[知识]干扰素对人甲状腺细胞表面抗原表达的影响

[知识]干扰素对人甲状腺细胞面抗原表达的影响 干扰素对人甲状腺细胞表面抗原表达的影响 干扰素对人甲状腺细胞表面抗原表达的影响 2010-12-15 尤欣 滕卫平 单忠艳 【摘要】 目的 研究干扰素(IFN-α、IFN-γ)及激素对人正常甲状腺细胞表面抗原表达的影响，以探讨IFN-α导致自身免疫性甲状腺病(AITD)的可能机制。方法 应用IFN-α、IFN-γ、促甲状腺激素(TSH)及催乳素(PRL)，刺激体外培养的来自6名正常人的甲状腺细胞，通过免疫荧光染色及流式细胞仪测定其表面抗原—HLA-DR、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、B 7.1和甲状腺过氧化物酶(TPO)的表达。结果 (1)IFN-α明显诱导甲状腺细胞表达ICAM-1、B 7.1和TPO(分别为P,0.01、P,0.01、P,0.05);(2)IFN-γ明显诱导甲状腺细胞表达HLA-DR、ICAM-1，但对B 7.1的表达无促进作用(P,0.01、P,0.01、P,0.05);(3)PRL显著诱导甲状腺细胞表达ICAM-1、B 7.1和TPO(P,0.05、P,0.01、P,0.01)。结论 协同刺激信号对AITD的发生起着关键作用。IFN-α显著诱导甲状腺细胞表达协同刺激信号(B 7.1)和自身抗原TPO，可能是临床应用IFN-α诱致AITD的致病原因之一。PRL在产后甲状腺炎发病和发展中的作用应予以关注。 【关键词】 干扰素 甲状腺细胞 自身免疫 协同刺激信号 甲状腺过氧化物酶 Effect of interferon on surface antigen expression of human thyrocytes YOU Xin,TENG Weiping,SHAN Zhongyan. Department of Endocrinology, The First Affiliated Hospital of China Medical University,Shenyang,110001 【Abstract】 Objective To study the effects of interferons (IFN-α,IFN-γ) on the surface antigen expression of human thyrocytes. Methods The expressions of HLA-DR, ICAM-1, B 7.1 and thyroid peroxidase (TPO) by cultured thyrocytes from six normal persons induced by IFN-α, IFN-γ, TSH and PRL were investigated using immunofluorescence staining with flow cytometer. Results (1)IFN-α significantly stimulated the expression of ICAM-1, B 7.1 and TPO, as compared with those of control group (P,0.01, ,0.01, ,0.05， respectively). (2)IFN-γ markedly enhanced the expression of HLA-DR and ICAM-1, but not B 7.1 (P,0.01, , 0.01, ,0.05, respectively). (3)PRL increased expression of ICAM-1, B 7.1, as well as overexpression of TPO (P,0.05, , 0.01, ,0.01, respectively). Conclusion The thyroid autoimmunity induced by IFN-α is associated with the expression of ICAM-1, B 7.1 and TPO. IFN-γ could not induce the expression of B 7.1, therefore it is not an initiator in AITD. In addition, more attention should be paid to PRL which possibly plays an important role in the initiation and perpetuation of postpartum thyroiditis. 【Key words】 Interferon Thyrocyte Autoimmunity Costimulatory signal Thyroid peroxidase (Chin J Endocrinol Metab, 1999,15:134-137) 干扰素是一组具有生物学作用的蛋白质，它不仅能抗病毒、抗肿 瘤，而且有免疫调节作用。临床广泛应用IFN-α治疗丙型病毒性肝 炎和恶性肿瘤，其可诱发和加重自身免疫性甲状腺病(AITD)的现象也 得到了普遍关注。我们曾在外周血单个核细胞(PBMC)水平进行研究， 发现IFN-α的致病作用可能与抑制性T细胞(Ts)功能低下，B细胞、 巨噬细胞功能亢进有关〔1〕。本文拟从AITD的靶细胞—甲状腺细胞 水平，研究IFN-α对甲状腺细胞表面抗原表达的影响，进一步探讨 IFN-α导致AITD的作用机理。 对象和方法 一、实验对象 甲状腺组织来自6名因创伤而死亡的正常人，死后1小时内取下甲状腺。女性4例，男性2例，年龄为18,56岁。死亡前采取静脉血标本。甲状腺功能(FT3、FT4及rT3)和血清促甲状腺激素(TSH)正常。甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)，甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺TSH受体抗体(TRAb)均阴性。 二、实验试剂 1.刺激因子:IFN-α:来自人类淋巴母细胞，1 000 000U/vial,Sigma;IFN-γ:来自基因工程，50μg，Gibco;TSH:来自牛垂体，10U/vial,Sigma;催乳素(PRL):来自羊垂体，1mg/vial,Sigma。 2.单克隆抗体:FITC或PE标记的抗HLA-DR、CD54(ICAM-1)、CD80(B7.1)单克隆抗体，鼠IgG1对照抗体，羊抗鼠Ig的单克隆抗体，均来自Becton Dickinson(美国)或Serotec(英国)公司。TPO抗体由上海市内分泌研究所陈春荣博士赠送。 三、实验方法 1.甲状腺细胞的制备:将甲状腺组织去掉包膜，剪成1mm×1mm×1mm小块，加入1mg/ml胶原酶和4mg/ml Dispase，于37?水浴消化2小时，其间每隔5分钟轻轻振荡一次。将消化后的悬浊液离心5分钟，1 000转/分。弃上清，加入Hanks'液，经200目尼龙网过滤后洗涤。加入含10%FCS和100U/ml青链霉素的RPMI-1640培养液，接种至75cm2培养瓶中。在37?、5%CO2、95%相对湿度条件下培养6小时后，彻底冲洗以去除未粘附的细胞，待细胞铺成单层时，再次冲洗，加入10mmol/L Hepes和3mg/ml EDTA消化，将消化下的细胞以每孔3×105个接种至24孔细胞培养板(Nude,美国)。细胞生长至融合状态时，加入刺激因子:IFN-α(0.1、1、10、100、1 000U/ml)，IFN-γ(100U/ml)，TSH(10mU/ml)，PRL(10ng/ml)。孵育72小时，用10mmol/L Hepes和3mg/ml EDTA消化后制成悬液。 2.免疫荧光染色:将细胞悬液调整至1×105个细胞/孔，加入96孔锥型底的微量滴定板中，加入冷PBA(等渗磷酸盐缓冲液+0.1%牛血清白蛋白+0.01%叠氮钠)200μl洗涤。(1)直接免疫荧光染色:加入FITC或PE标记的HLA-DR、CD54、CD80和小鼠IgG1(对照)的单克隆抗体，孵育30分钟，4?，避光。经冷磷酸盐缓冲液(PBS，pH=7.40,0.01 mol/L)洗涤二次后，用1%副醛固定。(2)间接免疫荧光染色:将未标记的TPOAb及小鼠IgG1(对照)加入滴定板中，孵育30分钟，4?，避光。用冷PBS洗涤后，加入羊抗鼠Ig-FITC，孵育30分钟，4?，避光。洗涤二次，用1%副醛固定。 3.流式细胞仪测定:将细胞置于FACS管，8小时内上机，每分钟1×104个细胞，每管样品10 000个细胞。观察指标:1×104个细胞的阳性百分比(去除非特异性染色)和荧光强度。