HPLC法测定加味八珍益母颗粒中盐酸水苏碱的含量

HPLC法测定加味八珍益母颗粒中盐酸水苏碱的含量 HPLC法测定加味八珍益母颗粒中盐酸水 苏碱的含量 中国药事2009年第23卷第11期1113 HPLC法测定加昧八珍益母颗粒中盐酸水苏碱的含量 洪梅,施法(吉林省食品药品检验所,长春130033;辽宁省食品药品检验所) 摘要:目的建立加味八珍益母颗粒中盐酸水苏碱含量的测定.方法采用HPLC 法,强酸型阳离 子交换色谱柱,流动相为0.05mol?g1磷酸二氢钾溶液一三乙胺(100:0.1)(磷酸调节 pH值2?6),检测 波长为190nm.结果盐酸水苏碱在0.8384~8.384#g内,峰面积与进样量呈良好的线 性关系,r=0?9999 (一6);平均回收率:98.2,RSD=1.37%(n一6).结论测定方法准确,重现性好,为加味八 珍益母 颗粒的质量控制提供了依据. 关键词:加味八珍益母颗粒;盐酸水苏碱;HPLC 中图分类号:R927.2iR284.2文献标识码:A文章编号:1002—7777(2009)11—1113— 03 DeterminationofStachydrineHydrochlorideinBazhenYimuGranulesbyHPLC HongmeiandShifa(JilinProvincialInsitituteforFoodandDrugControl,Changchun130033;Liaoning InsitituteforFoodandDrugContro1) AB:1TRACT:ObjectiveToestablishamethodtodeterminationofstachydrinehydrochlorideinBazhen YimuGranules.MethodsThesamplesweredeterminedbyHPLConastrongacidiccationexchangeresin columnwith0.05tool?i-solutionofpotassiumdihydrogenphosphate-trithylamine(100:0.1 )(adjustto pH2.6withphosphoricacid)asthemobilephase.Detectivewavelengthwasat190nn~Result sThe contentofstachydrinehydrochlorideonHPLCwas1inearintherangeof0.8384,8.384ug(r一0.9999,n 一6).Theaveragerecoverywas98.2,andRSDwas1.37(一6).ConclusionsThemethodiSaccurate andrepeatable.ThemethodcanbeusedforcontrolofBazhenYimuGranules. KEYWoRDS:BazhenYimuGranules;stachydrinehydrochloride;HPLC 加味八珍益母颗粒是由益母草,赤芍等15昧 中药经加工制成,用于妇女气血不足,月经不调 (经期后移或经行不畅,量少,经闭),产后恶露不 净,腹痛等.益母草中的主要成分为盐酸水苏碱. 现有文献中益母草的定量方法主要为雷氏盐剩余比 色法测定益母草中总生物碱量的定量方法(以盐酸 水苏碱为对照)及TICS法,其中雷氏盐剩余比 色法u供试品制备过程复杂,干扰因素多,不利 于准确的测定指标成分的含量;TLCS[3为一种离 线技术,其各步操作基本上是在开放体系中进行, 因此影响定量结果的因素较复杂,准确性差,为了 有效控制制剂的质量,本文采用高效液相色谱法测 定加味八珍益母颗粒中君药益母草中盐酸水苏碱的 含量.该方法系统适用性强,为控制加味八珍益母 颗粒的质量提供了依据. 1仪器与试药 WATERS1525高效液相色谱仪(美国); WATERSEmpower2色谱工作站(美国). 盐酸水苏碱对照品(中国药品生物制品检定 所,批号:110712—200405);加味八珍益母颗粒 (辽宁某制药有限公司,批号:20070301, 20070302,20070303);水为三次重蒸馏水,其余 试剂均为分析纯. 2方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱:WatersSpherisorb强酸型阳离子交 换色谱柱(4.6ram×250mm,5m);柱温: 3OoC;检测波长:190nm;流速1.0mL?rain; 作者简介:洪梅,本科,副主任药师;Tel:(0431)87722552;Email:hongmei— l971@163.corn 1114中国药事2009年第23卷第1l期 流动相:0.05mol?L磷酸二氢钾溶液一三乙胺 (100:0.1)(磷酸调节pH值至2.6);进样量: 10mL~理论板数按盐酸水苏碱峰计算应不低于 4000,分离度大于1.5. 