HIV感染者口腔白色念珠菌和光滑念珠菌的毒力研究道

HIV感染者口腔白色念珠菌和光滑念珠菌的毒力研究道 南方医科大学,,,,级硕士学位 …,感染者口腔白色念珠菌和光滑念珠茵的毒力研究，, ,,,,, ,,,,,,,;, ,, ,,,,,,, ,,,,;,,, ,,, ,,,,,,, ,,,,,,,, ,, ,,, ,,,, ;,,,,, ,, ,，,,,,,,;,,, ,,,,,,,,课来源: 卫生厅科学基金资助项目 专 业 名 称 口腔临床医学 学位申请人 董俊英 指 导 教 师 徐平平教授 罗 刚教授 答辩委员会主席 吴补领教授 答辩委员会成员 陈松龄教授 梁焕友教授 唐 亮教授 黄建生教授 论文评阅人 廖贵清教授 夏 娟教授 曾雄群教授 , ,, ,年,月, ,日 广州 ,， ， ， ， ， ， ,,, ，，， ，, ？, 硕士学位论文 ,, ,,, , ,,…,感染者口腔白色念珠菌和光滑念珠菌的 毒力研究 硕士研究生:董俊英 指导教师:徐平平教授 罗 刚 教授 摘 要 艾滋病是获得性免疫缺陷综合征(,;？,,,,, ,,,,,,,,,,;,,,;, ,,,,,,,,，,，,,)的简称，是由人类免疫缺陷病毒(,,,,, ,,,,,,,,,,;,,,;, ,,,,,，,，,)感染引起的。,，,主要侵犯、破坏,,,，淋巴细胞，使机体细胞免疫功能受损，最终并发各利,严重的机会性感染和肿瘤而导致死亡。,,,,年，美国发现了,例原因不明的咽喉部严重霉菌感染、体重减轻显著的患者，经多方治疗无效后死亡。后证实其为首例,，,,患者。,,,,年,月美国疾病控制中一，，，，(,,,)正式以“获得性免疫缺陷综合征(,;？,,,,, ,,,,,,,,,,;,,,;, ,,,,,,,,，,，,,)’’为该病命名。,,,淋巴细胞是,，,感染的靶细胞。,，,复制的数量越多，破坏的,,,细胞越多，余留的,,,细胞就越少，患者的免疫力就越差。,,,细胞计数与,，,载量两者均可以独立地预测,，,感染者的临床进程和生存期，广泛用于评估,，,感染的进程、豁测抗病毒治疗期间病毒血症的变化。 口腔念珠菌病足,，,感染者的常见并发症，多数学者认为口腔念珠菌病的出现是免疫抑制的先兆，预示疾病即将从,，,感染进入到,，,,阶段，是早期发现和诊断,，,,的重要线索。在,，,感染者病情发展过程中口腔念珠菌病发生率高达,,,。其,,,白色念珠菌是最常见的分离株。 然而，由于免疫抑制治疗药物和广谱抗真菌剂的普遍应用，光滑念珠菌引 中文摘要 的黏膜和系统性感染的发生率明显增多，已成为继白色念珠菌之后，首位最 见的导致念珠菌病的菌种。,,,,,,;,,,等,,,,”,’,,,,年检测乌克兰,，,感染者分离的酵母样菌，发现非白色念珠菌增加到,,(,,，光滑念珠菌(,,(,,)为优势菌种。在以往研究中，我们收集了,,例,，,感染者的口腔含漱液，有,,例培养出念珠菌，其巾有,,例可分离出白色念珠菌，,,例可分离出光滑念珠菌，同时分离出白色念珠菌和光滑念珠菌的有,,例。由此可见，在,，,感染者中，除了主要的白色念珠菌外，光滑念珠菌的检出率也在增高，且可以单独存在，也可与白色念珠菌混合存在。 过去多数研究认为,个个体仅有,利,菌株感染，随着念珠菌培养技术的提高，可同时快速鉴定不同菌种，证实混合感染的存在。周菊芬等调查,,名正常人群和,,,例,,腔念珠菌病患者,腔念珠菌情况，发现正常人群混合带菌率达,,(,,，，,,,腔念珠菌病患者为,,(,,。,,等认为白色念珠菌和光滑念珠菌共同导致的感染比单独由白色念珠菌引起的感染更不容易治愈。同样,,,,,,,等也发现,，,感染者和痛症患者的白色念珠菌混合光滑念珠菌感染的相关,,咽念珠菌病比白色念珠菌单独导致的感染更严 重和更难治疗。 ,，,感染者易感染,,腔念珠菌病的机制较复杂，除宿主免疫因素外，念珠菌本身的毒力变化也可能参与致病过程。与念珠菌相关的毒力因素主要有粘附件、侵袭性的酶、溶血性、形态发生和型转换等。念珠菌通过粘附来识别定植;通过其利于侵入的侵袭性酶而破坏黏膜完整性，增强毒力;通过溶血性获得营养;通过形态发生及酵母相和菌丝相之间的转换而使其利于侵入宿主，并对该微生物的适应性有利。 ,，,感染者,,腔白色念珠菌和光滑念珠菌混合感染导致的,,咽念珠菌病更难治是否与念珠菌的毒力有关值得关注。此外，从细菌在宿主定植的机制上看，宿主的免疫状况和细菌的毒力亦密切相关。而光滑念珠菌的检出率逐渐增加是否与它的毒力增强相关，它是否具有比白色念珠菌更强的致病力，这也是本实验关注的问题。因此木文从是否混合感染和,,,细胞计数这两个因素出发，选取,，,感染者口腔白色念珠菌和光滑念珠菌各,,株，研究并比较其对颊黏膜上 硕士学位论文皮细胞(,,,,, ,,;;,, ,,,,,,,,,, ;,,,,，,,,,)的粘附性、体外磷脂酶活性和溶血性，来探讨其毒力的变化规律。,(目的: 复苏冻存的,，,感染者口腔白色念珠菌和光滑念珠菌临床分离株，从感染类型和,,,细胞计数两因素研究并比较其对,,,,的粘附性、体外磷脂酶活性和溶血性，探讨不同菌种、机体免疫力、感染类型与念珠菌毒力之间的关系。,(: 从冻存的菌株中挑选白色念珠菌,,株。单一白色念珠菌感染的,,株为单一感染组，其中,,,细胞计数,,,,个,,,,的菌株,,株，,,,细胞计数,,,,个,,,,的菌株,,株;与光滑念珠菌混合感染的,,株为混合感染组，其中,,,细胞计数,,,,个,,,,的菌株,,株，,,,细胞计数,,,,个,,,,,的菌株,,株。从冻存的菌株巾挑选光滑念珠菌,,株。单一光滑念珠菌感染的,,株为单一感染组，其中,,,细胞计数,,,,个,,,,的菌株,,株，,,,细胞计数,,,,个,,,,的菌株,,株;与白色念珠菌混合感染的,,株为混合感染组，其巾,,,细胞计数,,,,个,,,,的菌株,,株，,,,细胞计数,,,,个,,,,的菌株,,株。 将(,,”,保存的,，,感染者,腔白色念珠菌和光滑念珠菌临床分离株复苏，并接种到沙保琼脂培养基上，,,?培养,,””,, ,。 (,)念珠菌对,,,,的粘附件实验 ,(, ,,菌悬液和,(, ,, ,,,,液混匀，,,?水浴振荡, ,，,,岬的微孔滤膜过滤，,,,冲洗，置于载玻片上晾干，进行革兰氏染色。计算每,,,个,,,,上粘附的念珠菌个数，用,值表示。 (,)蛋黄培养基测定磷脂酶活性 将,,“,菌悬液滴于蛋黄培养基表面，,,。,培养,, ,后观察结果。磷脂酶阳性的菌株在蛋黄培养基上的菌落周围会形成一个与菌落同圆心的沉淀圈(环)，测定菌落直径和总直径(菌落，沉淀圈)。用,,值表示磷脂酶的活力，,,值,菌落直径,总直径。 中文摘要 (,)溶血性的测定 将,,“,菌悬液滴于羊血培养基上，,,。,、,,,,,培养,, ,。溶血性阳性的菌株，在透射光下观察菌落周围，可观察到半透明的与菌落同圆心的溶血环，测定菌落直径和总直径(菌落，溶血环)并计算苎 甘 喝苎 甘 骄 渲本叮 苤本丁,常 峁?(,)念珠菌对,,,,的粘附性结果 白色念珠菌粘附性结果:经析因方差结果显示是否混合感染和,,,细胞计数两因素间无交互作用(户,(,,,，,,,(,,,)，只需分析主效应。单一感染组和混合感染组对,,,,的粘附性差异有统计学意义，白色念珠菌混合感染组比单一感染组粘附性强(,,,,(,,,，,,,(,, ,):不同,,,水平间差异无统计学意义(庐,(,,,，,,,(,,,)。 光滑念珠菌粘附性结果:经析因方差分析结果显示是否混合感染和,,,细胞计数两因素间无交互作用(户,(,,,，,,,(,,,)，只需分析主效应。单一感染组和混合感染组对,,,,的粘附性差异有统计学意义，光滑念珠菌混合感染组比单一感染组粘附性强(,,,,(, ,,，,,,(,,,);不同,,,水平间差异有统计学意义，,,,细胞计数低组比,,,细胞计数高组粘附性强(严,(,,,，,,,(,,,)。 白色念珠菌和光滑念珠菌对,,,,的粘附性比较结果:当感染类型为单一感染时，存在交互效应(户,(,,,，,,,(,,,)，需分析单独效应。,,,细胞计数不同水平上，光滑念珠菌的粘附件均高于白色念珠菌(尸,,(,,):当感染类型为混合感染时，两因素间无交互效应(户,(,,,，,,,(,,,)，光滑念珠菌的粘附性高于白色念株菌(户,(,,,，,,,(,,,);当,,,细胞计数,,,,个,,,,时，两因素问无交互效应(,,，(,,,，,,,(,,,)，光滑念珠菌的粘附性高于白色念株菌 (,,,,,(,,,，,,,(,,,)。