调经祛斑胶囊质量标准改进

调经祛斑胶囊质量改进 作者:谢志宏～何燕～倪庆纯～徐孟文～聂金媛～罗建 春 【摘要】 目的 改进调经祛斑胶囊的质量标准。 方法 采用显 微镜法对处方中红花、手参、白芍进行显微鉴别,用薄层色谱法对女 贞子、当归、枸杞子、黄芪进行鉴别,用高效液相色谱法测定制剂中 芍药苷的含量。 结果 显微鉴别、薄层色谱鉴别专属性强,建立的测 定芍药苷含量的HPLC法符合研究要求。 结论 该方法简便、准确、 重现性好～可作为控制调经祛斑胶囊质量标准的方法。 【关键词】 调经祛斑胶囊 手参 当归 枸杞子 黄芪 质量标准 Abstract:Objective To Improve the quality standard of Tiaojingquban capsules. Methods Safflower, Conic gymnadenia Rhizome, Radix Paconiac Alba in the prescription were identified under microscope. Ligustrum lucidum Ait, Chinese Angelica, barbary wolfberry fruit, Radix Astragali were identified by TLC. The content of paeoniflorin was determined by HPLC. Results The characteristic identified by TLC and microscopy was distinct and highly specific. Conclusion The method is convenient, accurate and reproducible. It can be used effectively for the quality control of the capsules. Key words:Tiaojingquban capsules; Conic gymnadenia Rhizome; Chinese Angelica; barbary wolfberry fruit; Radix Astragali; quality standard 调经祛斑胶囊由白芍等15味药材组成～用于治疗气血不足、 气滞血瘀等证。研究发现原调经祛斑胶囊质量标准,1,中～当归显 微鉴别特征不明显～当归和枸杞子TLC鉴别专属性和重现性较差～白 芍含量限度低～且无主药黄芪的鉴别。根据组成药味的特点～本文采 用显微鉴别对方中白芍、当归、手参及薄层色谱法对处方中女贞子、 当归、枸杞子、黄芪进行定性鉴别～结果分离度好～专属性强,采用 高效液相色谱法对白芍中芍药苷进行含量测定～测定结果可靠、准确、 专属性强～可有效控制本品质量。 1 仪器与材料 DIONEX P680高效液相色谱仪、HU 10260B超声清洗仪,戴 安公司,,调经祛斑胶囊、黄芪对照药材(广州白云山中药厂提供), 阿魏酸,110773 991,、齐墩果酸,110709 200403,、芍药苷 (110736 200422) 等对照品及枸杞子,121072 200404,对照药 材均购自中国药品生物制品检定所,乙腈为色谱纯,乙醇等为纯。 2 方法与结果 2.1 定性鉴别 2.1.1 白芍、红花,2,103、手参显微鉴别 取本品～置显微镜下观察:花粉粒类圆形、椭圆形或橄榄形～直径约60 μm～具3 个萌发孔～外壁有齿状突起,红花,,草酸钙针晶束存在于黏液细胞中或散在～针晶长20，90 μm,手参,,草酸钙簇晶直径11，35 μm～存在于薄壁细胞中～常排列成行～或一个细胞中含数个簇晶,白芍,。结果见图1。 