热应激下中草药对鸡法氏囊、胸腺淋巴细胞组织学的影响

热应激下中草药对鸡法氏囊、胸腺淋巴细胞组织学的影响 热应激下中草药对鸡法氏囊、胸腺淋巴细胞 组织学的影响 河南农业科学,2012,41(2):136—139 JournalofHenanAgriculturalSciences 热应激下中草药对鸡法氏囊,胸腺淋巴细胞 组织学的影响 刘会茹,沈萍,杨彩然,史秋梅,董淑珍,杨光,左天衡 (河北科技师范学院河北省预防兽医学重点实验室,河北秦皇岛0660O4) 摘要:为了探讨热应激下中草药对鸡中枢免疫器官的作用机制,进行了鸡法氏囊,胸腺内淋巴细胞 ,随机分成6个数量的动态观察.选择88日龄健康伊莎褐商品代蛋用雏鸡120只组:3个试验组 为中草药高(7.5mg/d),中(5mg/d),低(2.5rag/d)剂量组和3个对照组[高温对照组,正常室温 对照组,维生素C(5mg/d)对照组].运用组织学常规切片技术和HE染色法,观察了试验组和对 照组在88,91,95,97日龄的鸡法氏囊,胸腺中淋巴细胞的数量.结果显示:在400ftm×300J上m的 观察面积内,97日龄时,中草药高剂量组与高温对照组鸡法氏囊淋巴细胞数分别为84.33,69.81 个,二者差异达极显着水平(P<O.01),中剂量组淋巴细胞数为81.61个,与高温对照组差异显着 (P%0.05).97日龄时,中草药高剂量组,中剂量组胸腺淋巴细胞数分别为95.85,9l_40个,与高 温对照组的淋巴细胞数(72.65个)差异达极显着水平(P<0.01).明在热应激状态下,中草药可 增加鸡法氏囊,胸腺内淋巴细胞数量,且剂量越高效果越好,由此说明该中草药对 于缓解蛋鸡的热 应激有较好的效果. 关键词:中草药;鸡;法氏囊;胸腺;淋巴细胞;热应激 中图分类号:$831.1文献标志码:A文章编号:1004—3268(2012)02—0136—04 EffectsofChineseHerba1MedicineontheHistologyofthe LymphocytesinBursaofFabriciusandThymusof ChickensunderHeatStress LIUHui—ru,SHENPing,YANGCai—ran,SHIQiu—mei,DONGShu—zhen, YANGGuang,ZUOTian—heng (KeyLaboratoryofPreventiveVeterinaryMedicineofHeheiProvince,HebeiNormalUniversityof Science8LTechnology,Qinhuangdao066004,China) Abstract:TovaluatetheimmunemechanismofChineseherba1medicineforheated— stresschic— kens,thehistologicalchangesofthecentralimmuneorganswereobserved.Atotalof120healthy 88一day— oldIsaBrowncommerciallayingchickenswererandomlydividedintosixgroups,threeex— perimentalgroups(High,mediumandlowdosegroups)andthreecontrolgroups(Hightempera— ture.roomtemperatureandVc(5mg/d)groups).Intheexperimentalgroupschickenswerefed withthehighdose(7.5mg/d),themediumdose(5mg/d),orthelowdose(2.5mg/d)of