当,,,细胞计数,,,,个,,,,时，两因素间无交互效应 (,,,,,(,,,，,,,(,,,)，光滑念珠菌粘附性高于白色念株菌(庐,,(,,,，,,,(,,,)。总之无论是单一感染还是混合感染，无论是,,,细胞计数,,,,个,,,,还是,,,细胞计数,,,,个,,,,，光滑念珠菌对,,,,的粘附性均高于白色念珠菌。 ，, 硕士学位论文 (,)蛋黄培养基测定体外磷脂酶活性结果 白色念珠菌体外磷脂酶活性:,,株白色念珠菌均为磷脂酶阳性。经析因方差分析，结果显示是否混合感染和,,,细胞计数两因素之间无交互作用 (户,(,,,，,,,(,,,)，只需分析主效应。白色念珠菌单一感染组和混合感染组磷脂酶活性差异有统计学意义(庐,(,,,，,,,,(,,,)，白色念珠菌混合感染组比单一感染组磷脂酶活性高;不同,,,水平间差异无统计学意义(,,,(,,,，,,,(,,,)。 光滑念珠菌体外磷脂酶活性:,,株光滑念珠菌均为磷脂酶阳性。是否混合感染和,,,细胞计数这两因素之间存在交互效应(,,,,(,,,，,,,(,,,)，需进行单独效应分析。当感染类型为单一感染时，显示,,,不同水平间无差异 (，:,(,,,，,,,(,,,)，感染类型为混合时，,,,细胞计数低组磷脂酶活性显著高于,,,细胞计数高组(户,(,,,，,,,(,,,);当,,,细胞计数高时，不同感染类型问无差异(，,,(,,,，,,,(,,,)，当,,,细胞计数低时，混合感染组磷脂酶活性显著高于单纯感染组(，,, ,(,,,，,,,(,,,)。 白色念珠菌与光滑念珠菌磷脂酶活性比较结果:当感染类型为单一感染时，菌种和,,,细胞计数水平之间不存在交互效应(产,(,,,，,,,(,,,)，光滑念珠菌的磷脂酶活性高于白色念珠菌(户,(,,,，,,,(,,,);当为混合感染时，存在交互效应(庐,,(,,,，,,,(,,,)，需分析单独效应，不同,,,细胞计数水平上，高时，白色念珠菌和光滑念珠菌体外磷脂酶活性无差异(，,,(,,,，,,,(,,,)，低时，光滑念珠菌的磷脂酶活性高于白色念珠菌(户,(,,,，,,,(,,,);当,,,细胞计数,,,,个,,,,时，存在交互效应(产,,(,,,，,,,(,,,)，需分析单独效应。不同感染类型，白色念珠菌和光滑念珠菌的磷脂酶活性均无差异(脸,(,,);,,,细胞计数,,,,个,,,,时，存在交 互效应(,,,(,,,，,,,(,,,)，需分析单独效应。不同感染类型，单一感染时，光滑念珠菌和白色念珠菌的磷脂酶活性无统计学意义(,,,(,,,，,,,(,,,)，混合感染时，光滑念珠菌磷脂酶活性高于白色念珠菌(,,,(,,,，,,,(,,,)。 (,)溶血性的测定 , 中文摘要 白色念珠菌溶血性结果:,,株白色念珠菌均为溶血性阳性，且均有,,,,,溶血和,,,,溶血。经析因方差分析，结果显示是否混合感染和,,,细胞计数这两因素之间无交互效应(产,(,,,，,,,(,,,)，只需分析主效应。不同感染类型间白色念珠菌的溶血活性无统计学意义(庐,(,,,，,,,(,,,);不同,,,细胞计数水平间无统计学意义(,,,,(,,,，,,,,(,,,)。 光滑念珠菌溶血性结果:,,株光滑念珠菌均为溶血性阳性，且均有,,,,,溶血和,,,,溶血。经析因方差分析，结果显示是否混合感染和,,,细胞计数这两因素之间无交互效应(产,(,,,，,,,(,,,)，只需分析主效应。不同感染类型间光滑念珠菌的溶血活性无统计学意义(庐,(,,,，,,,(,,,);不同,,,水平间无统计学意义(庐,(,,,，,,,(,,,)。 