小儿呼吸道合胞病毒A、B亚型的流行病学特征及临床表现[权威资料]

小儿呼吸道合胞病毒A、B亚型的流行病学特征及临床表现[权威] 小儿呼吸道合胞病毒A、B亚型的流行病学特征及临床 表现 [摘要] 目的 分析小儿呼吸道合胞病毒(hRSV)A、B亚型的流行病学特征及临床表现。 方法 选择2014,2015年重庆三峡中心医院江南分院以呼吸道感染首诊的500例患儿为研究对象。将鼻咽吸取物标本采用直接免疫荧光及RT-PCR方法筛选出hRSV感染阳性标本，通过核酸电泳法鉴定A、B亚型。对照分析hRSV感染的A、B亚型患儿的年龄、性别、住院时间;分析A、B亚型流行病学特征及临床表现差异。 结果 hRSV感染阳性患者200例，其中，A亚型71例(35.5%)，B亚型129例(64.5%)。hRSV A、B亚型患儿中，男性多于女性，间质性肺炎、毛细支气管占比高于支气管肺炎、支气管炎、哮喘急性发作。hRSV A、B亚型感染的患儿均以咳嗽、喘息为主要症状，其次为鼻塞流涕、发热、呼吸困难，hRSV A亚型与B亚型各症状占比比较，差异均无统计学意义(P > 0.05)。hRSV A、B亚型感染患儿中，?6个月患儿占比最高，且随着年龄的增长，患儿所占比例明显降低;?6个月、>6,12个月、>1,2岁、>2,5岁hRSV A亚型与B亚型患儿占比比较，差异无统计学意义(P > 0.05)。每年1、2月及11、12月是hRSV感染的高峰期，不同月份A、B亚型患儿的感染情况差异无统计学意义(P > 0.05)。 结论 2014,2015年hRSV A、B两亚型在重庆地区共同流行，以B亚型优势流行为主。两亚型在临床表现、年龄等方面并无明显差异。hRSV A、B亚型的分布均与年龄、月份有关，hRSV A、B亚型均以咳嗽、喘息为主要临床表现。 [关键词] 呼吸道合胞病毒;分型;流行病学特征;临床表现 [] R725.6 [] A [] 1673-7210(2016)05(b)-0115-04 [Abstract] Objective To analyze the epidemiological characteristics and clinical manifestations of subtype A and B of respiratory syncytial virus (hRSV). Methods From 2014 to 2015， 500 children with respiratory tract infection first diagnosed in Jiangnan Branch Hospital of Chongqing Three Gorges Central Hospital were selected as the research objects. Children with hRSV infection was screened by the method of direct immunofluorescence and RT-PCR， and classified into subtype A and B by nucleic acid electrophoresis. Age， gender， length of hospital stay of patient with subtype A and B of hRSV infection were compared; epidemiological features and clinical manifestations of patient with subtype A and B were analyzed. Results 200 cases of HRSV infection were detected， of which 71 cases (35.5%) with subtype A of hRSV infection， and 129 cases (64.5%) with subtype B infection. In children with subtype A and B of hRSV infection， boys were more than girls， proportions of interstitial pneumonia and capillary bronchus were higher than bronchial pneumonia， bronchitis， asthma acute author. Cough and breathing were the main symptoms of children with subtype A and B of HRSV infection， followed by stuffy nose， runny nose， fever， difficulty breathing; there was no statistically significant difference in the clinical manifestations between subtype A and B of hRSV (P > 0.05). 0-6 months children with the highest proportion in children with subtype A and B of hRSV infection， and as the growth of the age， the proportion was significantly lower; there was no statistically significant difference in the proportion of children aged ? 