Chineseherbalmedicine.OnDays88,91,95,and97,thechangesoflymphocyteinbursaoffabri— ciusandthymusofchickenwereexamined.Thebursaoffabriciusandthymustissuesampleswere processedroutinelyforparaffinembeddingtechniqueandstainedwithhaematoxylinandeosin 收稿日期:2011一O9,O5 基金项目:河北省科技厅资助项目(O722O401D);石家庄市科技发展计划项目 (O815O132A) 作者简介:刘会茹(1959一),女,河北丰润人,讲师,专科,主要从事临床医学研究.E— mail:lhrl959@163.corn *通讯作者:沈萍(1956一),女,河北正定人,教授,本科,主要从事基础兽医学研究.E —mail:shpS665@126.corn 第2期刘会茹等:热应激下中草药对鸡法氏囊,胸腺淋巴细胞组织学的影响137 (H.E).TheresultsshowedthatonDay97,thelymphocytesinbursaoffabriciusaddedwith7.5 mg/dChineseherbalmedicinewassignificantlyincreasedthanthatofthehightemperaturecon— trolgroup(P<O.01),whichare84.33and69.81,respectively.Thelymphocytesinbursaoffab— riciusofchickenaddedwith5mg/dChineseherbalmedicinewas81.61,significantlyincreased thanthatofhightemperaturecontrolgroup(P<O.05).Thelymphocytesinthymusofthehigh doseandthemediumdosegroupswere95.85and91.40,higherthanthatofthehightemperature controlgroup(P<O.O1).Thisindicatedthatadding7.5mg/dChineseherbalmedicineforhea— ted— stresschickenssignificantlyincreasedlymphoeytesinbursaoffabriciusandthymusofchicken andthehigherconcentrationthebetter,whichimpliesthattheChineseherba1medicineiSusefu1 foreasingtheeffectsofheatstress. Keywords:Chineseherbalmedicine;chicks;bursaoffabricius;thymus;lymphocytes;heat Stress 应激是机体对外界或内部各种异常刺激所产生 的非特异性应答反应的总和.应激的目的是动员机 体的防御系统去对抗应激源所造成的危害,使其本 身能够在不适的环境中继续保持机体内环境的平 衡.鸡热应激是指环境温度超过其最适温度21, 26?时,鸡的生理功能趋于紊乱,表现为呼吸次数 加快,饮水量明显增多,生产性能明显下降,重则导 致其死亡l_1. 法氏囊,胸腺是鸡的中枢免疫器官,当鸡受到热 应激后,免疫器官有明显的损伤,发生萎缩性变化, 淋巴细胞数目减少,免疫功能降低,严重的可发生一 定程度的淋巴细胞坏死.法氏囊,胸腺免疫器官的 发育状态及机能强弱(淋巴细胞的数量),直接决定 着鸡的免疫水平,在体内的免疫活性细胞中,T淋巴 细胞和B淋巴细胞的数量和功能直接决定了机体 细胞免疫和体液免疫的效果,是机体全身免疫机能 强弱的一个具体表现.