与的菌落数进行对比. / 无规定. 相对,的要求更高些,具体见下表。 山东大学硕士学位论文 注: 无增加 无蔼落复活? 标准为推荐标准,标准为产品不能满足标准时采用的标准,但必须在合理因素的条件下。才能采用 标准. 验收标准:采用对数下降值来判断,即计算初始接种量和取样时间点剩余菌量的 标准对数值,计算两者之间的差值,判定产品的抑菌效力是否合格。对数下降值 为,表示接种样品中%的微生物被杀灭,对数下降值为,表示接种样品中 .%的微生物被杀灭。 ..抑菌剂的中和方法 在取样点检测样品,首先要保证能消除样品中抑菌系统剩下的抑菌效力,再 采用平皿菌落计数法或薄膜过滤法进行计数,以保证准确测定抑菌剂的抑菌效 力。介绍了以下三种常用的方法来中和抑菌剂。 ...化学中和剂 消除抑菌剂剩余抑菌效力的最佳方法。中和剂可以加至稀释剂或培养基中, 消除抑菌效力。表.是常用抑菌剂的中和剂【铷。 表.常用抑菌剂的中和剂 山东大学硕士学位论文 有些抗生素可以通过添加酶进行中和消除抑菌剂效力,如头孢菌素,通过添 加内酰胺酶进行中和,需要注意添加的量,中和的时间和温度。 ...直接稀释法 某些抑菌剂如醇类、有机酸等具有很高的浓度系数,此类抑菌剂可用直 接稀释法消除其剩余的抑菌效力。浓度系数与抑菌剂抑菌效力的关系公式为: “ 和表示抑菌剂的两种浓度,和表示获得同样杀菌率所需的时间, 由此公式可知,对于较高的抑菌剂,用稀释法可以指数化地降低其抑菌性,消 除其对抑菌效力测定的影响。 ...薄膜过滤法 如果产品的抑菌活性成分无法通过以上两种方法进行消除,可以采用薄膜过 滤法。将样品通过. 孔径的滤膜过滤,抑菌剂进入滤液,微生物残留在滤 膜上,将滤膜进行培养,计数。为保证有效地清除所有的抑菌剂,通常采用无菌 生理盐水或无菌.%蛋白胨水溶液【删冲洗滤膜,冲洗液中也可加 入化学中和剂, 冲洗量一般不超过 。通常无合适的中和剂时,采用此方法进行检测, 如某些抗生素制剂。 ...中和方法的验证 中和方法的验证包括中和剂的效力和毒性。验证的结果能够证明中和剂能有 效地抑制样品的抑菌剂系统的效力中和剂的效力,同时对接种微生物的生长 没有影响中和剂毒性。通过比较不同试验组恢复生长的结果,确定中和剂是 否符合上述标准。明确规定,对比以下个试验组的生长结果验证中和方法。 第一组是样品组,该组产品按规定中和方法处理,采用平皿菌落计数法或薄膜过 滤法进行计数,判定试验结果是否符合规定。第二组是蛋白胨水或磷酸盐溶液对 照组,用蛋白胨水代替样品,同法进行中和处理,作为测试液。接种及恢复生长 的操作同第一组:第三组是验证组,直接取未实施中和的同浓度的菌液接种山东大学硕士学位论文 于固体培养基培养,稀释倍数与前两组相同。如果样品组不小于 蛋白胨对照组的 %,且菌落形态大小与蛋白胨对照组一致,证明中和剂具有足够的中和效力; 如果蛋白胨对照组与验证组菌恢复生长结果相似,不小于验证组的%,则证明 中和剂的毒性、实验过程及培养条件未对微生物产生不良影响。 .研究目的与内容 ..研究目的 现有硫酸软骨素滴眼液处方中以.%的羟苯乙酯为抑菌剂,抑菌剂的用量 以经验常规用量为确定依据,并未进行相关系统的抑菌效力验证试验,对潜在污 染的微生物未进行抑菌效果验证,产品质量存在风险。 本课题研究的目的是通过抑菌效力试验、包装材料相容性试验以及样品稳定 性考察实验等,以产品抑菌效力及其他各项质量指标为依据,筛选出合适的抑菌 剂种类及其用量,在满足产品抑菌效力需求的前提下,达到对眼表刺激最小化的 目的,保证产品质量的可靠性。 ..研究内容 制定抑菌效力试验步骤; 筛选硫酸软骨素滴眼液处方; 硫酸软骨素滴眼液抑菌效力试验; 硫酸软骨素滴眼液稳定性考察。 