6 months， >6-12 months， >1-2 years， and >2-5 years between subtype A and B of hRSV (P > 0.05). January， February， December and November every year were the peak of hRSV infection; there was no statistically significant difference in proportion of children with subtype A and B of hRSV at different months (P > 0.05). Conclusion Distribution of subtype A and B of hRSV is common popular from 2014 to 2015 in Chongqing， and give priority to subtype B of hRSV. There is no obvious difference of two subtypes in clinical manifestations， age. The distribution of subtype A and B of hRSV is related to age and month， coughing and wheezing are the main manifestations of two subtypes. [Key words] hRSV; Subtype; Epidemiological characteristics; Clinical manifestation 人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus，hRSV)属于肺炎病毒属副黏液病毒科，是一种单负链 呼吸道病毒。hRSV是导致婴幼儿严重呼吸道感染的重要病原 [1]。研究显示，世界范围内hRSV暴发流行的月份和持续时 间因地区和年份而异，但流行规律大致一致[2-4]。但关于 hRSV在重庆万州区乃至三峡库区的研究尚未见报道，而且在 三峡大坝蓄水后，对整个三峡库区包括重庆万州区的气候造 成了一定的影响，气候的改变是否改变了hRSV流行特点，且 是否同时存在其他国家新近发现的BA流行株，甚至于出现新 的变种，尚不得而知。本研究旨在探讨重庆地区2014,2015 年hRSV的流行病学特征和临床表现特点。现报道如下: 1 资料与方法 1.1 一般资料 采取2014年1月,2015年12月于重庆三峡中心医院江南分院(以下简称“我院”)首诊的500例呼吸道感染患儿，均符合第7版《诸福棠实用儿科学》中关于呼吸道感染的诊断标准[5]。其中，男273例，女227例，平均年龄(6.39?4.38)个月。排除先天性心脏病、闭塞性细支气管炎、支气管扩张、肺大泡、支气管肺发育不良等心肺疾病患儿。本研究经我院医学伦理委员会批准，参与研究的患儿家属均知情同意并签署知情同意书。 1.2 方法 1.2.1 直接免疫荧光法检测呼吸道合胞病毒抗原 患儿入院当日或入院第2天，规范、无菌地使用鼻咽拭子深入患儿鼻腔至耳根部4,5 cm，旋转1周提取上皮细胞，放入有3 mL病毒转移液的无菌离心管中，至于冰盒上，4 h转移至我院检验科，2000 r/min离心5 min，弃上清，沉淀后用PBS洗涤并调整浓度，病毒抗原检测采用直接免疫荧光法(direct fluorescence assay，DFA)。采用呼吸道病毒诊断试剂盒(D3 Ultra DFA Respiratory Virus Screening and ID Kit，美国DHI公司)在玻片上点7个样(25 μL/孔)，置于37?恒温培养箱烘干，冷丙酮固定8,10 min。各玻片上分别滴加异硫氰酸荧光素标记的7种呼吸道病毒抗原的特异性单克隆抗体，37?恒温培养箱孵育15,20 min，PBS浓缩洗液冲洗3次，风干后滴加封固液封片，并于200倍荧光显微镜(日本尼康)下观察，对观察结果进行判读，每孔观察100个细胞，黄绿色荧光?2个为抗原阳性，反之为阴性。 1.2.2 核酸电泳法鉴定A、B亚型 筛选属于呼吸道感染的首诊患儿，采用免疫荧光检测hRSV，筛选阳性标本。采用Trizol一步法提取RAN，提取试剂Tripure reagen购自罗氏公司，反转录合成cDNA，DNA提取试剂盒购自天根生化科技(北京)有限公司。通过PCR技术进行呼吸道合胞病毒A、 B亚型鉴定，扩增采用Super Script ? Platinum一步法荧 光定量RT-PCR试剂盒，用亚型特异引物和探针对混合核酸标本进行RSV A、B亚型的检测。根据Gene Bank中RSV G蛋白编码基因的核苷酸序列，利用Primer 5.0软件设计3条特异的引物:?A、B亚型通用引物5′-GGCAAATGCAAACATGTC- 3′，388,405 bp;?5′-TGTTGTGGGTTGCAGGTT-3′，388,405 bp，与A亚型G蛋白核苷酸序列互补片段;?5′-TGGGTGTGTTTT-CGGAGG-3′，824,841 bp，与B亚型G蛋白核苷酸序列互补片段。