建立一种乳果糖口服液含量的反相高效液相色谱测定法

建立一种乳果糖口服液含量的反相高效液相色谱测定法 本文档由无尘大哥上传至豆丁网 目的：建立一种乳果糖口服液含量的反相高效液相色谱测定法。：氨基柱，以磷酸盐缓冲液-乙腈(19?81) -1为流动相，流速1.8 mLmin，检测器：示差折光检测器。结果：线性范围：50～400 μg,r=0.999 9，回收率为100.0%，RSD为1.0%(n=5)。结论：本方法结果准确，重现性好，为乳果糖口服液提供有效的质 量控制方法。 关键词 反相高效液相色谱法 乳果糖 有关物质 氨基柱 乳果糖口服液是中国药典1995年版新增品种，主要用于治疗肝昏迷， 还可用于治疗慢性功能性便秘。由 于生产工艺条件所限，乳果糖的纯度接近90%，其相关物质，主要为乳糖、半乳糖和果糖。中国药典(1995 ［1］年版)中，检测乳果糖口服液的有关物质及含量测定的方法为高效液相色谱法，采用十八烷基硅烷键合 硅胶为填充剂，乙腈-水(77?23)为流动相，以示差折光检测器测定。但试验明(见色谱图1-A)，该方法不能将乳果糖与其有关物质完全分离。本文采用以氨基键合硅胶为填充剂，乙腈-磷酸盐缓冲液(81?19)为流动相，以示差折光检测器测定，使乳果糖与其有关物质完全分离(见色谱图1-B），达到对乳果糖及其有关物质的质量的有效控制。 高效液相色谱仪，日本岛津LC-6A高压泵，RID-6A检测器，C-R4A色谱工作站，以上由SCL-6A系统控制器联机监控，RHEODYNE 7161型进样阀；METTLER AE 260型电子分析天平。 乳果糖(纯度为100.0%)、果糖、半乳糖、乳糖对照品和乳果糖口服液(规格为5 g?10 mL)，由北京集 爱制药公司提供；乙腈为色谱纯试剂，磷酸二氢钠为分析纯试剂。 色谱柱：Phenomenex,Nucleosil 5 NH 100 A氨基键合硅胶色谱柱(10 μm,250 mm×4.6 mm)；流动相：2 .-1.-1乙腈-0.01 molL磷酸二氢钠溶液(81?19)，用稀磷酸调节pH至6.0；流速：1.8 mLmin；检测器：示差折光检测器；检测灵敏度：0.1 AUFS；柱温：室温；进样量：10 μL。在上述色谱条件下，乳果糖的保留 时间约为17 min，在样品的色谱图中乳果糖与其最近的杂质峰得到基线分离，分离度大于1.5。见图1-B。 图1 中国药典法(A)与本法(B)条件下色谱图 1.果糖 2.半乳糖 3.乳果糖 4.乳糖 .-1mL的对照品溶液，精密量取上述溶液1.25， 取乳果糖对照品适量，精密称定，加流动相制成40 mg 2.5，5.0，7.5，10.0 mL，分别置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别进样10 μL，以乳果糖的量(μg)为横坐标，以乳果糖的峰面积为纵坐标，求得回归方程为： Y=5.182X-38.46 r=0.999 9 .-1结果表明，当进样量为10 μL时，乳果糖在5～40 mgmL浓度范围内，乳果糖的量与峰面积呈良好的线性 关系。 取乳果糖对照品约500 mg、果糖对照品约180 mg、半乳糖对照品约100 mg和乳糖对照品约20 mg，精密称定，置25 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取乳果糖口服液，精 密称取适量(约相当于乳果糖500 mg)，置25 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品 溶液。取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪测定，计算，即得。批号为971018，971021，971007的样品含量(标示量%)测定结果分别为104.5%、103.1%、102.3%，n=2。 精密称取乳果糖口服液适量(约相当于乳果糖250 mg)，置25 mL量瓶中，再分别加入精密称定的乳果 糖对照品约250 mg，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。按色谱条件下方法测定，计算回收率，其平均回 收率为100.0%，RSD为1.0%，n=5，说明辅料对含量测定基本无干扰，方法可行。 .-1 取浓度为20 mgmL的供试品溶液，进样5次，计算峰面积的RSD值，结果小于1%。 色谱条件的选择 .-17.1.1 流动相的选择 经试验，以乙腈与0.01 molL磷酸二氢钠溶液二元系统作流动相，其中乙腈的比 .-1例对乳果糖的保留时间及与杂质的分离程度有一定的影响，经比较，选定乙腈-0.01 molL磷酸二氢钠溶液(81?19)为流动相的配比。二元流动相系统的比例可根据色谱柱的具体情况进行适当调节。乙腈量的增 加与保留时间的增加成正比。 .-17.1.2 流动相的pH对色谱行为的影响 在乙腈-0.01 molL磷酸二氢钠溶液(81?19)的条件下，以磷酸 调节pH，结果发现，样品的保留时间随pH的升高而增加，乳果糖与相近有关物质的分离度随pH的升高而增加，但pH的升高到一定程度，将对色谱柱有破坏作用，当pH为6.0时，分离效果较佳，样品的保留时 间及测定时间适中，且能有效地保护色谱柱。 7.1.3 柱温对色谱行为的影响 经试验表明，样品的保留时间随柱温的升高而略有减少，分离度略有增加， 通过试验认为，室温条件下，能保证分离效果，又可降低对仪器条件的要求。 7.1.4 分离柱的选择 本文选择了对糖类分离首选的氨基键合硅胶色谱柱作为分离柱。对国内、外数种牌 号的分离柱进行比较，结果表明，乳果糖在不同牌号的氨基键合硅胶柱上均可达到药典的分离度，必 要时可适当调整二元流动相的比例。 溶液稳定性试验 照本法配制的对照品溶液及供试品溶液在24 h之内进行测定，溶液稳定，结果无显著变化。 系统适用性试验 理论塔板数按乳果糖峰计算应不低于2 000，同一对照品溶液重复注射5次，峰面 积的RSD小于1%，乳果糖峰的拖尾因子小于1.5，与其最近杂质峰的分离度大于1.5。 周立春（北京市药品检验所 100035） 纪宏（北京市药品检验所 100035） 参考文献 1，中国药典.1995.二部：397