第二章处方筛选及抑菌试验结果 .材料与仪器 ..微生物 金黄色葡萄球菌 ;大肠埃希菌 ;铜绿假单孢 杆菌 ;白色念珠菌 ;黑曲霉 。 ..材料 大豆酪蛋白胨琼脂培养基;沙氏葡萄糖琼脂培养基;/ 中和肉汤:中和肉汤;磷酸盐缓冲液:.%氯化钠溶液;含聚山梨酯 的.%氯化钠溶液;硫酸软骨素、玻璃酸钠、甘油、依地睃二钠山 东大学硕士学位论文 、羟苯乙酯、羟苯甲酯、羟苯丙酯、硼砂、硼酸、苯扎氯铵、苯 扎 溴铵、山梨酸;羟苯乙酯对照品、羟苯甲酯对照品、羟苯丙酯对 照品;乙腈为色 谱纯;超纯水、醋酸铵、冰醋酸均为分析纯。 ..仪器 超净工作台,:可见分光光度计,型; 比色皿,;数显恒温水浴锅国华电器,.;涡旋震荡器 ,;数显恒温培养箱上海博讯实业,.;冰箱;离心 :数显鼓风 机,;高压灭菌锅上海博讯实业,. 干燥箱上海博讯实业, ;一次性无菌过滤器滤器 :真空泵,.;微波炉;微量移液器, ; 此;无菌移液器吸头,此;一次性无菌刻度吸管 ; 容量瓶;量筒;一次性无菌培养皿;接种环:手动菌落计数 器北京赛百奥,.;自动菌落计数器,;超低温冰 箱 ,; 高效液相色谱仪, 检 测器, 进样器;.石油产品云顶黏度测定仪;.标准恒温 浴槽;.型定时恒温磁力搅拌器;.型澄明度检测仪;紫外可 见分光光度计;.全自动冰点渗透压计;.型升华培养箱; 超声波清洗剂;型计;沙多利斯电子分析天平、电子精密天 平;超纯水仪等。 .抑菌试验步骤 ..菌种的制备 ...细菌菌种 在开始每组产品抑菌效力试验之前,从当前的细菌接种斜面上传 代每个细菌 菌种至单独的斜面上。在?培养细菌菌种 。同时,至少制备 个菌种传代斜面。 ...白色念珠菌 在开始每组产品抑菌效力试验之前,从当前的真菌接种斜面上传代每个菌种 至单独的斜面上。在一?培养菌种 。同时,至少制备个菌种山东大学硕十学位论文 传代斜面。 ...黑曲霉 在开始每组产品抑菌效力试验之前,从当前的霉菌接种斜面上传代每个霉菌 。 菌种至单独的培养基的平皿上。在?培养菌种 ..菌悬液的制备 制备接种菌液的浓度大约为 /,测定菌悬液吸光度估测菌液浓度, 最终用平皿菌落计数法测定接种菌液的浓度。 ...细菌菌悬液的制备 从培养箱中取出培养好的菌种,用 无菌生理盐水洗下菌落,转移至 无菌试管中, /离心 ,弃去上清液。加入无菌生理盐水, 涡旋, /离心 ,弃去上清液,加入适量无菌生理盐水,涡旋混合, 处测定菌悬液吸光度,确定菌悬液浓度为/为试验用菌液。 ...白色念珠菌菌悬液的制备 从培养箱中取出培养好的菌种,用 无菌生理盐水洗下菌落,转移至 无菌试管中, /离心,弃去上清液。加入 无菌生理盐水, 涡旋, /离心 ,弃去上清液,加入一无菌生理盐水,取. 菌悬液加入到 的无菌生理盐水,处测定吸光度,测定菌悬液浓度为 /,母液做为试验用菌液。 ...黑曲霉菌悬液的制备 从培养箱中取出培养好的菌种,用 含聚山梨酯的无菌生理盐水洗下菌落,转移至无菌试管中, /离心 ,弃去上清液。加入 含聚山梨酯的无菌生理盐水,涡旋, /离心 ,弃去上清液,加 入适量无菌生理盐水,取. 菌悬液加入到 的含聚山梨酯的无菌生 理盐水,处测定吸光度,测定菌悬液浓度为/,母液做为试 验用菌液。 菌悬液宜现制现用,菌悬液在低温~?下保存可于 内使用,孢 子混悬液在此条件下保存可在一周内使用,超过保存时间,需重新制备。 ..样品的准备 试验开始前,查明产品的类别及抑菌剂系统。取试样移取到五支 无菌试管中, 每支试管取样 ,作为接种样品。 山东大学硕士学位论文 ..试验过程 第天试验 分别取支 磷酸盐缓冲液和支 供试样品,分别接种金黄色 葡萄球菌,大肠杆菌,铜绿假单孢杆菌, 白色念珠菌,黑曲霉。