2.2供试品溶液制备 取装量差异项下的本品内容物,研细,取约 0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加乙醇 50mL,称定重量,超声处理(功率300W,频率 50kHz)30min,放冷,再称定重量,用乙醇补足 减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液 20mL,置蒸发皿中,蒸干,残渣加少量乙醇使溶 解,加于活性炭一中性氧化铝柱(活性炭:氧化铝 一1:3,活性炭60~100目,氧化铝100~150目, 内径1.5cm,活性炭在上,湿法上柱),用乙醇洗 脱,收集洗脱液约80mL,蒸干,残渣加流动相溶 解,并转移至5mL量瓶中,加流动相稀释至刻度, 摇匀,即得. 2.3对照品溶液的制备 精密称取盐酸水苏碱对照品10.01mg,置 50mL量瓶中,加乙醇至刻度,摇匀,制成每1mL 含盐酸水苏碱0.2002mg的溶液,即得. 2.4阴性样品溶液的制备 按处方中各药味(益母草除外)及辅料的比例 制成阴性样品,再按供试品溶液制备方法制备阴性 对照溶液.吸取阴性样品溶液,对照品溶液及供试 品溶液各10L,注入高效液相色谱仪,结果阴性样 品溶液色谱图在与对照品色谱图相同保留时间处未 显色谱峰,故认为阴性对照无干扰.见图1. a.对照品溶液;b.供试品溶液;C.阴性溶液;1.水苏碱. 图1加昧八珍益母颗粒HPLC色谱图 2.5方法学考察 2.5.1线性关系考察 精密称取盐酸水苏碱对照品10.48mg,置 25mL量瓶中,加乙醇制成每1mL含盐酸水苏碱 0.4192mg的溶液.分别精密吸取盐酸水苏碱对照 品溶液2,5,8,10,15,20tLL,注入液相色谱 仪,测定峰面积,以对照品进样量()为横坐标, 以峰面积为纵坐标,绘制曲线,计算回归方程: Y一9.61447×10X+1.2513×10.r=0.9999 结果明,盐酸水苏碱在0.8384,8.384t~g范围 内,线性关系良好. 2.5.2精密度试验 精密吸取同一供试品溶液10tLL,连续进样6 次,测定峰面积,测定结果为:519836,526412, 519452,520364,520314,518740,RSD一 0.54,结果表明精密度良好. 2.5.3稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液10t~L,在0,2,4, 6,8,10h分别进样,测定峰面积,测定结果为: 519836,519874,517858,516875,519785, 516247,RSD=0.32.结果表明,供试品溶液在 10h内稳定. 2.5.4重复性试验 81O1214'6帅_n 取同一批号样品研细,取约0.5g,精密称定, 共取6份,按已确立的方法测定,测定结果为:平 均每袋含盐酸水苏碱为65.09rag,RSD为1.29/6 (一6),表明其重复性良好. 2.5.5回收率试验 精密称取已知含量的同一批号(含量 6.4117mg?g.)样品粉末0.25g,分别精密加入 盐酸水苏碱对照品溶液(0.1621mg.mL)各 10mL,再精密加入乙醇40mL,按供试品溶液的 制备方法制备,再按上述色谱条件测定,计算回收 率,结果见表1. 表1回收率试验结果 2.5.6样品含量测定结果 按"2.2"项下操作,在上述色谱条件下进样 分析,测定结果见表2.(下转第1122页) ???吖. 一 1122中国药事2009年第23卷第ll期 0.003tLg.mL. 3讨论 3.1样品前处理试验 采用同一批号样品分别按不经任何消解,微波 消解,湿法消解的方法进行处理,平行做2份,并 同法做空白溶液,测定结果分别为0.149t~g?mL >0.03g?mL>未检出,微波消解>湿法消解> 不消解,采用微波消解测得含钙残留量最高,故采 用微波消解法作为样品前处理方法. 3.2加入抗抑制剂试验 据资料报道_1],珍珠层粉含碳酸钙9O以上, 有机物约0.34,还含有少量的铁,镁,硅酸盐, 硫酸盐,磷酸盐和氯化物等.把锶作为抗干扰抑制 ,镁,铁,磷酸根, 剂加入,可以消除钡,钾,钠 硫酸根等对钙测定的影响[2],本试验中,对加入锶 的必要性进行了实验.结果加锶的样品2份测定精 密度比不加锶的样品稍好,加锶与不加锶测得的结 果相近,但加样回收率很低,仅为45,故不考 虑加锶处理样品. 3.3加入增敏剂试验 据资料报道l_3],测定钙时加入镧,可消除铁, 镁,硅酸盐,硫酸盐,磷酸盐和氯化物等的干扰, 并能提高吸收值,增加测定灵敏度.本试验中,对 加镧的可行性及用量进行了试验.结果加镧的样品 测得的吸收值比不加镧的样品高,故考虑在供试溶 液中加镧提高测定灵敏度.镧加入量试验,取样品 微波消解后加入硝酸镧制成镧含量分别为0.5, 1.0,1.5,2.0mg?mL的溶液进行测定,结果分 别为:0.183,0.212,0.156,0.190gg?mE,, 结果表明加入镧量为lmg?mL.时测得含钙残留 量最高.故在样品消解后加入3硝酸镧溶液2mL 使供试液含镧量为lmg?mL. 残留量的限度 3.4钙 在珍珠明目滴眼液的质量标准中,没有钙残留 量测定项目,为了保证滴眼液的稳定性,加强澄明 度的控制,文中拟定了钙残留量的限度,可作为质 量标准中的一项指标.该方法专属性强,重现性 好,平均回收率较高,结果满意,可作为珍珠明目 滴眼液中钙残留量的质量控制方法. 参考文献: Ell江苏新医学院编.中药大辞典()EM].上海:上海 科学技术出版社,1977:1495—1496. 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