白色念珠菌和光滑念珠菌的溶血性比较结果:当单一感染时，无交互效应 (庐,(,,,，,,,(,,,)，光滑念珠菌的溶血性高于白色念珠菌(,,， ,(,,,，,,,(,,,);当混合感染时，无交互效应(产,(,,,，,,,(,,,)，光滑念珠菌的溶血性高于白色念珠菌(庐,,(,,,，,,,(,,,);,,,细胞计数,,,,个,,,,时，无交互效应(严,(,,,，,,,(,,,)，光滑念珠菌的溶血性高于白色念珠菌(庐,(,,,，,,,(,,,);,,,细胞计数,,,,个,,,,时，无交互效应(产,(,,,，,,,(,,,)，光滑念珠菌的溶血性高于白色念珠菌(,,,,(,,,，,,,(,,,)。总之，无论是单一感染还是混合感染，无论是,,,细胞计数,,,,个,,,,还是,,,细胞计数,,,,个,,,,，光滑念珠菌的溶血性均高于白色念珠菌。全文结论: ,(在,，,感染者口腔白色念珠菌和光滑念珠菌混合感染时，菌株的磷脂酶和粘附件比在单一感染时要高，说明混合感染时的菌株毒力比单一感染时高，这可能是混合感染时念珠菌病更难治疗的原因之一。 ,(与白色念珠菌相比，,，,感染者,腔光滑念珠菌分离株的粘附件、磷脂酶活性和溶血性均较高，说明光滑念珠菌的毒力比白色念珠菌高，这可能也是白色念珠菌与光滑念珠菌混合感染所致的,,咽念珠菌病比单一白色念珠菌感染更 ,, ? 硕士学位论文难治疗的另一原因。 ,(白色念珠菌和光滑念珠菌三种毒力因素的结果分别不同，两菌种毒力比较的结果也有所不同，这说明粘附性、磷脂酶活性和溶血性是相互独立的。且从结果提示，在念珠菌粘附定植、侵入并进入组织深部过程中，菌株内部和菌种之间的竞争可能逐渐趋于缓和。关键词:,，, 白色念珠菌光滑念珠菌粘附性磷脂酶溶血性 ,,， 硕士学位论文 ，, ,,,,, ,,,,,,, ;, ,, , ,,,,,, ,,,,;,,, ,,, ,,,,,,, ,,,,,,,, ,, ,,, ,,,, ;,,,,, ,, ,，,,,,,,;,,, ,,,,,,,, ,,,,:,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,:,,,,(,, ,,,,—,,,, ,,,,(,,, ,,,, ,,,,,,,, ,，,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,, ,, ,;？,,,,, ,,,,,,,,,,;,,,;, ,,,,,,,,，,, ;,,,,, ,,,,,,, , ,,,,,,,,,;,,,;, ,,,,,(,，,)(,，, ;,,,,,, ,,;,,,;, ,,, ,,,,,,, ,,,，,,,,,,;,,,，,,,,;, ;,,, ,,,,,, ,,,;,,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,，,,,,,, ,, ,,,,, ,,;,,,;,,,,;,,, ,,,,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,;,,,,, ,,, ;,,;,,, ,, ,,, ,,,,(，,, ,, ,，,,, ;,,, ,,, ,,,,, ,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,, ,,;,,,, ,,,,;,,,,,, ,,,，,,,, ,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,;,,,,,，,,,,, ,,,,,,;,,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,, ,,,,，,,,,;,, ,,,,,(，, ,, ,,, ,,,,, ,，,, ,,,,,,, ,,,;, ,,, ;,,,,,,,, ,,,,(，, , ,,,,,,,,,,,,，,,, ,,, ,,, ,,,,,,,, ,,,,, ,, ,，,,(,,, ,,,,,,;,,,,,, ,,,, ,,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,,, ,, ,，,(,,, ,,,, ,,,,,;,,,,, 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