反应体系20 μL:2×反应混合液10 μL，上下游引物(RSV-A下游引物为10 μmol/L)0.5 μmol/L，各0.5 μL，提取的总核酸6 μL，探针0.6 μmol/L、酶混合液0.4 μmol/L、无RNA酶水共2 μL。PCR扩增条件:50? 30 min，95? 2 min，95? 5 s，60? 1 min，50个循环，以反应管内荧光信号达到设定阈值时的循环次数(Ct值)<35为结果阳性[6]。 1.3 观察指标 对照分析hRSV A、B亚型患儿，统计其年龄、性别、住院时间;比较A、B亚型患儿的流行病学特征和临床表现。 1.4 统计学方法 采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数?标准差(x?s)表示，两组间比较采用t检验;计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 呼吸道合胞病毒感染检出情况 本研究中，共检出hRSV感染阳性200例，阳性率为40%，其中男126例(63%)，女74例(37%)。A亚型71例(35.5%)，B亚型129例(64.5%)。年龄?6个月的患儿100例，占50.0%;>6,12月的患儿55例，占27.5%;>1,2岁的患儿27例，占13.5%;>2,5岁的患儿18例，占9.0%。剖宫产87例，阴道分娩113例。住院时间7,15 d，平均 (10.84?3.03)d。间质性肺炎82例，毛细支气管69例，支气管肺炎21例，支气管炎19例，哮喘急性发作9例。 2.2 呼吸道合胞病毒A、B亚型患儿一般资料比较 hRSV A、B亚型感染的患儿中，男性多于女性，间质性肺炎及毛细支气管炎患儿比例高于支气管肺炎、支气管炎、哮喘急性发作患儿。hRSV A、B亚型患儿年龄、性别、出生方式、疾病构成及住院时间比较，差异均无统计学意义(P > 0.05)。见表1。 2.3 呼吸道合胞病毒A、B亚型的临床表现 hRSV A、B亚型患儿均以咳嗽、喘息为主要症状，其次为鼻塞流涕、发热、呼吸困难，两亚型临床表现差异无统计学意义(P > 0.05)。见表2。 2.4 呼吸道合胞病毒A、B亚型的流行病学规律 本研究中，2014、2015年A、B两亚型共同流行，均以B亚型为优势流行株，?6个月、>6,12个月、>1,2岁、>2,5岁患儿hRSV A亚型与B亚型占比比较，差异无统计学意义(P > 0.05);hRSV A、B亚型患儿中，?6个月患儿占比最高，且随着年龄的增长，患儿所占比例明显降低。不同年份hRSV A、B亚型患儿占比差异无统计学意义(P > 0.05)。见表3。不同月份A、B亚型患儿的感染情况差异无统计学意义(P > 0.05)，但每年1、2月及11、12月是hRSV感染的高峰期。见表4。 3 讨论 hRSV感染有明显的季节性，主要暴发流行于冬春季节，每年的11月,次年2月为暴发流行的高峰季节[7]。BA株首次于2004年在北京被报道，2007年重庆首次发现BA株，2008,2009年，BA株迅速成为重庆地区的优势流行株[8]。BA株的高优势流行可能主要是选择优势的结果，但具体机制还不清楚，可能与G蛋白基因突变导致免疫逃逸有关，也可能是因为60个核苷酸的插入导致了G蛋白抗原表位的改变，从而导致hRSV的特异性抗体不能有效与之识别。 hRSV最显著的特征是每一次hRSV感染只能调节以后感染的严重程度，产生的抗体并不能对机体产生永久保护，因此hRSV可反复感染[9]。hRSV根据抗原性的不同可分为A、B两亚型，A、B两亚型间的主要区别在于G蛋白的基因差异[10]。G蛋白是hRSV毒株中变异最大的蛋白，亚型间G蛋白的氨基酸差异达53%，但在同一亚型内，B亚型的氨基酸抗原变异低于A亚型，分别为9%和20%。阿根廷于1999年首次报道了在G基因上有60个核苷酸插入的BA株[11]。 本研究选择我院首诊的200例hRSV感染患儿为研究对象，并采用核酸电泳法鉴定A、B亚型，结果发现hRSV B亚型较为常见，未发现BA株。A亚型及B亚型患儿中，男性多于女性;间质性肺炎及毛细支气管炎患儿比例高于支气管肺炎、支气管炎、哮喘急性发作者，与Hall等[12]研究报道相似。本研究还发现，hRSV A、B亚型感染的患儿均以咳嗽、喘息为主要症状，其次为鼻塞流涕、发热、呼吸困难，?6个月患儿占比最高，且随着年龄的增长，患儿所占比例明显降低，提示hRSV 感染与患儿的年龄存在一定的相关性，与其他地区[13-21]的报道相似。此外，本次研究发现，2014、2015年hRSV A、B亚型患儿所占比例无明显差异。钟慧玲等[22]研究发现，1、2、11、12月是hRSV检出高峰，hRSV的检出率与月平均气温、月总日照时间及月平均风速呈负相关，尤其与气温关系最为密切。本研究也发现，11月,次年2月是hRSV感染的高峰期，与其他地区的报道相似[23-24]。 综上所述，hRSV A、B亚型的分布有一定的年龄、月份规律，2014,2015年重庆地区以B亚型hRSV流行为主，且在本地区尚未发现BA株。hRSV A、B亚型均以咳嗽、喘息为主要临床表现。本研究系国内首次尝试对三峡库区hRSV流行病学特征及临床表现特点进行研究分析，研究结果与国内、国际流行情况相似，提示目前三峡大坝蓄水后尚未对hRSV的流行情况产生影响。但本研究时间尚短，今后将继续关注三峡库区hRSV的流行情况。 [参考文献] [1] Neves BJ，Fonseca C，Cardoso M. 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