磷酸盐缓冲液进行梯度稀释,确 保可进行计数。支样品放入细菌培养箱中进行培养,待 后进行中 和剂梯度 稀释。 第天试验 支供试样品用或中和肉汤进行梯度稀释,以保证平皿计数,每 个浓度用两个平皿平行计数。剩余样品放入?培养箱中继续培 养。 ...第天试验 同试验步骤。 ...第天试验 蒸汽灭菌,销毁。 同试验步骤,剩余样品进行?、 .处方筛选 ..硫酸软骨素滴眼液现处方 硫酸软骨素滴眼液为山东博士伦福瑞达制药有限公司生产的产品,目前产品 的处方见表.。 表.硫酸软骨素滴眼液现处方山东大学硕士学位论文 处方采用的玻璃酸钠给药体系,具有高黏度与黏附性,与常规眼用制剂相比, 能够延长药物在眼黏蛋白层的停留时间,降低由眨眼和流泪引起的药物损失率, 提高药物的生物利用度;甘油做为渗透压调节剂,调整处方最终渗透压达到 /;对羟基苯甲酸乙酯为抑菌剂;依地酸二钠为螯合剂,在眼用制剂 中与抑菌剂联合使用,能够增强抑菌剂的抑菌效力;硼砂为值调节剂,调整 处方值在..。 在此处方的基础上,本课题通过抑菌效力试验,根据各类抑菌剂的性质及适 用范围,对处方中的渗透压调节剂甘油、硼酸,抑菌剂苯扎氯铵、羟苯乙 酯、山梨酸、复合羟苯酯类的种类和用量进行优化筛选,以获得质量稳定可靠、 对眼表刺激性小的处方。 眼用制剂产品较为重要的质量指标包括:值、渗透压、黏度、无菌等。 因此,在筛选抑菌剂时选择性状、值、渗透压等考察指标,作为处方筛选的 依据。 ..羟苯乙酯做为抑菌剂 羟苯酯类化学性质随值的增高而降低,在强碱和灭菌温度下易发生水解, 酸性溶液中能够耐受灭菌条件,对强光敏感。在%的聚山梨酯溶液中由于发生 络合反应而失去抑菌作用。室温下,在值~的水溶液中稳定,能够耐受 ?灭菌 。硼酸能够抑制微生物的磷酸酶,具有一定的抑菌作用,提高 处方的抑菌效力。根据现有处方,分别选择甘油、硼酸做为渗透压调节剂,羟苯 乙酯.%为抑菌剂,设计以下处方,见表.。 表.处方?一二 按照上述处方配制样品后,用?高压蒸汽灭菌 ,比较灭菌自『后 样品的变化,具体见表.。 山东大学硕士学位论文 表.灭菌前后理化指标 性状值 渗透压摩尔浓度 处方 灭菌 灭菌前 灭菌前 灭菌后 灭菌前 灭菌后 后 处方一 澄清 澄清 . .处方二 澄清 . 澄清 .对灭菌后的样品进行抑菌效力试验,验证中和剂的效力, 结果见表.。 表.中和剂验证结果 ??????????????一 处方 测试溶液 ???????????????一 中和肉汤 处方一磷酸盐缓冲液回收率惕 . . . .处方二磷酸盐缓冲液回收率肱 . . . . . ?????????一 采用【??中和肉汤回收率均大于%,符合试验要求。 抑菌效力试验见表.。 处方 时间点 ????????一一 . . . . . . . 国. . . 处方一结果 不合格 . . . . . . . . . . 处方二 结果 不合格 由于在的试验中,两个处方的大肠杆菌试验均不合格,即不再进 行后续 的试验。 羟苯乙酯的常用量为.%.%,在甘油和硼酸作为渗透压调节剂的基 玻璃酸钠 . .甘油 . 硼酸 . . 羟苯乙酯 . 依地酸二钠 . .硼砂 . . 注射用水 按照上述处方配制样品后,用蒸汽?高压灭菌 ,比较灭菌前后 样品的变化,具体见表.。 表.灭菌前后理化指标 渗透压摩尔浓度 性状值 ~ 处方 灭菌前 灭菌后 灭菌前 灭菌后 灭菌前 灭菌后 处方三 . . 澄清 澄清处方四 . 澄清 澄清 .对灭菌后的样品进行抑菌效力试验,验证中和剂的效力,具体见表.。 表.中和剂验证结果 处方 测试溶液 中和肉汤处方三 磷酸盐缓冲液. 