研究表明,某些中草药具有 清热解毒,抗菌消炎的功效,日粮中添加中草药,可 以增强鸡体对高温的适应性,调整机体免疫机能,缓 解热应激反应,且不会在肉,蛋中残留,而且中草药 价格低廉,资源丰富l2].本试验和用我国丰富的天 然中草药资源,依据现代中医中药理论,科学组方配 伍并添加至鸡饲粮中,在热应激条件下研究中草药 对鸡中枢免疫器官法氏囊,胸腺内的淋巴细胞数量 变化的影响,以期对热应激的机制研究提供参考. 1材料和方法 1.1试验材料 1.1.1试验动物88日龄健康伊莎褐商品代蛋用 雏鸡120只(由河北科技师范学院牧场提供),随机分 成6个组,3个中草药试验组:高剂量组(7.5rag/d), 中剂量组(5mg/d)和低剂量组(2.5mg/d).3个对 照组:高温对照组,正常室温对照组不添加任何药物, 维生素C组添加维生素C5mg/d. 1.1.2中草药方剂主要由石膏,藿香,薄荷,知母 和红景天等7味中草药组成的方剂,由河北省预防 兽医重点实验室提供. 1.1.3主要试剂与仪器试剂为甲醛,Bouin固定 液,乙醇体积分数(70,8O%,90,100),二甲 苯,苏木素一伊红染色液,蛋白甘油,盐酸酒精,冰醋 酸,石蜡,中性树胶等.仪器为石蜡切片机,自动磨 刀机,电热恒温水浴锅,DMB5—5数码生物显微镜, 光学显微镜等. 1.1.4试验动物饲养条件供试鸡,按照常规方法 饲养管理,置于动物科技学院人工控制实验室中,采 取舍内笼养,每日分3次饲喂,同时保持足够的清洁 饮水.在试验期内,室温对照组环境在20?左右, 其余5组处于模拟高温环境中.每天光照16h(人 工和自然),采取电加热器与火炉加热等措施,使鸡 舍日温度保持在27.6,33.7?. 1.2采样及切片制备 分别在供试鸡88日龄,91日龄,94日龄,97日 龄时随机选取试验组和对照组各5O只鸡剖杀,分别 取法氏囊,胸腺,按照下述程序制备切片:置Bouin 液中固定24h一在不同体积分数的乙醇中脱水一 二甲苯透明一石蜡包理一切片(5m)一HE染色. 1.3计数方法与统计 随机抽取每组5只鸡的切片,每只鸡取5张切 片,每张切片中观察8个视野取其平均值,并按组求 其平均值.数据用SPSS17.0软件包进行处理,以 单因素方差分析进行统计,数据以平均值?差 (X?S)表示. 2结果与分析 2.1法氏囊淋巴细胞数量的变化 不同日龄试验组和对照组的鸡法氏囊小结内的 l38河南农业科学第41卷 淋巴细胞数量变化(光学显微镜1000×,观察面积 400m×300m)见表1. 由表1可以看出,88日龄与91日龄时,中草药各 试验组与对照组淋巴细胞数量差异不显着.到95日 龄时,中草药高剂量组与高温对照组淋巴细胞数分别 为82.75,7O.14个,两者差异极显着(P<0.o1);中剂 量组淋巴细胞数为8O.O2个,与高温对照组差异显着 (P<0.o5).到97日龄时,中草药高剂量组与高温对 照组淋巴细胞数分别为84.33,69.81个,两者差异极 显着(P<0.01),中剂量组淋巴细胞数为81.61个,与 高温对照组差异显着(P<0.05);维生素C对照组淋 巴细胞数显着高于高温对照组(P<0.05). 表1试验组与对照组不同日龄供试鸡法氏囊淋巴细胞数量变化个 注:同列标不同大写字母者表示差异极显着(P<0.O1),标不同小写字母者表示差 异显着(P<0.05),标相同字母或不标字母者表示差异 不显着(P>O.01),表2同. 2.2胸腺淋巴细胞数量观察 试验观察了不同日龄试验组和对照组鸡胸腺内 淋巴细胞数量变化(光学显微镜1000×,观察面积 是300m×300/zm),淋巴细胞数量的变化和显微 镜下的结构见表2. 由表2可知,88日龄,91日龄试验组与对照组淋 巴细胞数量变化不大明显,中草药高剂量组与高温对 照组有变化.95日龄时,中草药高剂量组,中剂量组淋 巴细胞数分别为89.25,83.35,80.25,与高温对照组淋 巴细胞数7O.8O个相比,差异均极显着(P<0.01);到 97日龄时,中草药高剂量组,中剂量组淋巴细胞数分别 为95.85,9lI40个,与高温对照组淋巴细胞数(72.65 个)相比差异极显着(P<0.01);95日龄维生素C组淋 巴细胞数与高温对照组差异显着(P<O.05). 