2.1.2 当归TLC鉴别,2,446-447 取本品20粒～研细～加甲醇30 mL～加热回流30 min～放冷～滤过～滤器用5 mL甲醇洗涤1次～合并滤液与洗液～蒸干～残渣加水50 mL～加热使溶解～放冷～移至分液漏斗中～用乙醚振摇提取3次 (20 mL、20 mL、15 mL)～合并乙醚液～用质量分数5%碳酸氢钠溶液振摇提取3次～每次15 mL～弃去乙醚液～碱液用醋酸乙酯15 mL洗涤～弃去醋酸乙酯液～碱液用盐酸调节pH值至2，3～用甲苯15 mL洗涤～弃去甲苯液～继用乙醚提取3次～每次15 mL～挥去乙醚～残渣加甲醇0.5 mL使溶解～作为供试品溶液。另取阿魏酸对照品～加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶 液～作为对照品溶液。吸取上述2种溶液各5 μL～分别点于以羧甲基纤维素钠为黏合剂的同一硅胶G薄层板上～以甲苯 冰醋酸 甲醇,体积比30?1?3)为展开剂～展开～取出～晾干～置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中～在与对照品色谱相应的位置上～显相同的荧光斑点,阴性样品无干扰～见图2,A,。 2.1.3 枸杞子TLC鉴别,2,508 取除枸杞子以外的其他14味药材按处方比例制得的阴性样品～按“2.1.2”项下“供试品溶液的制备”方法制备阴性样品溶液。取枸杞子对照药材1 g～同法制成对照溶液。吸取“2.1.2”项下供试品溶液与对照药材溶液、阴性样品溶液各2 μL～分别点于以羧甲基纤维素钠为黏合剂的同一硅胶G薄层板上～以甲苯 乙醚 冰醋酸(体积比10?10?0.1)为展开剂～取出～晾干～置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中～在与对照药材色谱相应的位置上～显相同的荧光斑点,阴性样品无干扰。见图2,B,。 2.1.4 女贞子TLC鉴别 按原标准,1,进行鉴别～色谱图见图2,C,。 2.1.5 黄芪TLC鉴别 取本品30粒～加水30 mL～煮沸0.5 h～加入5倍量乙醇过滤～滤液挥干～加水30 mL微热使溶～冷却后移入分液漏斗中～用水饱和正丁醇萃取3次～每次20 mL～正丁醇液合并～ 蒸干～用体积分数70,乙醇2 mL溶解～作为供试品溶液。取黄芪对照药材3 g～同法制备成对照药材溶液。取除黄芪以外的其他14味药材按处方比例制得的阴性样品～同法制备成阴性样品溶液。吸取上述溶液各 5 μL～分别点于同一硅胶G薄层板上～以甲苯 乙酸乙酯,体积比7?3,为展开剂～展开～取出～晾干～喷以碳酸钠试液～置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中～在与对照品色谱相应的位置上～显相同颜色的斑点,阴性样品无干扰～见图2,D,。 A,当归,:1.样品a;2.阿魏酸对照品;3.样品a; 4.阴性 B,枸杞子,:1.阴性;2.枸杞子对照药材;3.样品a;4.样品b C,女贞子,:1.阴性;2.样品a;3.女贞子对照药材 4: 样品b D,黄芪,:1.阴性;2.样品a;3.样品b;4.黄芪对照药材 图2 调经祛斑胶囊TLC鉴别图,略, Figure 2 TLC Chromatograms of Tiaojingquban capsule 2.2 含量测定 选择本品中白芍主要有效成分芍药苷为含量测定指标,3-4,。 2.2.1 色谱条件 色谱柱:Diamonsil C18,ID 4.6 mm×150 mm～ 5 μm,,流动相:乙腈 0.1%磷酸溶液,体积比14?86,,流速:1.0 mL〃min-1,检测波长:230 nm,柱温:室温,进样量:10 μL。 2.2.2 测定方法 取本品胶囊20粒～精密称定～研细～混匀～取0.9 g精密称定～置50 mL量瓶中～加稀乙醇35 mL～超声,功率:240 W～频率45 kHz,30 min～放冷～加稀乙醇至刻度～摇匀～滤过～取续滤液作为供试品溶液。