同收率惕 . . 置 . 中和肉汤 处方四 磷酸盐缓冲液 ???. 同收率惕 . . . . 抑菌效力试验见表.。 山东大学硕十学位论文 以甘油为渗透压调节剂, 时铜绿假单胞杆菌生长过多,无法计数,因此 该处方未进行后续试验,硼酸做为渗透压调节剂,抑菌效力试验合格. .%的羟苯乙酯在眼用制剂中用量较大,试用处方滴眼,能明显感到眼睛不 适,因此降低羟苯乙酯的含量,筛选不同的浓度梯度,具体处方见 表.。 表.处方五~七 照上述处方配制样品后,用蒸汽?高压灭菌 ,比较灭菌前后样 品的变化,具体见表.。 山东大学硕十学位论文 .灭菌前后理化指标 渗透压摩尔浓度 性状值 生方 灭菌前 灭菌后 灭菌前 灭菌后 灭菌前 灭菌后 对灭菌后的样品进行抑菌效力试验,验证中和剂的效力,具体见 表.。 表.中和剂验证结果 处方 测试溶液 一 嘲中和肉汤 处方五 磷酸盐缓冲液 . . . 邮 回收率肱 . ? 处方六 磷酸盐缓冲液 . . 回收率肱 . 圣黝 . 中和肉汤 四磷酸盐缓冲液处方七回收率/% . . . . . 抑菌效力试验见表.。 表.抑菌效力试验结果 处方瑞蔫/ . . . . . . . . . . 处方 . . . . . 五 . . 结果 合格 . . 处方 . . . /、 . . . . . . . . . . 山东大学硕十学位论文 根据以上试验结果,抑菌效力合格的条件下,优先选用低浓度抑菌剂的处方, 将.%的羟苯乙酯做为考察处方。 ..苯扎氯铵做为抑菌剂 苯扎氯铵为阳离子季铵盐类,在室温下能够长时间保持稳定,灭菌条件下稳 定。与阴离子表面活性剂、肥皂、柠檬酸盐、碱金属、蛋白质不相容,被一些塑 料和滤膜吸收。国内外眼用制剂较多地采用苯扎氯铵作为抑菌剂,虽然苯扎氯铵 和玻璃酸钠有配伍禁忌,有些同类处方仍采用该抑菌剂,为保证制剂性状,筛选 处方中添加聚山梨酯。苯扎氯铵常用浓度为.%加.%,选择苯扎氯铵 .%,甘油和硼酸分别作为渗透压调节剂,具体见表.。 表.处方八~十一 按照上述处方配制样品后,用蒸汽?高压灭菌 ,比较灭菌前后 样品的变化,具体见表.。 山东大学硕士学位论文 表.灭菌前后理化指标 性状 值 渗透压摩尔浓度 处方 灭菌前 灭菌后 灭菌前 灭菌后 灭菌前 灭菌后 . 处方八 澄清 微黄色 .处方九 澄清 黄色 . .处方十 . . 澄清 微黄色 处方十一 . 澄清 黄色 .对灭菌后的样品进行抑菌效力试验,验证中和剂的 效力,具体见表.。 表.中和剂验证结果 处方 测试溶液 处方八中和肉汤磷酸盐缓冲液 回收率惕 . . . . . 处方九中和肉汤磷酸盐缓冲液 回收率肱 . . . . . 处方十中和肉汤 磷酸盐缓冲液 回收率惕 . . . . . 处方十一中和肉汤 磷酸盐缓冲液 回收率/% . . . . . 抑菌效力试验见表.。 表.抑菌效力试验结果&处方端譬 . . . . . . . . . . 处方 八 结果 合格 山东大学硕学位论文 .%苯扎氯铵,选用硼酸作为渗透压调节剂,抑菌效力试验合格,但 是由 于蒸汽灭菌,产品性状不合格,因此不做为后续处方考察。 ..山梨酸做为抑菌剂 山梨酸对光照和空气中暴露敏感,在水溶液中易氧化。遇非离子 表面活性剂 和塑料时抑菌活性降低。能够与糊精、蛋白质、明胶相容;与碱、 氧化剂和还原 剂不相容。常规应用浓度为.%如.%,选择用量的上限.%进行试验。 山 梨酸.抗菌活性最强,超过基本没有活性,因此该处方控制在以下 【。具体处方见表. 表.处方十二 组分 处方十二 硫酸软骨素 . 玻璃酸钠 . 硼酸 . . 山梨酸 依地酸二钠 . 硼砂 . 注射用水 按照上述处方配制样品后,用蒸