表2试验组与对照组不同日龄供试鸡胸腺淋巴细胞数量变化个 3讨论 3.1法氏囊,胸腺内淋巴细胞数量的变化 法氏囊,胸腺是禽类中枢免疫器官,胸腺是细胞 免疫的器官,法氏囊是禽类特有的体液免疫器官. 中枢免疫器官发生早,决定着外周免疫器官的发展 和全身的细胞免疫和体液免疫的过程.因此,中枢 和外周免疫器官的发育状态及机能强弱,直接决定 着禽类全身的免疫水平.本试验将中草药作为抗应 激剂对鸡法氏囊,胸腺免疫器官的生长发育情况进 行了观察.结果显示:中草药试验组鸡法氏囊,胸腺 内的淋巴细胞数量(显微镜下观察,淋巴细胞发育正 常)明显高于高温对照组(淋巴细胞不但数量减少, 而且有部分细胞变性和坏死),显示了所用中草药可 通过提高慢性热应激蛋鸡淋巴细胞转化率,来提高 淋巴细胞的数量,从而促进免疫器官中免疫活性细 胞的增殖,提高机体细胞免疫和体液免疫的机能. 这与其他类似中药抗热应激的研究报道_6.基本 一 致. 3.2中草药对热应激鸡免疫效果的影响 现代中草药药理研究证明,某些中草药可使血 液中自细胞总数,多核白细胞总数增加,提高NK细 胞的活性,提高机体诱生干扰素产生的能力和T,B 淋巴细胞的特异性免疫功能等【8].本试验供试中草 药中的石膏能降低血管的通透性,减少炎症渗 出,阻碍内毒素进入血液,减少对肠道细胞的损伤; 第2期刘会茹等:热应激下中草药对鸡法氏囊,胸腺淋巴细胞组织学的影响139 薄荷能通过兴奋中枢神经系统,使皮肤毛细血管扩 张,促进汗腺分泌,增加散热,而起到发汗解热作用; 藿香中的挥发油有刺激胃黏膜,促进胃液分泌,帮助 消化的作用;知母具有退热,镇静,抗炎,利尿等作 用,还可以治疗发烧时的烦躁,口渴,肺热,干咳等; 红景天产于青藏高原三江源自然保护区,处于海拔 3000~6000m高寒雪域特殊环境,无污染,天然纯 净,为青藏特有名贵药材,红景天适应原样作用,能 提升机体对有害刺激的非特异性抵抗力,增强机体 的适应性,主治功能有抗脑缺氧,抗疲劳,活血止血, 清肺止咳,化淤消肿,解热退烧,滋补元气__g等. 效梅等报道,用生石膏等组成的中药添加剂 能显着提高热应激蛋鸡的红细胞C3b受体花环促 进率,极显着增加淋巴细胞转化率,从而增强热应激 蛋鸡的免疫能力.董发明等口D_研究表明,由苍术, 黄芪组成的苍芪散能使外周血T淋巴细胞ANAE 阳性率显着升高,认为是细胞免疫增强的结果,T淋 巴细胞阳性率上升,除能产生更多的淋巴因子提高 机体免疫力外,还具辅助体液免疫的作用. 本试验所用复方中草药由石膏,藿香,薄荷,苍 术等组成.在高温条件下,达到一定的用药时间后, 高,中剂量组鸡免疫细胞的数量均高于高温对照组. 说明该处方对热应激鸡法氏囊,胸腺有保护作用,并 随剂量的增加而增强,有效减弱了热应激对法氏囊, 胸腺的组织损伤. 3.3维生素C的作用 本试验设立了维生素C对照组.由试验结果 看出,维生素C对照组鸡的淋巴细胞数量明显高于 高温对照组.一般情况下,鸡体可以自身合成足够 的维生素C供机体利用,但受高温热应激影响,蛋 鸡通过释放肾上腺髓质激素,儿茶酚胺和皮质酮并 动用能量来缓解热应激的影响,而机体合成的维生 素C不能满足需要,肾脏和脾脏中维生素C含量下 降.维生素C作为一种抗应激营养因子,可减缓应 激产生的不良影响,提高家禽的生产性能?.本试 验结果显示,维生素C对抗热应激有一定的疗效,, 热应激的时问越长,疗效越显着. 参考文献 [1]张峰,吴占军,张新同,等.二氢吡啶对热应激奶牛产奶 量以及奶牛体温,呼吸频率的影响EJ].华北农, 2010,25(S1):62—64. 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