精密称取芍药苷对照品适量～加稀乙醇制成60 μg〃mL-1的溶液～得对照品溶液。 2.2.3 线性关系考察 精密称取干燥至恒重的芍药苷对照品6.25 mg置25 mL量瓶中～加稀乙醇溶解并稀释至刻度～分别吸取1、2、4、6、8 mL置10 mL量瓶中～加稀乙醇至刻度～进样10 μL～记录色谱图。以芍药苷浓度为横坐标、峰面积为纵坐标作图。得回归方程式为Y=0.1956X-0.4767,r=0.999 8～n=5,～芍药苷进样量在0.25，2.0 μg之间线性关系良好。 2.2.4 专属性 按处方比例取除白芍外其他药材～按制法制得空白制剂～按供试品溶液制法制成空白溶液。将空白、对照溶液分别注入液相色谱仪～结果见图3～可知其他成分无干扰。 2.2.5 精密度试验 取对照品溶液～连续进样5次～测定峰面积～计算RSD值为0.4%。 2.2.6 重复性试验 取本品,批号041021,测定其芍药苷含量～平行操作6份。平均含量为1.08 mg〃胶囊-1～RSD值为1.0%。 2.2.7 加样回收率试验 取芍药苷对照品15.58 mg置100 mL量瓶中～加稀乙醇溶解并稀释至刻度～摇匀作为贮备液。取已知芍药苷含量的样品适量～分别加入贮备液10 mL,相当于芍药苷对照品1.558 mg,～置50 mL量瓶中～测定含量～计算回收率为99.8%～RSD=1.5%(n=9)。 图3 调经祛斑胶囊高效液相色谱图,略, Figure 3 HPLC chromatograms of Tiaojingquban capsules 2.2.8 稳定性试验 取本品供试品溶液～分别于0、2、4、6、12、24 h测定峰面积～计算RSD值为1.2,～表明供试品在24 h稳定。 2.2.9 含量限度和含量测定结果 对10批样品的含量进行了测定～结果分别为0.80、1.12、0.86、0.93、1.09、1.04、0.78、0.86、0.91、1.15 mg〃胶囊-1。确定本品含白芍以芍药苷,C23H28O11,计不得少于0.75 mg〃胶囊-1。 3 讨论 3.1 显微鉴别 原质量标准中当归显微鉴别特征不明显～考虑该标准中已收载当归的TLC鉴别～故将当归显微鉴别删除～同时参考中国药典增加红花显微鉴别。 3.2 当归的TLC鉴别 原质量标准中是通过检定当归中的挥发性物质来对当归进行鉴别的。实验发现～在与当归对照药材所显荧光点相同的位置上～阴性也有较明显荧光斑点～改换多种展开剂进行展开均无改进。经研究发现～是胶囊剂中的女贞子药材对其存在干扰。阿魏酸为当归有效成分之一～参考中国药典方法改用阿魏酸进行鉴别试验～结果薄层板上杂斑较多～易对鉴别产生干扰。将方法中2,碳酸钠溶液改为5,碳酸氢钠溶液～得到了较满意的效果。 3.3 枸杞子的TLC鉴别 原质量标准中枸杞子用水提取～乳化现象十分严重～难以分层～ 且阴性样品有干扰～对照药材的荧光斑点Rf值较大,约0.9左右,。将供试液制备方法和展开剂进行改进后～TLC图谱中对照药材溶液所显示斑点的数量与原方法相同～Rf值大大降低～阴性样品溶液无干扰。 3.4 黄芪的TLC鉴别 本鉴别为增加项～黄芪含有黄芪甲苷,2,、多糖、皂苷、黄酮、氨基酸等多种有效成分～经过研究比较～确定以黄酮为鉴别特征成分进行鉴别。 【参考文献】 ,1, 国家药品监督管理局. WS—10710(ZD—0710)—2002国家药品标准,S,. ,2, 国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部,M,. 北京:化学工业出版社, 2005. ,3, 杨秋虹, 杨岗, 蔡越秀.RP HPLC测定芍甘颗粒中芍药苷的含量,J,. 中成药, 2002, 24(1):27-29. ,4, 钟美霞～肖佳尚～劳海燕.HPLC法测定通络胶囊中芍药 苷的含量,J,.广东药学院学报,2007,23(3):252-253.